GSTP1、MRP mRNA表達與胃癌輔助化療預后的關系

1、GSTP1、MRP mRNA表達與胃癌輔助化療預后的關系【摘要】目的討論谷胱甘肽s轉(zhuǎn)移酶gstp1、多藥耐藥相關蛋白(rp)rna表達與胃癌鉑類藥物輔助化療預后的關系。方法經(jīng)病理學確診的胃癌患者66例，采用5-fu/鉑類藥物為主的方案進展輔助化療。采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反響rt-pr檢測胃癌組織中gstp1和rprna表達程度。結果66例胃癌患者中，rp和gstp1rna的表達程度中位值分別為1.214和0.434。gstp1rna高表達組無復發(fā)生存率和總生存率均顯著低于低表達組(p0.05)。調(diào)整年齡、性別、分化程度、淋巴結狀態(tài)、分期后，多因素分析結果顯示gstp1rna程度是影響患者預后的獨立

2、危險因素(p0.05)，而rp表達程度與預后無關(p0.05)。結論gstp1rna表達程度可以在一定程度上判斷術后胃癌患者承受鉑類藥物化療后的預后。【關鍵詞】胃癌therelatinfgstp1andrprnaexpressinithprgnsisingastrianerpatientstreatedithadjuvanthetherapyhuadng,huangzha-hui,dengjian-zhng(anerinstitute,the4thhspitalaffiliatedtsuzhuuniversity,uxi214062,hina)abstrat:purpsetinvestigat

3、etherelatinfgstp1andrprnaexpressiniththeprgnsisingastrianerpatientstreatedithplatinu-basedadjuvanthetherapyethdssixty-sixasesithpathlgiallyprvengastrianerreeivedplatinu-basedadjuvanthetherapy,andthernaexpressinfgstp1andrpingastrianertissuesastestedbyseiquantitativereversetransriptinplyerasehainreati

4、n(rt-pr)resultstheedianrnalevelsfrpandgstp1ingastrianertissuesere1.214and0.434,respetively.thereurrene-freesurvivalandverallsurvivalinpatientsithhighlevelfgstp1rnaeresignifiantlylerthanthseithllevel(p0.05).afteradjustingfrdifferentiatin,staging,lyphndestatus,ageandgender,ultivariateanalysisshedthatg

5、stp1rnalevelasanindependentriskfatrfrprgnsis(p0.05).rprnalevelasntassiatedithrelapsersurvival.nlusinthernalevelfgstp1aybeausefulpreditrparaeterfrreurreneinpstperativegastrianerpatientsreeivedithplatinu-basedadjuvanthetherapysubjetrds:gastrineplass;drugtherapy;glutathine-s-transferase;utidrugresistan

6、e藥物不能與靶位點結合，從而導致腫瘤細胞耐藥5，6。雖然國內(nèi)已有關于胃癌組織中gstp1和rprna表達的相關報道7，8，但關于其與胃癌輔助化療預后的相關性研究尚未見報道。本文選擇66例承受鉑類藥物輔助化療的胃癌患者為研究對象，分析胃癌組織gstp1和rprna表達程度與其預后的關系。1材料與方法1.1一般資料搜集本院2022年8月2022年8月間收治的胃癌患者66例，年齡3476歲，中位年齡58歲。所有病例均為行胃癌根治術后病人，并經(jīng)影像學檢查證實體內(nèi)未測到影像學可見腫瘤病灶?；熐盎颊哐Ｒ?guī)、肝腎功能均正常，心電圖無明顯異常。所有病例根治術后均承受4個周期以上以鉑類為主的結合化療，包括f亞

7、葉酸鈣+5-fu氟尿嘧啶+l-hp方案57例，f+5-fu+l-hp+tax泰素方案9例。腫瘤組織學分類和分級均以全國胃癌協(xié)作病理組規(guī)定作為標準，采用2002年aj胃癌tn分期標準進展分期。無復發(fā)生存期(reurrene-freesurvival，rfs)為根治性手術到首次復發(fā)、轉(zhuǎn)移的時間；總生存期(verallsurvival，s)為根治性手術到死亡或末次隨訪的時間。1.2rt-pr檢測gstp1和rprna表達程度選取這些患者手術切除的腫瘤組織，置于-196液氮中保存。采用總rna提取試劑trizl(invitrgen公司)，按照試劑說明書，提取總rna。電泳檢測rna質(zhì)量，紫外分光光度計

8、檢測測總rna濃度。然而將總rna逆轉(zhuǎn)錄成dna，方法如下：取總rna5g、隨機六聚引物0.4g，加無rna酶的dep處理水至11.0l，705in后冰上驟冷；順序參加逆轉(zhuǎn)錄緩沖液5buffer4.0l，10l/ldntps2.0l，rnaseinhibitin20u，加dep水至19l，255in后，每管加200ulv逆轉(zhuǎn)錄酶混勻后加一滴石蠟油，短暫離心，于2510in，4260in，705in，4冷卻8in。利用prier3.0軟件設計pr引物見表1。優(yōu)化后的pr反響體系為：g2+1.5l/l，dntps200l/l，引物各0.5l/l，熱啟動taq酶1u，dna2.0l，10緩沖液2.5

9、l，加dep水至總體積25l。擴增條件為：94預孵15in；94變性45s、序列特異退火溫度45s、72延伸45s，30個循環(huán)，728in。取5l擴增產(chǎn)物于2%瓊脂糖凝膠上電泳別離，溴化乙啶染色后，用凝膠圖象分析儀測定目的基因與內(nèi)參基因-atin的灰度比，以判斷目的基因在線性擴增范圍內(nèi)的相對表達量。1.3統(tǒng)計學處理應用spss13.0統(tǒng)計軟件包進展統(tǒng)計學處理，不同表達程度病例與臨床病理特征之間的關系用2檢驗。多因素分析采用x比例風險模型進展。采用kaplan-eier方法繪制生存曲線，lg-rank方法比擬生存率。所有統(tǒng)計均采用雙側檢驗。以p0.05為有統(tǒng)計學差異。2結果2.1rt-pr結果r

10、t-pr電泳結果見圖1。所有標本-atin均擴增成功，3例標本未擴出rp，1例未擴出gstp1。66例胃癌患者中，rp和gstp1rna的表達中位值1.214和0.434，以其為界將病例分為高表達組和低表達組。gstp1rna高表達組生存率顯著低于低表達組(p=0.012)，rp高表達組生存率與低表達組間無顯著差異(p=0.259)。調(diào)整年齡、性別、分化程度、淋巴結狀態(tài)、分期后，多因素分析結果顯示gstp1rna程度是影響患者預后的獨立危險因素(p0.05)，而rp表達程度與預后無關(p0.05)。2.2rp和gstp1rna程度與臨床病理參數(shù)的關系rp和gstp1rna程度與臨床病理參數(shù)的關

11、系，見表2。2.3rp和gstp1rna程度與胃癌患者預后的關系隨訪時間截止至2022年6月15日，共有39例59.1患者出現(xiàn)復發(fā)，其中gstp1低表達組和高表達組患者復發(fā)率分別為42.414/33和75.825/33；而rp低表達組和高表達組患者復發(fā)率分別為51.517/33和66.722/33。利用kaplan-eier方法繪制無復發(fā)生存曲線并進展lg-rank檢驗，結果見圖2、3。66例患者中，37例56.1死亡，其中gstp1低表達組和高表達組患者死亡率分別為39.413/33和72.724/33；而rp低表達組和高表達組患者死亡率分別為45.515/33和66.722/33。不同組患

12、者生存曲線及l(fā)g-rank檢驗結果見圖4、5。將年齡，性別、分化程度、淋巴結狀態(tài)、分期及rp或gstp1表達程度納入x回歸模型進展多變量分析，結果顯示gstp1rna高表達是影響患者復發(fā)r=2.456，95%i：1.2294.907，p=0.011和生存r=2.474，95%i：1.2115.057，p=0.013的獨立危險因素，而rp表達程度與預后無關(p0.05)。3討論復發(fā)和轉(zhuǎn)移是包括胃癌在內(nèi)的多數(shù)惡性腫瘤患者死亡的主要原因。很多行胃癌根治術的胃癌患者，盡管術后體內(nèi)不存在影像學可見的腫瘤病灶，但仍有60%的患者于2年內(nèi)出現(xiàn)復發(fā)和轉(zhuǎn)移。對具有不良預后因素的患者進展輔助化療是降低其復發(fā)率，延

13、長其生存期的主要手段之一。但迄今為止，包括胃癌在內(nèi)的大多數(shù)惡性腫瘤的化療療效仍不理想。鉑類藥物為根底的化療方案是常用胃癌化療方案之一，但不同個體對鉑類藥物敏感性差異很大，一樣的化療方案在不同的腫瘤患者產(chǎn)生不同的療效9，10。腫瘤細胞解毒才能增強，使化療藥物失活是導致耐藥的另一重要機制，gst和rp在這一機制中發(fā)揮重要作用。研究顯示，gstp1表達程度與腫瘤細胞對鉑類藥物的敏感性有關14。本文研究結果顯示，低表達gstp1rna的胃癌患者具有更高的無復發(fā)生存率和總生存率。x多因素回歸分析顯示gstp1rna表達程度是胃癌病人承受鉑類藥物輔助化療后復發(fā)及總生存的預測因子，高表達gstp1rna的胃

14、癌患者具有更短的rfs和s，其復發(fā)和死亡的相對風險分別是gstp1低表達患者的2.456和2.474倍(p0.05)；而rp表達與患者預后無顯著相關性。kn等4用免疫組化方法檢測胃癌病癥gstp1的表達情況，發(fā)現(xiàn)gstp1表達與晚期胃癌對5-fu/草酸鉑的療效無關，與我們的結果不同。這可能與檢測方法、病例挑選標準等差異有關。由于本研究病例數(shù)較少、隨訪時間較短近一半患者生存，要全面理解gstp1表達對承受鉑類藥物輔助化療胃癌患者預后的影響，仍需進一步擴大樣本量，延長隨訪時間。本文統(tǒng)計結果顯示，gstp1及rprna表達程度與年齡、性別、分化程度、淋巴結轉(zhuǎn)移情況及臨床分期均無相關性，提示gstp1

15、及rprna表達程度可能不是判斷胃癌侵襲相關生物學行為的預測指標?？傊?，我們的初步研究結果說明，gstp1rna表達程度與胃癌患者對鉑類藥物輔助化療后的預后有關，有可能作為預測鉑類藥物對胃癌輔助化療效果的指標，用于指導該類藥物的個體化使用，以進步臨床治療的針對性和可預見性?！緟⒖嘉墨I】1hayesjd,pulfrddj.theglutathines-transferasesupergenefaily:regulatinfgstandthentributinftheisenzyestanerheprtetinanddrugresistanej.ritrevbihelbil,1995,30(6):

16、445-600.2kuyaat,aeharay,endk,etal.expressinfglutathines-transferase-piandsensitivityfhuangastrianerellstisplatinj.aner,1994,74(4):1230-1236.3陳慧君,吳緒峰,陳惠禎.卵巢癌中tpii、gst-、p-gp表達與化療反響性及預后的關系j.腫瘤,2022,26(4):380-384.4knh,rhs,hsy,etal.prgnstivaluefexpressinfer1,thyidylatesynthase,andglutathines-transferasep

17、1fr5-flururail/xaliplatinhetherapyinadvanedgastrianerj.annnl,2022,18(3):504-509.5nishiyaa,yaat,parkjs,etal.l-dseisplatinand5-flururailinbinatinanrepressinreasedgeneexpressinsfellularresistanedeterinantsttheselvesj.linanerres,1999,5(9):2620-2628.6kiriharay,yaat,tget,etal.dihydrpyriidinedehydrgenase,ultidrugresistane-assiatedprtein,jnl,1999,14(3):551-556.7謝家泰,陳宏斌,蔣義貴,等.多重耐藥蛋白-1在胃癌中的表達及意義j.世界華人消化雜志,2022,15(10):1092-1095.