為啥你的細胞不貼壁？遠慕為您解析

1、Word文檔 為啥你的細胞不貼壁？遠慕為您解析 為啥你的細胞不愿貼壁呢？如何促進細胞貼壁？ 依據細胞特性分類1、 懸浮細胞（Suspension Cell）細胞生長不依靠支持物表面，在培育液中呈懸浮狀態(tài)生長，如淋巴細胞。2、 貼壁細胞（Adherent Cell）在動物細胞培育過程中，必需有可以貼附的支持物表面，依靠自身分泌或培育基中的粘附因子才能在該表面生長增殖的細胞。當細胞在該表面生長后，一般形成兩種形態(tài)，即成纖維樣細胞或上皮樣細胞。3、 兼性貼壁細胞有些細胞并不嚴格地依靠支持物，它們既可以貼附于支持物表面生長，但在肯定條件下，也可在培育基中呈懸浮狀態(tài)生長。貼壁細胞分為：上皮細胞型，成纖維

2、細胞型，游走細胞型和多型細胞型，在顯微鏡下觀看時，貼壁細胞在瓶底伸展并延長成梭型或不規(guī)章的三角形或扇形或其他形態(tài)，而且晃動培育液時，細胞不動。常見的貼壁細胞有成纖維細胞、骨骼組織（骨及軟骨）、心肌與平滑肌、肝、肺、腎、乳腺皮膚、神經膠質細胞、內分泌細胞、黑色素細胞以及各種腫瘤細胞等。體外培育貼壁細胞特點貼附并伸展，是多數體外培育細胞的基本生長特點。細胞貼壁的過程使形態(tài)發(fā)生很大變化，細胞形態(tài)轉變是細胞內骨架（真核細胞中的蛋白纖維網架體系，由微管、微絲及中間纖維組成的體系）本身和細胞外基質共同作用的結果。培育細胞在未貼附于底物之前一般均似球體樣，當與底物貼附后，細胞將漸漸伸展而形成肯定的形態(tài)，呈成

3、纖維細胞樣或上皮細胞樣等。細胞附著于底物時并非一種需要能量的過程，一般認為與電荷有關。據資料記載，37時在2min內細胞之間即可形成鍵，該鍵可對0.01%胰蛋白酶起作用且僅發(fā)生于細胞間，細胞與底物之間則無；8min后才有穩(wěn)定的鍵形成。貼壁細胞（除腫瘤細胞外）在體外培育條件下，完成貼壁后均為單層生長，緣由是貼壁細胞有接觸性抑制的特點。一般認為接觸抑制是細胞間的一種識別作用，對于動物細胞的形態(tài)形成與穩(wěn)定具有重要性的作用。由于貼壁細胞的一面是緊貼在培育瓶上的，假如其上方存在細胞與其相粘附，那么下方的細胞很快就會缺乏養(yǎng)分餓死。接觸抑制：1954年，由艾伯克龍比發(fā)覺，一些細胞在生長過程中達到相互接觸時停

4、止分裂現象，將其命名為接觸性抑制（Contact Inhibition），后來證明接觸性抑制普遍存在于貼壁細胞之間。接觸抑制的原理：細胞膜上有糖類和蛋白質共同構成的糖蛋白，也叫做糖被，它在細胞上起識別作用，當細胞增殖到肯定程度，挨在一起時，糖蛋白就會識別這種信號，并且使細胞停止繁殖。細胞為什么要貼壁首先并不是全部的細胞在體外培育的狀況下都會貼壁，但大部分來自實體組織器官的細胞都會貼壁。密度大于培育基的細胞（絕大部分細胞）通過重力作用會沉降在底面上，這是種自然屬性，那么細胞要生存必定得改善這個環(huán)境，也是貼壁的主要緣由-分泌細胞外基質和粘附因子（Extracellular matrix Cell

5、Adhesion Molecules，ECMCAM），改善底面的結構，然后很自然就貼附在底面上了。細胞粘附分子：是眾多介導細胞間或細胞與細胞外間相互接觸和結合分子的統(tǒng)稱。細胞外基質：是由動物細胞合并分泌到胞外、分布在細胞表面或細胞之間的大分子。二者大多數均為糖蛋白，因此具有較強的親水性因此能不能貼壁不僅僅關乎細胞是否有這種力量，也與有無合適的底物（培育瓶）有關。密度小于水的細胞，如脂肪細胞，漂移在液面上，所以不行能貼在底面上，但是假如將培育液加滿，那么細胞能夠與培育瓶上面的壁接觸同樣可以貼壁。因此可以說，細胞貼壁是適應環(huán)境的一種反應。細胞貼壁原理及相關因素大多數的哺乳動物細胞在體內和體外均附著

6、于肯定的底物而生長，在體外時這些底物可以是其他細胞、膠原、玻璃或塑料等。貼壁的過程：細胞首先分泌細胞外基質，這種細胞外基質黏附在支持物的表面（培育瓶，培育皿的底面）。然后，細胞通過其表面表達的黏附因子與這些細胞外基質結合。貼壁過程一些特別的促細胞附著物質（如層粘連蛋白、纖維連接蛋白、型膠原、血清擴展因子等）可能參與細胞的貼附過程。這些促細胞附著因子均為蛋白質，存在于培育液尤其是血清中。在培育過程中，這些帶陽電荷的促貼附因子先吸附于底物上，懸浮的圓形細胞再與已吸附的有促貼附物質的底物附著，以后細胞將伸展成其原來的形態(tài)。所以細胞貼壁與否和細胞本身分泌細胞外基質的力量以及細胞本身表達的黏附分子的數量

7、有關，也與培育皿壁的表面結構有關。細胞不貼壁的一些緣由1. 胰酶消化時間把控不當：消化不夠細胞本身就是成團的；若胰酶處理太久，簡單造成細胞膜蛋白損傷，使細胞貼壁不緊，顯微鏡下觀看立體感不強，嚴峻的時候甚至會造成細胞死亡。2. 缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子，而無血清培育基工藝中由于缺少這種促貼壁因子，細胞的貼壁效果會下降許多。3. 支原體或細菌的污染。4. 培育液配制、儲存不當，如pH值過堿，Gln量太少等緣由。5. 復蘇的細胞本身狀態(tài)不好，已經老化，失去貼附性。6. 接種細胞數目太少，無法分泌足夠的細胞外基質。7. 復蘇時處理速度太慢，復蘇過程不當。如何促進細胞貼壁1. 適度消化細胞：H

8、epG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細胞處理時間可適當放長，一般處理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比較簡單脫落，2min足矣，P19Cl6和293細胞貼壁不緊，可在PBS漂洗后，直接換新奇培育基打散。2. 最好用塑料瓶培育，假如是玻璃瓶,那么可以用鼠尾膠原包被一下培育瓶，或者用鹽酸對培育瓶進行蝕刻，或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA，也可以關心細胞貼附新的培育瓶，細胞不易貼壁，建議加多聚賴氨酸處理。3. 正確配制消化液或培育液。4. 使用合適的細胞外基質或貼壁試劑。5. 復蘇新的細胞，第一周用20%血清關心細胞復原。6. 傳代接種肯定要鋪的勻稱，避開細胞抱團生