高效液相色譜法測(cè)定銀芍顆粒中綠原酸的含量

1、高效液相色譜法測(cè)定銀芍顆粒中綠原酸的含量【摘要】目的建立銀芍顆粒中綠原酸的含量測(cè)定方法。方法采用高效液相色譜法測(cè)定該藥中綠原酸的含量,色譜條件：AgilentZBAXSB-18(2503.0，5)色譜柱,乙腈0.4%磷酸水溶液991為流動(dòng)相；流速：1.0lin-1；檢測(cè)波長(zhǎng)327n。結(jié)果綠原酸濃度范圍在0.00250.04g之間峰面積與濃度線性關(guān)系良好，r=0.9999，平均回收率99.6%,RSD=1.07%。結(jié)論該方法準(zhǔn)確、可靠、專(zhuān)屬性強(qiáng),可用于銀芍顆粒的質(zhì)量控制。【關(guān)鍵詞】銀芍顆粒綠原酸高效液相色譜法Abstrat：bjetiveTestablishaethdfrdeterinatinf

2、thententfhlrgeniaidinYinshaGranulebyHPL.ethdsThententfhlrgeniaidinYinshaGranuleasdeterinedbyHPL.ThehratgraphinditinsereAgilentZBAXSB-18(2503.0，5)asanalytilun,aetnitrile-0.4%phsphriaid(991)asbilephase,theflrateas1.0lin-1，andthedetetinavelengthasat327n.ResultsThelinearityfhlrgeniaidasgdintherangef0.00

3、250.04g,r=0.9999.Theaveragereveryas99.6%,andRSDas1.07%.nlusinTheHPLethdisaurate,reliable,speifi,andanbeusedfrthequalityntrlfYinshaGranule.Keyrds：YinshaGranule；hlrgeniaid；HPL銀芍顆粒是由金銀花、赤芍、大血藤、天花粉、皂角刺、地榆等10味中藥材，具有解熱止痛、活血消腫的成效。臨床用于治療急、慢性化膿性骨髓炎、關(guān)節(jié)炎、膿腫疔痛等。方中金銀花的主要成分為綠原酸,鑒于銀芍顆粒尚未建立定量的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。為了有效控制銀芍顆粒的質(zhì)量，建立了

4、高效液相色譜法測(cè)定綠原酸的含量13。1儀器與試藥1.1儀器DINEX-P680高效液相色譜儀；AT-201電子分析天平d=0.01g，瑞士；AgilentZBAXSB-18(2503.0，5)色譜柱。1.2試劑與藥品綠原酸對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)110753-202213；銀芍顆粒(銀芍顆粒由華中科技大學(xué)協(xié)和醫(yī)院藥劑科自制，批號(hào)20221105,20221107,20221108，20221110，20221112)。乙腈色譜純，上海凌峰化學(xué)試劑，磷酸色譜純，上海凌峰化學(xué)試劑，水為雙蒸水，其它試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件AgilentZBAXSB-18(2503.0

5、，5)色譜柱；流動(dòng)相為乙腈0.4%磷酸水溶液991(V/V)；檢測(cè)波長(zhǎng)為327n；流速1.0lin-1；進(jìn)樣量10l；柱溫為30；理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于5000。2.2溶液的制備2.2.1對(duì)照品溶液的制備精細(xì)稱(chēng)取經(jīng)五氧化二磷減壓枯燥器中枯燥的綠原酸對(duì)照品適量，置1l棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每毫升中含綠原酸2.5g的對(duì)照品溶液。2.2.2供試品溶液的制備取銀芍顆粒適量，研細(xì)，取1.5g，精細(xì)稱(chēng)定，置棕色具塞錐形瓶中，精細(xì)參加50%甲醇50l，密塞，放置15in，取續(xù)濾液，置棕色具塞錐形瓶中，即得。2.2.3陰性溶液的制備按處方比例和工藝，制成不含金銀花藥材的陰性樣品，

6、按“供試品溶液的制備制備方法，同法制成陰性對(duì)照溶液。2.3陰性干擾實(shí)驗(yàn)分別精細(xì)汲取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖(見(jiàn)圖13。結(jié)果說(shuō)明，供試品色譜圖中，在與對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上有一樣的色譜峰，主峰與其它色譜峰到達(dá)基線別離，陰性對(duì)照無(wú)干擾。2.4線性關(guān)系的考察分別精細(xì)汲取綠原酸對(duì)照品溶液1.0，2.0，4.0，8.0，16.0l，依次注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積值為縱坐標(biāo)，計(jì)算得線性回歸方程為：Y=5386.1377X+3.2912,r=0.9999。結(jié)果說(shuō)明，綠原酸進(jìn)樣量在0.00250.04g濃度范圍內(nèi)與吸收

7、峰峰面積值呈良好的線性關(guān)系。2.5精細(xì)度考察精細(xì)汲取對(duì)照品溶液10l，按上述色譜條件注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積分別為162.1801，161.9542，163.0421，162.8744，160.9808。RSD為0.51%，說(shuō)明儀器性能良好。2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液按上述色譜條件，于0，3，6，9，12，24h按上述色譜條件各進(jìn)樣1次，測(cè)定峰面積，分別為141.0038，139.0754，136.0631，135.2203，135.0439，132.2222。結(jié)果RSD為2.30%，說(shuō)明測(cè)定時(shí)間內(nèi)供試品穩(wěn)定。2.7重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱(chēng)取同一批號(hào)的銀芍顆粒樣品(批號(hào)20221

8、105)共5份，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件注入液相色譜儀，結(jié)果5次綠原酸的含量為0.00547%，0.00552%，0.00580%，0.00537%，0.00562%。RSD為2.94%，說(shuō)明方法重現(xiàn)性良好。2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)取含量同一批號(hào)的銀芍顆粒樣品(批號(hào)20221105)，研細(xì)，精細(xì)稱(chēng)取6份，0.75g/份，分別置量瓶中,參加一定量的綠原酸對(duì)照品，按“供試品溶液的制備項(xiàng)下的方法依法制備，按上述色譜條件依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。加樣回收率為99.6%，RSD為1.07%。說(shuō)明本法回收率良好,可用于銀芍顆粒中綠原酸的含量測(cè)定。表1加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果略2.9樣品的測(cè)定取

9、5批銀芍顆粒，依法制備供試品溶液，分別精細(xì)汲取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10l，注入液相色譜儀，記錄綠原酸峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。表25批銀芍顆粒樣品綠原酸含量測(cè)定結(jié)果略3討論銀芍顆粒中金銀花為君藥，綠原酸為金銀花中的主要活性成分,具有抑菌消炎的作用,本文建立了銀芍顆粒中綠原酸的高效液相色譜測(cè)定法。該法簡(jiǎn)便、靈敏、重現(xiàn)性好，可作為銀芍顆粒的質(zhì)量控制指標(biāo)。綠原酸溶液性質(zhì)不穩(wěn)定,遇光易分解,需要避光保存。故在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)照品溶液以及供試品溶液的制備、提取和分析中應(yīng)使用棕色量瓶,盡量避光操作。通過(guò)使用不同的流動(dòng)相進(jìn)展測(cè)試，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相中的pH值對(duì)別離效果影響較大，而本品使用本文中的流動(dòng)相比例，別離效果最正確。【參考文獻(xiàn)】1國(guó)