核酸檢測技術(shù)在HBVHCVHIV臨床診斷中的應(yīng)用-李望豐

1、2018-5-14目錄一、法規(guī)對(duì)核酸檢測技術(shù)的具體需求三、如何實(shí)現(xiàn)核酸高敏檢測核酸檢測技術(shù)在HBV/HCV/HIV臨床診斷中的應(yīng)用四、核酸高敏關(guān)鍵技術(shù)介紹五、 HBV高敏核酸檢測在臨床中的應(yīng)用六、 HCV高敏核酸檢測在臨床中的應(yīng)用七、 HIV高敏核酸檢測在臨床中的應(yīng)用八、TB核酸檢測產(chǎn)品性能介紹報(bào)告人：李 望 豐一、法規(guī)對(duì)核酸檢測技術(shù)的具體要求一、法規(guī)對(duì)核酸檢測技術(shù)的具體要求2015 慢性乙型肝炎防治指南（2015 年更新版）中指出：艾滋病診療指南第三版(2015版) 中指出：慢性乙肝感染診斷：既往有乙型肝炎病史或 HBsAg陽性超過6個(gè)月，現(xiàn)HBsAg和（或）HBV DNA仍為陽性者，可診斷

2、為慢性HBV感染。 HIV診斷：成人及18個(gè)月齡以上兒童，符合下列一項(xiàng)者即可診斷：(1) HIV抗體篩查試驗(yàn)陽性和HIV補(bǔ)充試驗(yàn)陽性(抗體補(bǔ)充試驗(yàn)陽性或核酸定性檢測陽性或核酸定量大于5000拷貝/mL)；隱匿性慢性乙肝診斷：血清 HBsAg陰性，但血清和（或）肝組織中 HBV DNA陽性，并有慢性乙型肝炎的臨床表現(xiàn)。隱匿性慢性乙肝診斷主要通過HBV DNA檢測?？共《局委煟嚎共《局委煹倪m應(yīng)癥主要根據(jù) 血清HBV DNA水平、血清ALT和肝臟疾病嚴(yán)重程度來決定。接受抗病毒治療需同時(shí)滿足以下條件：(2) 分離出HIV病毒。18個(gè)月齡及以下兒童，符合下列一項(xiàng)者即可診斷：(1) HIV感染母親所生和H

3、IV病毒分離試驗(yàn)結(jié)果陽性；(2) 為HIV感染母親所生和兩次HIV核酸檢測均為陽性。（1）HBV DNA水平：HBeAg 陽性患者，HBV DNA 20 000 IU/mL （相當(dāng)于105 拷貝/ml ）；HBeAg陰性患者，HBV DNA 2000 IU/mL （相當(dāng)于104 拷貝/m l ）；抗病毒治療監(jiān)測在抗病毒治療過程中要定期進(jìn)行臨床評(píng)估和實(shí)驗(yàn)室檢測。(1) 病毒學(xué)指標(biāo)：抗病毒治療后， 血漿病毒載量4周內(nèi)應(yīng)下降1個(gè)lg以上，在治療后的36個(gè)月病毒載量應(yīng)達(dá)到檢測不到的水平。2015 丙型肝炎防治指南（2015年更新版）中指出：推薦意見：在接受 PEG-IFN 聯(lián)合利巴韋林治療過程中應(yīng)根據(jù)

4、治療中病毒應(yīng)答進(jìn)行個(gè)體化治療。治療前、治療 4 周、12 周、24 周應(yīng)采用高靈敏度方法監(jiān)測 HCV RNA 評(píng)估病毒應(yīng)答以指導(dǎo)治療。(2) 免疫學(xué)指標(biāo)：CD4 T淋巴細(xì)胞數(shù)與治療前相比增加了 30%或在治療后1年CD4 T淋巴細(xì)胞數(shù)增長100個(gè)/uL，提示治療有效。(3) 臨床癥狀：反映抗病毒治療效果的最敏感的一個(gè)指標(biāo)是體重增加，對(duì)于兒童可觀察身高、營養(yǎng)及發(fā)育改善情況。一、法規(guī)對(duì)核酸檢測技術(shù)的具體要求二、核酸檢測關(guān)鍵技術(shù)介紹1、核酸定量PCR關(guān)鍵技術(shù)：中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) YY/T 1182-2010核酸純化技術(shù)、PCR或RT-PCR擴(kuò)增技術(shù)、引物和探針設(shè)計(jì)技術(shù)、內(nèi)標(biāo)技術(shù)、假病毒制備技

5、術(shù)、關(guān)鍵設(shè)備整合技術(shù)等。對(duì)體外診斷用HIV、HBV、HCV核酸擴(kuò)增檢測試劑盒產(chǎn)品設(shè)計(jì)的要求：a）在產(chǎn)品設(shè)計(jì)中，應(yīng)加入全程參與的內(nèi)標(biāo)；b) 在擴(kuò)增檢測前，樣品（含質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品）應(yīng)進(jìn)行核酸提取、純化；c）核酸加樣體積不小于 20l；總反應(yīng)體積不小于 40l。1、核酸純化2、探針/引物設(shè)計(jì) HBV DNA定量試劑技術(shù)審評(píng)指導(dǎo)原則中指出：a）HBV DNA建議最低檢測限應(yīng)30 IU/mL。b）DNA提取純化方法不建議采用煮沸法進(jìn)行 DNA提取。4、內(nèi)標(biāo)擴(kuò)增技術(shù)3、PCR或RT-PCR擴(kuò)增技術(shù)12018-5-14二、核酸檢測關(guān)鍵技術(shù)介紹二、核酸檢測關(guān)鍵技術(shù)介紹v關(guān)鍵技術(shù)一：核酸純化技術(shù)純化方法發(fā)展歷程

6、：糖原沉淀法、一步法、膜柱法和磁珠法糖原沉淀法：沉淀DNA或RNA的輔助沉淀劑一步法：一種非常簡單的樣本處理方式。核酸釋放劑樣本PCR反應(yīng)液上機(jī)檢測10010分鐘離心10分鐘加入糖原樣品糖原沉淀法一步法100 l血清樣本+溶液A12000 rpm 離心10分鐘5 l血清樣本+5 l核酸釋放劑優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)過程最簡單，能實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)過程簡單，試劑種類少?zèng)]有核酸純化除雜過程。復(fù)雜樣本易出現(xiàn)假陰性和靶值偏低。B有核酸富集過程，沒有核酸純化除雜過程。樣本雜質(zhì)多，影響檢測精度。加入溶液40 l PCR加入反應(yīng)液煮沸10分鐘12000 rpm 離心10分鐘取上清PCR檢測離心10分鐘PCR檢測二、核酸

7、檢測關(guān)鍵技術(shù)介紹二、核酸檢測關(guān)鍵技術(shù)介紹磁珠法：核酸回收效率高、樣本適用范圍廣、提取設(shè)備可選擇范圍廣、國內(nèi)外主流核酸純化技術(shù)。 原 理：利用核酸膠體在離液鹽（異硫氰酸胍，鹽酸胍）的環(huán)境下，與磁珠表面羥基形成陽離子橋，然磁粒的類型：按需要包被不同材料，選擇不同的官能團(tuán)， -OH，-COOH等后通過分離磁珠獲得純化的核酸樣本。磁粒的面積：與顆粒大小和數(shù)量有關(guān)理化性質(zhì)：超順磁（磁響應(yīng)快），單分散/多分散（顆粒均一，比表面積大）1%w/v(10mg/ml)的微粒直徑（M）表面積cm2數(shù)量(109)1455130.050.100.501.01142857141143714純化過程：18189145.51

8、18.19樣本裂解磁珠結(jié)合RNA清洗磁珠5.01270.1455加入洗脫液東北制藥：400ul血樣，0.5M直徑，加入20l Beads，其比表面積約為20cm2純化的RNARNA與磁珠分離注： 可隨意放大體積，血樣承載量易調(diào)整二、核酸檢測關(guān)鍵技術(shù)介紹二、核酸檢測關(guān)鍵技術(shù)介紹v關(guān)鍵技術(shù)二：擴(kuò)增系統(tǒng)膜柱法：核酸回收效率較高、自動(dòng)化設(shè)備較少、少數(shù)幾家公司采用的核酸純化技術(shù)。特點(diǎn)3特點(diǎn)1定量準(zhǔn)確，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行對(duì)數(shù)分析，更好的試劑穩(wěn)定性和重復(fù)性。操作簡便、快捷、結(jié)果準(zhǔn)確，無需 PCR后處理，方便了臨床上的應(yīng)用特點(diǎn)4特點(diǎn)2高靈敏度、高特異性、更寬的動(dòng)力學(xué)定量范圍?？垢蓴_能力強(qiáng)。臨床樣本適應(yīng)性強(qiáng)。方

9、法介紹：膜的類型：凝膠或者硅膜等；承載量：與凝膠面積（理論值）成正比： 膜直徑：0.71.5厘米，S0.83.5平方厘米；缺點(diǎn)：可利用吸附面積小，承載量有限。22018-5-14二、核酸檢測關(guān)鍵技術(shù)介紹二、核酸檢測關(guān)鍵技術(shù)介紹v關(guān)鍵技術(shù)三：內(nèi)標(biāo)v關(guān)鍵技術(shù)四：假病毒技術(shù)內(nèi)標(biāo)： 人工合成的小片段DNA或假病毒，放在反應(yīng)液中和待測目的基因一起擴(kuò)增。內(nèi)標(biāo)是 PCR方法檢測疾病假病毒制備技術(shù)：解決了工作標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品的長期儲(chǔ)存和穩(wěn)定性的問題。基因的必需成分，內(nèi)標(biāo)對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程，包括樣品提取、分裝、 PCR熱循環(huán)儀孔間差、PCR抑制元素等等可能的影響因素進(jìn)行監(jiān)控，防止假陰性，提高 PCR檢測準(zhǔn)確性。HIV

10、 IC片段v非競爭性內(nèi)標(biāo)基本原理：目的基因引物目的基因探針大腸桿菌表達(dá)55內(nèi)標(biāo)引物內(nèi)標(biāo)探針1(BP)3與目的基因使用不同的引物。噬菌體RNA噬菌體改造的表達(dá)載體表達(dá)的假病毒顆粒擴(kuò)增產(chǎn)物序列與目的基因不同，可用不同的探針檢測。假病毒制備過程介紹內(nèi)標(biāo)檢測效果對(duì)比核酸酶攻擊實(shí)驗(yàn)37加速實(shí)驗(yàn)測試二、核酸檢測關(guān)鍵技術(shù)介紹三、HBV高敏核酸檢測的臨床意義1、乙型肝炎病毒感染情況v 關(guān)鍵技術(shù)五：自動(dòng)化整合技術(shù)試劑和設(shè)備匹配性：試劑步驟簡單、通用性好、與設(shè)備的匹配性高。中國是一個(gè)乙肝大國全世界有3.5億慢性攜帶者每年有一百萬人死于HBV感染，是全球范圍內(nèi)第9位死因中國：有1.2億乙肝病毒攜帶者，其中3000萬

11、是慢性乙肝患者，50%70%的人受過感染。核中國感染人數(shù)其余地區(qū)感染人數(shù)酸純化檢測根據(jù)2014年全國血清流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果三、HBV高敏核酸檢測的臨床意義三、HBV高敏核酸檢測的臨床意義2、HBV DNA對(duì)乙型肝炎診療的臨床意義 抗病毒治療的用藥指導(dǎo)和療效監(jiān)控對(duì)乙肝兩對(duì)半起補(bǔ)充作用HBV DNA定量值是抗病毒治療終點(diǎn)的重要指標(biāo)。我國新版指南建議的陰性或臨床治愈標(biāo)準(zhǔn)由1000IU/ml變?yōu)?00IU/ml，而國際通用標(biāo)準(zhǔn)為6080IU/ml，WHO標(biāo)準(zhǔn)為612IU/ml。用于判定HBV復(fù)制水平可檢測出隱匿性慢性乙型肝炎血清（漿）HBV DNA含量高，反映病毒復(fù)制活躍HBV DNA定量值是抗病毒治療

12、過程用藥指導(dǎo)關(guān)鍵指標(biāo)。檢測頻次為36月一次，直至整個(gè)療程結(jié)束。抗病毒藥物治療療效監(jiān)測預(yù)后隨訪最有價(jià)值的檢測指標(biāo)。用于判定患者的傳染性將HBV DNA病毒載量盡可能控制在10-15 IU/ ml，能有效防止復(fù)發(fā)和預(yù)防肝細(xì)胞癌化。 HBV DNA病毒載量的高低與乙肝病毒傳染力成正相關(guān) 對(duì)隱匿性乙肝及其他疑難病例的診斷10/mL10/mL10/mL強(qiáng)弱10/mL10/mL量幾乎沒有10/mL測定次數(shù)抗病毒治療的動(dòng)態(tài)觀察32018-5-14三、HBV高敏核酸檢測的臨床意義三、HBV高敏核酸檢測的臨床意義中國肝病協(xié)會(huì)2015-慢性乙肝患者管理流程圖HBsAg陽性不治療但應(yīng)檢測，無論大三陽還是小三陽都要進(jìn)

13、行DNA載量檢查需治療和HBV DNA的載量療程監(jiān)控不治療但應(yīng)檢測，1000 IU/ml以下可有效控制復(fù)發(fā)和肝硬化。需治療HBV DNA陰性（連續(xù)三次每次間隔大于3個(gè)月）HBV DNA陽性否是肝硬化？HBV攜帶者慢性乙肝攜帶者再活動(dòng)期3169copies/ml每612個(gè)月：血常規(guī)、生物化學(xué)、病毒學(xué)、 超等HBV DNA病毒載量盡可能小于或等于10 IU/ ml。HBeAg 陽性患者：HBV DNA20 000IU/mlHBeAg陰性患者：HBV DNA2000IU/ml立即啟動(dòng)抗病毒治療AFPB持續(xù)監(jiān)測ALT終點(diǎn)ALT持續(xù)正常但同時(shí)存在：12ULN2ULNll肝硬化，肝癌家族史年齡大于30歲排

14、除ALT升高的其他原因?qū)τ谒蠬BsAg/HBV DNA陽性患者，應(yīng)每6個(gè)月篩查干細(xì)胞肝癌：持續(xù)波動(dòng)（12ULN）三個(gè)月以上ll持續(xù)3個(gè)月ALT2ULN以上應(yīng)啟動(dòng)抗病毒治療隨訪過程中出現(xiàn)肝功能失代償，應(yīng)立即啟動(dòng)抗病毒治療llB超AFP歐洲肝病研究學(xué)會(huì)EASL2010年指南指出：將HBV DNA病毒載量盡可能控制在10-15 IU/ ml，能有效防止疾病的復(fù)發(fā)應(yīng)考慮肝組織學(xué)檢查及無創(chuàng)肝組織化診斷l(xiāng)l存在明顯的炎癥或纖維化時(shí)啟動(dòng)抗病毒治療證據(jù)不足時(shí)，持續(xù)監(jiān)測慢性乙型肝炎防治指南（2015 年版）三、HBV高敏核酸檢測的臨床意義三、HBV高敏核酸檢測的臨床意義國際治療慢性乙肝線路-以NAs治療為例H

15、BV-DNA載量的臨界值和臨床意義慢性乙型肝炎防治指南（2015 年版）CHB和建議進(jìn)行抗病毒治療的臨界值確定抗病毒治療的HBV-DNA基線，即初始檢測值HBV-DNA20000HBV-DNA基線水平檢測啟動(dòng)治療療程開始的第12周、48周各檢測一次HBV DNA評(píng)估療效，每36個(gè)月檢測一次，直至治療結(jié)束20000HBV-DNA判斷藥物療效的重要指標(biāo)，log10為變化單位，HBV-DNA較基線水平下降1log/mlWeek12：鑒別原發(fā)性無應(yīng)答Week24：療效早期預(yù)測2000推薦應(yīng)用高敏PCR檢測，0.5logHBV DNA變化能更有效評(píng)估藥效療程監(jiān)控抗病毒治療臨界值，低水平不等于肝病沒有進(jìn)展

16、，約有15%的隱形HBV患者DNA載量1000，因此推薦高敏實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測對(duì)于低載量CHB，每36個(gè)月檢測一次進(jìn)行監(jiān)控。HBV-DNA2000HBV-DNA LLDHBV DNA 60IU/ml完全應(yīng)答HBV DNA ：602000IU/ml部分應(yīng)答HBV DNA 2000IU/ml不充分應(yīng)答WHO 指南：6080IU/ml持續(xù)治療檢測HBV DNA /6個(gè)月增加藥物治療檢測HBV DNA /3個(gè)月Keeffe指南：60IU/ml增加/更換有效的藥物治療檢測HBV DNA /6個(gè)月至少隨訪一年，每3個(gè)月HBVDNA檢測，可有效預(yù)防復(fù)發(fā)和肝硬化。EASL：6080IU/mlAASLD：6

17、0IU/ml中國：100IU/ml由美國坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)中心Keeffe教授（專家組）提供三、HBV高敏核酸檢測的臨床意義三、HBV高敏核酸檢測的臨床意義慢性乙肝各個(gè)感染期的分析慢性乙肝各個(gè)感染期的檢查指標(biāo)PEG-IFN核苷類似物telbivudine核苷類似物HBV DNALLD 6-12IU/ml拉米夫定LamivudineHBsAg（6個(gè)月）ALTHBeAgAnti-HBePEG-IFN-2a PEG-IFN-2aentecaviradefovirtenofovirHBeAg陰性慢性乙肝患者的治療HBeAg陽性免疫耐受期正常陽性陰性1109-12IU/mL劑量180g19-100mg72-7

18、3600mg880.5mg9010mg51-63300mg93HBeAg陽性慢性乙肝升高陽性陰性陰性+/-陰性陽性陽性+/-2000IU/mLHBV DNA6080IU/mL（%）免疫清除期慢性乙肝HBeAg陰性慢性乙肝HDV正常升高（持續(xù)或兼續(xù)的）升高2000IU/mLALT復(fù)常（%）594-71-79074078072-7707602000IU/mLHBsAg 轉(zhuǎn)陰（%）陰性/低HBeAg陽性慢性乙肝患者的治療陰性/低（HCV RNA-陽性）劑量180g32100g29100mg16-18600mg220.5mg2110mg12-18245mg21HCV合并感染HIV合并感染升高/正常升高

19、/正常+/-+/-+/-+/-HBeAb血清學(xué)轉(zhuǎn)換高HBV DNA6080IU/mL（%）14736-44606713-2176ALT復(fù)常（%）41332741-720-17768248-540683根據(jù)不同地區(qū)的基因型，HBV DNA載量檢測用于是否啟動(dòng)HBeAg陽性和陰性的慢性乙肝患者的治療。一般的原則為 EASL 推薦白種人的治療起點(diǎn)為2103IU/mL（30歲），APASL和AASLD推薦亞洲人的治療起點(diǎn)為：2104IU/mL（40歲）HBsAg 轉(zhuǎn)陰（%）0.542018-5-14三、HBV高敏核酸檢測的臨床意義四、HCV高敏核酸檢測的臨床意義高敏HBV-DNA檢測的重要性的專家意見

20、根據(jù)WHO 的估計(jì)，全球HCV 感染率約為2.8%，約1.85 億人感染HCV，每年因HCV 感染導(dǎo)致的死亡病例約35 萬例。新指南的一大亮點(diǎn)是第一次提出“臨床治愈”：對(duì)于部分適合的患者應(yīng)盡可能追求臨床治愈，即獲得持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答（停止治療后血清HBV DNA持續(xù)低于檢測下限）、HBsAg陰轉(zhuǎn)或伴有抗-HBs轉(zhuǎn)陽、ALT正常、肝臟組織學(xué)輕微或無病變。莊輝院士強(qiáng)調(diào)：“實(shí)現(xiàn)臨床治愈的關(guān)鍵是科學(xué)的檢測與監(jiān)測。通過治療前的基線檢測結(jié)果確定個(gè)體化診療方案（即基線特征指導(dǎo)治療）；在治療12周、24周進(jìn)行檢測，判斷患者應(yīng)答好壞從而調(diào)整治療方案（即應(yīng)答指導(dǎo)治療）；在療程結(jié)束后，通過檢測來判定是否達(dá)到停藥標(biāo)準(zhǔn)；而

21、停藥后則需要每 3個(gè)月、6個(gè)月進(jìn)行監(jiān)測，確定是否復(fù)發(fā)。通過檢測與監(jiān)測，使更多的患者能夠延緩和減少肝硬化、肝癌及其他并發(fā)癥的發(fā)生，部分患者實(shí)現(xiàn)臨床治愈，從而改善生活質(zhì)量和延長生存時(shí)間。 ”中國2006 年全國血清流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，我國159 歲人群抗-HCV 流行率為0.43%，屬丙型肝炎病毒感染低流行區(qū)，加上高危人群和高發(fā)地區(qū)的HCV 感染者，約1000 萬例；我國HCV 基因型的分布情況，HCV 1b 和2a 基因型較為常見，其中以1b型為主(56.8%)。王貴強(qiáng)教授介紹：“高靈敏HBV DNA定量檢測能夠早期發(fā)現(xiàn)耐藥，比普通檢測手法更早發(fā)現(xiàn)病毒學(xué)突破，幫助臨床醫(yī)師及時(shí)調(diào)整治療方案。早期

22、發(fā)現(xiàn)耐藥并及時(shí)處理，可以預(yù)防耐藥，也可以把耐藥控制在可挽救的范圍之內(nèi)?！盬HO2016年指南：丙型肝炎病毒感染患者的篩查、護(hù)理和治療（更新）四、HCV高敏核酸檢測的臨床意義四、HCV高敏核酸檢測的臨床意義HCV感染診斷的難點(diǎn)和診斷原則HCV感染診斷的難點(diǎn)丙型肝炎的診斷原則實(shí)驗(yàn)室檢查血清標(biāo)志物臨床意義1、因免疫功能受抑制而無法產(chǎn)生抗體的高危人員的篩查（如吸毒者、 HIV感染者、血液透析者等）2、鑒別既往感染和新近感染血液中HCV含量僅為HBV的千分之一；是否存在丙型肝炎病毒的感染：主要包括血清抗-HCV和HCV RNAHCV核心抗原HCV的細(xì)胞培養(yǎng)尚未成功，病毒的分離極為困難；HCV的變異性很高

23、，使其診斷十分困難；HCV血清學(xué)檢查3、療效監(jiān)控有無肝損傷及損害的嚴(yán)重程度抗HCV1、高危人群篩查及初篩（EIA或CIA）2、非保護(hù)性抗體、轉(zhuǎn)陰與否與病程和療效無關(guān)1、HCV感染確診的關(guān)鍵指標(biāo)2、HCV急性感染期，血清或者血漿HCV RNA 為：10e+510e+7cp/ml3、慢性感染者：HCV RNA在5E+45E+6之間4、療程監(jiān)控和預(yù)后隨訪HCV的免疫學(xué)標(biāo)志僅有抗HCV一項(xiàng)，窗口期較長，大約需要70天，部分病人感染后始終都不形成抗體。主要有肝功能、肝臟影像及病理組織學(xué)等檢查HCV RNA檢測HCVRNAHCV基因型和耐藥檢測HCV RNAPCR法、基因序列測定法、線性探針反向雜交法慢性

24、丙肝具有隱匿性，感染時(shí)間長達(dá)20年到30年，絕大部分感染者無覺。AST（谷草轉(zhuǎn)氨酶）和ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）最常用的生化指標(biāo)，用于判斷肝細(xì)胞的損失程度。血清AST和ALT靈敏度15IU/ml的高敏HCV RNA檢測，特別是熒光定量PCR。生物化學(xué)檢查血清膽紅素、血清白蛋白和球蛋白、凝血酶原時(shí)間（ PT）及凝血酶原活動(dòng)度（PAT）、-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、血清堿性磷酸酶（ALP）、總膽汁酸（TBA）、甲胎蛋白（AFP）、維生素K其他四、HCV高敏核酸檢測的臨床意義四、HCV高敏核酸檢測的臨床意義1. 縮短早期診斷窗口期HCV-RNA是HCV復(fù)制活躍的可靠指標(biāo)；2. HCV-RNA是評(píng)價(jià)抗病毒治療

25、效果的重要指標(biāo)。臨床以 80 copies/ml作為無感染或治愈標(biāo)準(zhǔn)；感染后13周內(nèi)血清中即可檢測到HCV-RNA，大大縮短了檢測窗口期，可以判斷是否處于隱性HCV-RNA載量水平可監(jiān)測干擾素治療慢性丙型肝炎早期病毒學(xué)應(yīng)答反（ EVR）， 可用于預(yù)測長期療效；對(duì)不良反應(yīng)的全面監(jiān)測，有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題，指導(dǎo)下一步治療，見下頁圖示?；騺喤R床狀態(tài)；高靈敏度檢測技術(shù)增加血液篩查的安全指數(shù)，保證輸血安全，提高血液質(zhì)量，如腎病患者血液透析HCV感染的診斷。3. 抗-HCV陽性、ALT水平及異常率均隨著HCV-RNA量升高而增加。HCV-RNAHCV-RNA含量與抗-HCV滴度、ALT水平及異常率之間均呈正

26、相關(guān)。HCV RNA的定量分析是對(duì)丙型肝炎病毒感染患者的直接診斷， HCV RNA的檢出是丙型肝炎病毒感染的最直接證據(jù) ，是反映病毒復(fù)制和傳染性的重要指標(biāo)。HCV-Ag抗-HCVHCV-RNA定量檢測能夠有效的縮短“窗口期”4. 為規(guī)范化、個(gè)性化治療方案提供準(zhǔn)確結(jié)果支持。天010 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110HCV-RNA抗原檢測第三代抗體第二代抗體第一代抗體10天12天50天67天82天52018-5-14四、HCV高敏核酸檢測的臨床意義四、HCV高敏核酸檢測的臨床意義HCV基因型1患者接收PEG-IFN聯(lián)合利巴韋林治療流程HCV基因型 患者接收PEG-IF

27、N聯(lián)合利巴韋林治療流程2/3基線4周HCV基因1型基線HCV基因2/3型HCV RNA陰性HCV RNA陽性HCV RNA陽性比基線下降2log10 比基線下降2log104周HCV RNA陰性HCV RNA陽性HCV RNA陽性HCV RNA陰性HCV RNA陽性若有低應(yīng)答者，不建議縮短療程HCV RNA陽性比基線下降2log10或者24周陽性HCV RNA陰性 比基線下降2log10此后陰性12周24周12周HCV RNA陰性HCV RNA陽性停止治療性停止治療性PEG-IFN/RBV治療48周PEG-IFN/RBV治療72周PEG-IFN/RBV治療12-16周PEG-IFN/RBV治療

28、24周PEG-IFN/RBV治療48周如果基線低病毒載量，PEG-IFN/RBV治療24周建議在0周、4周、12周和24周采用高靈敏方法檢測HCV RNA（最低檢測限15IU/mL）低病毒載量410 IU/mL建議在0周、4周、12周和24周采用高靈敏方法檢測HCV RNA（最低檢測限15IU/mL）丙型肝炎防治指南（2015年更新版）5丙型肝炎防治指南（2015年更新版）四、HCV高敏核酸檢測的臨床意義五、HIV高敏核酸檢測的臨床意義WHO 與EASL（歐洲肝病研究學(xué)會(huì)）同時(shí)發(fā)布丙肝診療指南（ 2015）人類免疫缺陷病毒（human immunodificidncy virtus,HIV ）

29、:HCV-RNA（-）臨床以 80cps/ml作為無感染或治愈標(biāo)志1.1983年巴斯德研究所首次分離HCV RNA定量PCR（窗口期短，HCV感染后1-3周即可檢出）正常2.屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒慢病毒科（靈長類）3.導(dǎo)致獲得性免疫缺失綜合征 AIDS（艾滋?。?. 直徑：100-120nm，雙層結(jié)構(gòu)開始治療HCV-RNA（+)每隔3個(gè)月HCV RNA定量PCR檢查一次HCV RNA是評(píng)價(jià)抗病毒治療效果的重要指標(biāo)每隔6個(gè)月HCV RNA定量PCR檢查一次HCV RNA(-)（治療后隨訪）株型分為HIV-1和HIV-2型HIV-1型分為M、N、O組HCV-RNA (+)繼續(xù)治療M組包括亞型：A、B、C、

30、D、F、G、H、J、K我國流行亞型：A、B、C、D、F、G、AE、BC局部地區(qū)高流行：云南、河南、廣西、新疆、廣東、四川綜上：a 對(duì)HCV病毒的檢測方法中，PCR的方法是最佳的；b 高敏HCV RNA檢測試劑（100IU/ml）對(duì)于病情預(yù)判是非常重要的；五、HIV高敏核酸檢測的臨床意義五、HIV高敏核酸檢測的臨床意義1. 早期診斷5 . 耐藥監(jiān)測嬰兒早期診斷：HIV感染母親所生小于18個(gè)月齡的嬰兒，不同時(shí)間的兩次 HIV核酸檢測均為陽性即可作出診斷；艾滋病診療指南（2015版）規(guī)定：長期服藥患者， HIV核酸檢測結(jié)果小于400copies/ml表明治療有效，視為病毒被成功抑制；大于 400 c

31、opies/ml說明治療無效，病毒未被成功抑制，視為 HIV病毒產(chǎn)生耐藥性。6. HIV病毒載量與6年發(fā)病率的關(guān)系18個(gè)月齡以上兒童診斷與成人相同：有急性 HIV感染綜合癥或流行病學(xué)史，且不同時(shí)間的兩次HIV核酸檢測結(jié)果均為陽性，即可診斷。2. 疑難樣本的輔助診斷在特殊情況下，單純HIV抗體檢測結(jié)果不能進(jìn)行明確的診斷， HIV核酸檢測結(jié)果可幫病毒載量(拷貝/毫升)30000病毒載量變化具有一定規(guī)律，與疾病的進(jìn)程有著密切的相關(guān)性。因此定期進(jìn)行病毒載量檢測有助于確定疾病發(fā)展的階段，以確定相應(yīng)的治療方案。4. 指導(dǎo)抗病毒治療及療效判定通常在病毒載量達(dá)到一定水平后（如 35,00050,000 cps/ml）抗病毒治療才顯示良好的治療效果。治療后，通過病毒水平的檢測能夠確定治療是否有效。通常在治療 6個(gè)月后病毒水平降低0.5 log以上才被認(rèn)為臨床有效。62018-5-14五、HIV高敏核酸檢測的臨床意義五、HIV高敏核酸檢測的臨床意義東北制藥a. 病毒載量檢測在抗病毒治療中的重要性2、治療前病毒載量水平與病毒學(xué)抑制進(jìn)程的密切相關(guān)1430名初治患者，治療方案HAART(2NR