DB44-T 2388-2022水稻品種（系）稻瘟病室內(nèi)和田間抗性鑒定與評價技術(shù)規(guī)范

1、ICS65.020CCSB 1544廣東省地方標(biāo)準(zhǔn)DB44/T 23882022水稻品種（系）稻瘟病室內(nèi)和田間抗性鑒定與評價技術(shù)規(guī)范Technical Specification for Identification and Evaluation of Rice Blast Resistance inGreenhouse and Field2022 - 08 - 15 發(fā)布2022 - 11 - 15 實施廣東省市場監(jiān)督管理局發(fā) 布目次前言II范圍1規(guī)范性引用文件1術(shù)語和定義1病原物（稻瘟病菌）1寄主植物（水稻）1鑒定方法2鑒定方法2室內(nèi)苗期葉瘟抗性鑒定2田間成株期穗瘟抗性鑒定4抗性綜合評價5

2、抗性綜合評價依據(jù)5抗性綜合評價標(biāo)準(zhǔn)6抗性鑒定數(shù)據(jù)有效性判別6室內(nèi)人工接種材料的處理6田間自然誘發(fā)病圃材料的處理6匯總報告格式6試驗概況6結(jié)果與分析7附錄 A（規(guī)范性） 稻瘟病田間病圃水稻材料插植布局8附錄 B（規(guī)范性） 水稻品種（系）稻瘟病抗性鑒定與評價數(shù)據(jù)匯總格式9附錄 C（資料性） 稻瘟病病情調(diào)查記錄與田間病圃管理記錄10參考文獻(xiàn)12鑒定材料的處理6前言本文件按照GB/T 1.12020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件由廣東省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并組織實施。本文件由廣東省種植業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（GD/TC 48）歸口。本文件起草單位：廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)

3、研究所。本文件主要起草人：楊健源、汪文娟、朱小源、蘇菁、李傳瑛、韋小燕、陳凱玲、封金琦、陳炳。水稻品種（系）稻瘟病室內(nèi)和田間抗性鑒定與評價技術(shù)規(guī)范范圍本文件規(guī)定了水稻品種（系）稻瘟病室內(nèi)和田間抗性鑒定與評價方法的術(shù)語和定義、鑒定方法、內(nèi)容及時期、調(diào)查方法、抗性綜合評價和匯總報告格式。本文件適用于我省省級水稻品種稻瘟病抗病性鑒定與評價試驗，包括在屬于華南早秈類型區(qū)、華南感光晚秈類型區(qū)的水稻品種同一適宜生態(tài)區(qū)進(jìn)行的區(qū)試、綠色通道、聯(lián)合體及引種等試驗。水稻品種（系） 的抗病性比較、主導(dǎo)品種的抗病性監(jiān)測及抗病資源的篩選等試驗可參照執(zhí)行。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不

4、可少的條款。其中，注日期的引用文件， 僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T 2646-2014 水稻品種試驗稻瘟病抗性鑒定與評價技術(shù)規(guī)程術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。病原物（稻瘟病菌）3.1.1稻瘟病 rice blast由無性型真菌稻梨孢（無性代：Pyricularia oryzae；有性代：Magnaporthe oryzae）所致的水稻病害。主要包括葉瘟、穗瘟。3.1.1.1葉 瘟 leaf blast水稻三葉期后至分蘗盛期，稻苗葉片上發(fā)生的稻瘟病，病菌侵染葉片引起圓形、橢圓形或梭型病斑， 嚴(yán)重時使植株枯死。3.

5、1.1.2穗 瘟 panicle blast水稻抽穗后至成熟期，穗頸、枝梗和谷粒發(fā)生的稻瘟病，病菌侵染稻穗致白穗，或增加空秕率，降低千粒重。3.1.2接種體 inoculum接種體指用于人工接種鑒定用的稻瘟病菌的分生孢子懸浮液。接種體適用范圍為根據(jù)7個中國鑒別品種劃分的ZA、ZB、ZC、ZD、ZE、ZF、ZG群小種。來源：參見全國稻瘟病生理小種聯(lián)合試驗組論文寄主植物（水稻）3.2.1試驗品種（系） testing variety（line）抗病性鑒定參試的水稻品種（系）。3.2.2感病對照品種 susceptible control variety抗病性鑒定時選定的當(dāng)?shù)叵鄳?yīng)熟期感病品種。3.2

6、.3誘發(fā)品種 disease spreader variety在試驗品種（系）和感病對照品種四周種植的用于誘發(fā)稻瘟病發(fā)生的當(dāng)?shù)叵鄳?yīng)熟期高感品種。3.2.4鑒別品種 differential variety中國稻瘟病聯(lián)合試驗組篩選出的7個品種：Tetep、珍龍13、四豐43、東農(nóng)363、關(guān)東51、合江18、和麗江新團(tuán)黑谷。用于鑒別與監(jiān)測稻瘟病菌小種群及其變化的一組水稻品種。來源：參見全國稻瘟病生理小種聯(lián)合試驗組論文3.3 鑒定方法3.3.1抗性鑒定 resistance identification在水稻生長發(fā)育階段，通過室內(nèi)人工接種、田間病圃自然誘發(fā)等方法感染稻瘟病菌，以確定水稻試驗品種（系）

7、對稻瘟病菌的抗感反應(yīng)類型。3.3.1.1室內(nèi)人工接種 greenhouse artificial inoculation通過人工控制適宜的發(fā)病條件，在溫室內(nèi)用接種體進(jìn)行水稻苗期葉片人工噴霧接種?？刹皇芴镩g條件和季節(jié)的限制，常年進(jìn)行試驗。3.3.1.2田間自然誘發(fā)病圃 natural blast nursery在稻瘟病常發(fā)、重發(fā)區(qū)設(shè)立的通過田間自然誘發(fā)方式進(jìn)行水稻苗期和成株期稻瘟病抗病性評價的鑒定圃。與病圃當(dāng)?shù)厮旧a(chǎn)同期進(jìn)行。鑒定結(jié)果能較準(zhǔn)確反映當(dāng)?shù)禺?dāng)時的實際情況，但對氣候、季節(jié)依賴性強(qiáng)。3.3.2鑒定年限 years of evaluation根據(jù)試驗?zāi)康膽?yīng)達(dá)到的最低生產(chǎn)周期要求。3.3.2

8、.1省級品種（系）試驗?zāi)晗?years of provincial testing variety（line）應(yīng)為與區(qū)域試驗同步進(jìn)行的兩個正季生產(chǎn)周期。3.3.2.2其它品種（系）試驗?zāi)晗?years of non-provincial testing variety（line）不做具體要求，可根據(jù)抗性鑒定目的參照進(jìn)行試驗。鑒定方法室內(nèi)苗期葉瘟抗性鑒定采用室內(nèi)人工接種方法對參試材料進(jìn)行水稻苗期葉瘟接種，創(chuàng)造并保持適宜的發(fā)病條件待其充分發(fā)病，然后據(jù)其對接種菌株的抗性頻率確定品種（系）的抗性強(qiáng)弱，簡稱抗譜鑒定。對收集的稻瘟病菌單孢進(jìn)行小種鑒定及歸類。根據(jù)廣東稻作區(qū)稻瘟病菌小種發(fā)生比例，選用不少于

9、60 個有代表性的單孢分離菌株作為接種體進(jìn)行試驗。年度間接種的菌株與小種比例，應(yīng)根據(jù)田間小種群體變化情況作動態(tài)調(diào)整。每個菌株應(yīng)按均一孢子量進(jìn)行單獨接種。接種體制備將單孢分離菌株在酵母淀粉培養(yǎng)基（酵母浸膏 2 g，可溶性淀粉 10 g，瓊脂 15 g20 g，蒸餾水 1000 ml）試管里培養(yǎng) 7 d10 d，挑取直徑為 2 mm 的菌絲塊，轉(zhuǎn)接到玉米粒培養(yǎng)基上擴(kuò)大培養(yǎng)10 d13 d，待菌絲長滿玉米粒，用無菌水洗去玉米粒表面的菌絲，將玉米粒薄鋪于消毒的搪瓷盤中， 上面覆蓋 1 層濕紗布，在日光燈下光照培養(yǎng) 3 d4 d。用無菌水洗下附在玉米粒上的孢子，用 2 層塑料細(xì)紗網(wǎng)隔去玉米殘渣，即為分生

10、孢子懸浮液接種體。以上菌株培養(yǎng)及產(chǎn)孢均在 26 28 下進(jìn)行。在光學(xué)顯微鏡下觀察產(chǎn)孢情況，用血球計數(shù)板測定孢子濃度，用無菌水將孢子懸浮液濃度調(diào)節(jié)至約 2105 個孢子/ml，作為苗期噴霧接種的接種體。接種體應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。水稻苗準(zhǔn)備參試材料經(jīng)浸種、催芽后，每個材料選取發(fā)芽良好的種子 15 粒20 粒，按順序分別穴播于盛有肥沃土壤的育苗盆內(nèi)，穴間距為 3 cm 左右；澆水蓋土，保證正常出苗生長。幼苗應(yīng)生長健壯、一致。接種前 3 d5 d 酌施氮肥，保持稻苗嫩綠以利于發(fā)病。試驗設(shè) 2 次重復(fù)，均為隨機(jī)排列。每盆中分別設(shè)抗感對照各 1 個，通常感病對照品種是廣陸矮 4 號，抗病對照品種是三黃占 2 號。

11、同時播種相應(yīng)接種菌株數(shù)量的鑒別品種一套，供每個接種菌株同時接種，作為本次接種菌株小種號的驗證試驗。稻苗噴霧接種用單菌株接種。參試材料生長至 3 葉4 葉期時移至 25 28 溫室 0.5 d 后進(jìn)行接菌。按 0.8%的體積比濃度在接種體中加入吐溫 20（Tween20），混勻后進(jìn)行噴霧接種。用高壓彌霧（壓力：2.0 Pa，霧滴的體積中值直徑 50 m100 m） 噴霧器將接種體噴灑于稻苗上，接種量以所有葉片上布滿孢子液為限。接種后置于 25 28 的溫室內(nèi)，保持相對濕度 95%以上遮光保濕 24 h；然后去除遮光條件，每天定時噴霧清水 3 次4 次保濕，讓稻苗充分發(fā)病。葉瘟病情調(diào)查調(diào)查時間、部

12、位調(diào)查時間。接種后 7 d10 d。當(dāng)感病對照品種的發(fā)病程度大于等于 7 級時進(jìn)行調(diào)查，共調(diào)查 1 次。調(diào)查部位。參試材料水稻葉片。調(diào)查方法參試材料以發(fā)病最重的稻株的葉片作為其抗性級別。每個參試材料、每個菌株記錄 1 個抗性級別數(shù)值。葉瘟病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)見表 1。調(diào)查數(shù)據(jù)記載參見附錄 C 表 C.1。來源：NY/T 2646-2014 水稻品種試驗稻瘟病抗性鑒定與評價技術(shù)規(guī)程的內(nèi)容，有修改表1 水稻葉瘟病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)葉瘟病級病情抗性類型0無任何癥狀抗病1針頭狀大小褐點2褐點較大，直徑小于1 mm3圓形至橢圓形的灰色病斑，邊緣褐色，直徑1 mm2 mm4典型紡錘形病斑，直徑大于2 mm，通常局

13、限在兩葉脈之間，為害面積小于葉面積的2.0%感病5典型紡錘形病斑，為害面積占葉面積的2.1%10.0%6典型紡錘形病斑，為害面積占葉面積的10.1%25.0%7典型紡錘形病斑，為害面積占葉面積的25.1%50.0%8典型紡錘形病斑，為害面積占葉面積的50.1%75.0%9典型紡錘形病斑，為害面積大于葉面積的75.0%注： 葉片上無葉瘟，但有葉枕瘟發(fā)生的記作5級。室內(nèi)葉瘟抗譜（抗性頻率）計算抗譜（抗性頻率）按式（1）計算。抗譜（抗性頻率）（%）= 抗病菌株數(shù) 接種總菌株數(shù) 100 (1)總抗譜。全部接種菌株的抗性頻率。群抗譜。將接種菌株按鑒別品種劃分的小種群進(jìn)行分組（即 ZA、ZB、ZC、ZD、

14、ZE、ZF、ZG）， 以每個小種群為計算單位，分別計算各群的抗性頻率。田間成株期穗瘟抗性鑒定采用田間病圃自然誘發(fā)方法對參試材料進(jìn)行稻瘟病抗性鑒定試驗。主要進(jìn)行水稻黃熟期穗瘟抗性鑒定試驗，同時觀測分蘗期葉瘟抗性情況。病圃選擇根據(jù)當(dāng)?shù)貧v年的發(fā)病情況，病圃宜設(shè)置在霧露重、寡日照、晝夜溫差大、結(jié)露時間長、土壤肥力中等、排灌方便的田塊。田塊選好后，應(yīng)盡量保全其原生態(tài)環(huán)境，避免小環(huán)境的人為改變。病圃應(yīng)在小種多樣性豐富、代表性好、年度間鑒定結(jié)果穩(wěn)定可靠、可持續(xù)開展試驗的不同水稻生態(tài)區(qū)域進(jìn)行多點設(shè)置。宜在省內(nèi)的粵北、中北、中南和西南稻作區(qū)進(jìn)行合理設(shè)置。若條件允許，病圃宜安裝適當(dāng)?shù)膰娝F設(shè)施以增加相對濕度利于發(fā)

15、病；宜安裝小型氣象自動記錄儀。病圃參試材料插植參試材料經(jīng)浸種、催芽后，按照常規(guī)方法進(jìn)行育秧。約 6 片7 片葉時進(jìn)行移栽。本田每個參試材料栽 5 行，每行 6 穴，每穴 2 棵4 棵基本苗，株行距為 16.6 cm 20.0 cm或按當(dāng)?shù)厣a(chǎn)實際情況進(jìn)行設(shè)置。每幅參試材料四周種植 1 行誘發(fā)品種，使整個病圃菌源量分布均勻，讓每個參試材料都與誘發(fā)品種相鄰，參見附錄 A 圖 A.1。誘發(fā)品種要注意早、遲熟品種的搭配，滿足不同熟期鑒定材料發(fā)病的需要。可使用 CO39（早熟）、廣陸矮 4 號（早熟）、青六矮（中熟）、珍桂矮（中熟）等 2 個3 個品種混合作誘發(fā)品種。不同生育期的參試材料之間應(yīng)栽插 1

16、個感病對照品種。每 10 個參試材料間宜栽插 1 個感病對照品種。試驗設(shè) 2 次重復(fù)，均為隨機(jī)排列。根據(jù)當(dāng)?shù)厣a(chǎn)實際情況，也可以直播。病圃管理播種后須覆蓋農(nóng)膜以防參試材料混亂，防雨水沖刷、防鼠、防鳥。晴天高溫時須揭膜防高溫灼傷秧苗，太陽下山后再蓋，待 2 葉 1 心停止蓋膜，讓秧苗暴露在病圃自然環(huán)境中。施肥量略高于當(dāng)?shù)厣a(chǎn)水平，可在水稻抽穗前 5 d 增施一次氮肥。病圃防蟲不防病。紋枯病嚴(yán)重的田塊，可在分蘗中期、破口期各施井岡霉素 1 次。殺蟲劑的使用根據(jù)病圃內(nèi)害蟲發(fā)生種類和程度而定。田埂的雜草不宜施用除草劑以保護(hù)菌源環(huán)境，以利于維持病圃發(fā)病壓力年度間穩(wěn)定。其余均同當(dāng)?shù)爻Ｒ?guī)生產(chǎn)管理。病圃管理基

17、本情況數(shù)據(jù)記載參見附錄C 表 C.2。病圃病情調(diào)查調(diào)查時間、部位4.2.4.1.2 病圃穗瘟。在水稻黃熟期（約 80%穗尖端谷粒成熟時），對參試材料的稻穗進(jìn)行病情調(diào)查。生育期不同的參試材料應(yīng)分批進(jìn)行調(diào)查。調(diào)查方法病圃葉瘟。每個參試材料隨機(jī)調(diào)查不少于 15 株，以發(fā)病最重的稻株的葉片作為其抗性級別。共調(diào)查 1 次。調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)見表 1。病圃穗瘟。每個參試材料進(jìn)行棋盤式隨機(jī)調(diào)查稻穗 100 穗，記錄 100 個數(shù)據(jù)，共調(diào)查 1 次。穗瘟病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)見表 2。調(diào)查數(shù)據(jù)記載參見附錄 C 表 C.3。表2 水稻穗瘟病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)5 抗性綜合評價抗性綜合評價依據(jù)抗性綜合評價以室內(nèi)葉瘟抗譜鑒定和田間病圃穗

18、瘟鑒定的結(jié)果為依據(jù)。病圃葉瘟。在水稻分蘗盛期，當(dāng)感病對照品種的發(fā)病程度大于等于 7 級（高感）時，對參試材料的葉片進(jìn)行病情調(diào)查。穗瘟病級病情0無任何癥狀1僅個別枝梗（含第二次枝梗、第一次枝梗）發(fā)病，谷粒飽滿3僅穗主軸上部發(fā)病，約1/3枝梗（主要為第一次枝梗）發(fā)病，谷?；撅枬M5穗主軸中下部（接近但未達(dá)穗頸基部）發(fā)病，谷粒半癟7穗頸基部發(fā)病，大部分癟谷，每穗損失50%以下9穗頸基部發(fā)病，大部分癟谷或白穗，每穗損失50%以上室內(nèi)葉瘟抗譜鑒定依據(jù)為總抗譜數(shù)據(jù)（即全部接種菌株的抗譜）。ZB、ZC 等優(yōu)勢小種群的葉瘟抗譜和田間病圃的葉瘟數(shù)據(jù)可作為評價參考。田間病圃穗瘟鑒定依據(jù)為各個鑒定病圃穗瘟病級數(shù)據(jù)的

19、算術(shù)平均值。5.2 抗性綜合評價標(biāo)準(zhǔn)稻瘟病抗性綜合評價標(biāo)準(zhǔn)見表3。將水稻品種（系）劃分為高抗、抗、中抗、中感、感和高感共6 個類型。表3 水稻稻瘟病抗性綜合評價標(biāo)準(zhǔn)田間病圃穗瘟病級a室內(nèi)葉瘟總抗譜（%）稻瘟病綜合評價b0.03.095.0高抗90.094.9抗90.0中抗3.15.090.0中抗90.0中感5.16.980.0中感80.0感7.09.080.0感80.0高感a 為各個田間病圃穗瘟病級數(shù)據(jù)的算術(shù)平均值。b 分為高抗、抗、中抗、中感、感和高感共 6 個類型?？剐澡b定數(shù)據(jù)有效性判別葉瘟。當(dāng)感病對照品種發(fā)病程度大于等于 7 級，其余鑒定材料為不同程度的病情反應(yīng)時，該組抗性鑒定數(shù)據(jù)有效。

20、穗瘟。當(dāng)感病對照品種穗瘟發(fā)病率大于等于 25%，其余鑒定材料為不同程度的病情反應(yīng)時，該組抗性鑒定數(shù)據(jù)有效。田間自然誘發(fā)病圃。病圃因異常氣候影響等原因?qū)е抡T發(fā)強(qiáng)度過低，則該批次抗性鑒定數(shù)據(jù)無效，該病圃點的數(shù)據(jù)不計入算術(shù)平均數(shù)作為評價依據(jù)。但可以作為分析該品種（系）稻瘟病抗性鑒定年度間趨勢時的參考。6 鑒定材料的處理室內(nèi)人工接種材料的處理應(yīng)將接種后剩余的接種體、調(diào)查后的稻苗作滅菌處理。田間自然誘發(fā)病圃材料的處理應(yīng)將調(diào)查后的稻株進(jìn)行無害化處理。7 匯總報告格式7.1 試驗概況概述試驗?zāi)康?、鑒定材料、鑒定方法與評價標(biāo)準(zhǔn)、栽培管理、鑒定單位與主要技術(shù)人員、鑒定日期等基本情況。結(jié)果與分析根據(jù)感病對照品種監(jiān)

21、測結(jié)果闡明該批次(年度)抗性鑒定結(jié)果的有效性，再列出相應(yīng)的數(shù)據(jù)表， 簡要分析評價各參試品種（系）的抗性表現(xiàn)。最后按照高抗、抗、中抗、中感、感和高感等 6 個類型對參試水稻品種（系）的稻瘟病抗性做出定性評價。省級品種抗性鑒定試驗須符合鑒定年限的要求。年度間抗性綜合評價出現(xiàn)差異且都有效的情況下，以抗性差的結(jié)果作為綜合評價最終結(jié)果。水稻稻瘟病抗性鑒定與評價結(jié)果匯總格式見附錄B 表 B.1。A A附 錄 A（規(guī)范性）稻瘟病田間病圃水稻材料插植布局a 參試材料。每個參試材料栽 5 行，每行 6 穴，每穴 2 棵4 棵基本苗，株行距為 16.6 cm 20.0 cm 或按當(dāng)?shù)厣a(chǎn)實際情況進(jìn)行設(shè)置。b 誘發(fā)

22、材料。每幅參試材料四周種植 1 行誘發(fā)品種，讓每個參試材料都與誘發(fā)材料相鄰。c 田塊四周誘發(fā)行。根據(jù)田塊實際情況，在其四周栽 5 行以上誘發(fā)材料。圖A.1 稻瘟病田間病圃水稻材料插植布局示意圖B B附 錄 B（規(guī)范性）水稻品種（系）稻瘟病抗性鑒定與評價數(shù)據(jù)匯總格式表B.1 水稻品種（系）稻瘟病抗性鑒定與評價結(jié)果表編號品種（系）室內(nèi)葉瘟抗譜田間病圃病級稻瘟病抗性綜合評價優(yōu)勢小種群抗譜（%）總抗譜（%）葉瘟穗瘟穗瘟最高級ZB群ZC群RB001名稱00190.0100.094.01.62.65抗RB002名稱002RB003名稱003RB004名稱004RB005名稱005注1：病圃葉瘟、穗瘟試驗數(shù)

23、據(jù)為各病圃病級算術(shù)平均值。穗瘟最高級為某個病圃的單獨具體數(shù)據(jù)，綜合評價時可作參考。注2：綜合評價的抗性水平類型分為高抗、抗、中抗、中感、感和高感共6個級別。C C附 錄 C（資料性）稻瘟病病情調(diào)查記錄與田間病圃管理記錄表C.1 水稻室內(nèi)苗期葉瘟病情調(diào)查記載表播種日期調(diào)查日期調(diào)查人記錄人菌株號小種號編號品種名稱葉瘟病級備注aa 因栽培管理等原因，若稻苗出現(xiàn)明顯黃化、徒長、枯死等情況。表C.2 稻瘟病田間病圃水稻農(nóng)事操作基本情況記載表病圃名稱地點經(jīng)緯度海拔記錄人水稻生育期記載農(nóng)事操作記載田間編號品種名稱播種期移栽期始穗期齊穗期黃熟期日期施肥情況施藥情況特殊天氣注： 特殊天氣指大雨、冷熱、大風(fēng)等極端天氣情況。病圃應(yīng)配備溫濕度計，有條件的宜配備簡易小氣候自動記錄儀。表C.3 稻瘟病田間病圃病情調(diào)查記載表病圃名稱地點調(diào)查人記錄人調(diào)查日期田間編號品種名稱葉瘟病級穗瘟病級BN01品種01葉1葉2葉3穗1穗2穗3穗4穗5