細胞生物學實驗手冊：細胞顯微攝影

1、實驗二十三 細胞顯微攝影【實驗目的】 了解生物顯微攝影的基本原理和裝置，以及照相暗室工作的基本過程?！緦嶒炗闷贰?一、材料和標本 人類染色體標本，其它染色的生物標本片。 二、器材和儀器 顯微鏡、35毫米照像機、顯微照明裝置、自動曝光控制器、ASAl00黑白135膠卷、洗印和放大等成套的暗室設備。 三、試劑 D一72式普通顯影液、SB-1式停影劑、F一5酸性定影液【實驗內(nèi)容】 一、原理 生物顯微攝影(Microphotography)是利用攝影裝置來拍攝顯微鏡視野中所觀察到的物像。在生物醫(yī)學方面，主要用于對正常細胞或病變細胞的顯微形態(tài)學研究記錄。 二、操作步驟 (一)拍攝前準備 1光路合軸 使光

2、軸與光束處于同一軸線上。 2柯勒氏照明 使觀察的視野獲礙均勻而又充分的照明；防止雜散光對照相系統(tǒng)產(chǎn)生影響；使被攝物體不受熱，影象清晰。 3物鏡與目鏡合理組合 依標本的不同和顯微攝影要求，物鏡與目鏡的組合有一定規(guī)范，如：拍攝人類染色體影像，采用高分辨率的100倍油鏡，配合10倍目鏡，可獲得良好分辨的理想放大影像。 4調(diào)整視場光闌和孔徑光闌 使兩者與所用物鏡的數(shù)值孔徑(NA鏡口率)相等，所得的分辨力最高；視場光闌一旦調(diào)好，不要再動，而孔徑光闌可隨物鏡數(shù)值孔徑的更換，做相應的調(diào)整。一般來說，把孔徑光闌的大小調(diào)成等于相應該物鏡孔徑像的23為宜，盡管喪失了少許的分辨力，卻能提高影像的反差、焦點深度和清晰

3、度。 總之，上述作法是調(diào)整顯微鏡至最佳狀態(tài)。 (二)拍攝程序 拍攝是顯微攝影系列操作中的關鍵環(huán)節(jié)，在鏡檢觀察中，發(fā)現(xiàn)需要攝下的影像應即時拍照。 1開啟相機后蓋，安裝膠卷于照相機內(nèi)。 2打開顯微鏡照明裝置的電源開關，將亮度調(diào)至適當。 3依個人的視力，調(diào)整攝影目鏡調(diào)焦環(huán)至“井”字線清晰。 4放一片需要拍攝的標本載玻片于載物臺上。在低倍鏡下選好要拍攝的核型或細胞結構，再轉換到油鏡下，聚焦標本細節(jié)，準備拍照。 5按下曝光按鈕，曝光按鈕亮表示曝光開始進行，熄滅表示曝光完畢。 6按下列項目進行拍攝記錄： 編號_單 位_ 課題_負責人_倍數(shù)_條 件_日期_顯微鏡型號_ (三)黑白膠片的沖印 感光膠片在拍攝完

4、畢后，需盡快在暗室中沖洗和曬印，其方法和普通照像相似。其基本原理是顯影液使膠片已感光的銀鹽潛影還原為可見的金屬銀影像；停影液使顯影液失去顯影能力，防止顯影過度與斑痕出現(xiàn)；定影液把未被還原的鹵化銀溶去，晾干是便于膠片和相紙保存。 1沖印的操作步驟(1)把膠片裝入顯影罐中(切勿粘在一起)先用清水沖洗，排除氣泡然后再把水倒掉，這有利于顯影液的快速均一作用。 (2)從頂部罐口注入預先配好的約250ml D-72式顯影液。20顯影412分鐘。 (3)顯影中輕輕搖影罐，使膠片表面充分受顯影液作用，顯影完畢，迅速倒出顯影液。 (4)立即注入250ml預先配好的SBI式停影液，停顯時間為10秒，倒出停影液，隨之加入250ml的F一5式酸性堅膜定影液，20定影15分鐘。取出膠片流水沖洗30分鐘以上。 (5)將膠片掛起，用脫脂棉輕輕吸掉膠片表面過多的積水，晾干。 (6)晾干后用放大機的膠片夾子夾住膠片，藥膜面朝下，聚焦取景，然后在紅燈條件下，用壓紙板壓住所需號放大像紙，藥膜面向上進行曝光(適當?shù)钠毓鈺r間要經(jīng)試驗后決定)。 (7)曝光后的像紙，浸入D-72顯影液中，然后用竹鑷子不時地夾住像紙翻動，直到顯影適度為止。 (8)顯影合適后立即移到SB-I式停影液中，漂洗1020秒，再浸入定影液中處理15分鐘，取出在流水中沖洗60分鐘左右。 (9)水洗后，放在電熱上光機上烘干；裁邊，裝入有說明的紙袋內(nèi)保存