復(fù)方南板藍(lán)根片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

1、本科畢業(yè)論文復(fù)方南板藍(lán)根片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究二級(jí)學(xué)院中藥學(xué)院專 業(yè)中藥學(xué)（中藥制藥方向）班 級(jí)2009級(jí)（1）班學(xué)生姓名*學(xué) 號(hào)0906505148指導(dǎo)教師黃*2013年4月誠(chéng) 信 聲 明我聲明，所呈交的畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）是本人在老師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文（設(shè)計(jì)）中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。我承諾，論文（設(shè)計(jì)）中的所有內(nèi)容均真實(shí)、可信。畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）作者（簽名）： 年 月 日目 錄TOC o 1-2 h u HYPERLINK l _Toc1197 摘要- HYPER

2、LINK l _Toc25206 1 前言 復(fù)方南板藍(lán)根片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究摘要：目的 建立復(fù)方南板藍(lán)根片的質(zhì)量控制方法。方法 采用薄層色譜法（TLC）對(duì)方中的南板藍(lán)根、紫花地丁和蒲公英進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)方中蒲公英的指標(biāo)性成分咖啡酸進(jìn)行含量測(cè)定，色譜柱為菲羅門Phenomenex C18（2504.60mm），流動(dòng)相為甲醇-磷酸鹽緩沖液（23:77），柱溫：30，流速：1.0mLmin-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：323nm。結(jié)果 在TLC圖譜中供試品和對(duì)照品溶液在相同位置顯示同顏色的斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾。含量測(cè)定結(jié)果顯示，咖啡酸0.150.75 g范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系，回

3、歸方程為y=4282300 x+14400，R2=0.9996，平均回收率為98.85%，RSD為0.81%（n6）。結(jié)論建立的方法簡(jiǎn)便可行，可用于復(fù)方南板藍(lán)根片的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞：復(fù)方南板藍(lán)根片；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；TLC；HPLCStudy on the quality standard for South banlangen compound tabletsAbstract: Objective To establish the quality standard of South banlangen compound tablets. Methods The qualitative identif

4、ication of South banlangen compound tablets, Herba violae and dandelion was conducted by thin layer chromatography (TLC). The content of Caffeic acid was determined by high performance liquid chromatography (HPLC). The chromatographic conditions were the Chromatographic column for the Phenomenex C18

5、(2504.60mm), mobile phase of methanol-phosphate buffer(23:77). The detection wavelength was 323nm and the column temperature was 30C, flow rate at 1.0mL/min. Results The test sample and the control solution showed spots at the same position with the same color on the TLC plate, without negative inte

6、rference. By accurate high performance liquid chromatography, a good linear correlation of Caffeic acid was shown in the range of 0.150.75g and the a regression equation was y = 4282300 x+14400 (R2=0.9996), the average recovery was 98.85%, RSD=0.81% (n=6). Conclusion The established method is simple

7、 and feasible, which can be used as the basis for quality control of South banlangen compound tablets.Keywords: Southbanlangen compound tablets; Quality standard;TLC; HPLC1 前言復(fù)方南板藍(lán)根片是部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑2005冊(cè)收載品種，方中有南板藍(lán)根、紫花地丁、蒲公英3味藥，具有消炎解毒的功效，用于腮腺炎、咽炎、乳腺炎、瘡癤腫痛。目前，部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑對(duì)該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有性狀鑒別、紫花地丁和蒲公英的理化鑒別以及南板藍(lán)根的

8、薄層鑒別，存在局限性，并且南板藍(lán)根的薄層鑒別方法不夠理想，因此有必要對(duì)復(fù)方南板藍(lán)根片進(jìn)行定性和定量研究，以建立更高的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從而確保藥品的質(zhì)量，有效地控制其在臨床應(yīng)用的有效性和安全性。南板藍(lán)根是復(fù)方南板藍(lán)根片的君藥，其作為清熱解毒藥物具有悠久的歷史，自然資源十分豐富，化學(xué)成分比較復(fù)雜。其不同活性部位、化學(xué)成分顯示出不同的藥理活性，藥理作用的研究大多處于體外實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物模型階段，許多作用機(jī)理仍不清楚，作用靶標(biāo)不明確，其藥效的分子機(jī)制的研究更少，對(duì)南板藍(lán)根的研究還需深入探索藥理活性以及發(fā)揮各藥效的活性部位或成分。隨著現(xiàn)代化科技的進(jìn)步，對(duì)南板藍(lán)根的化學(xué)成分及其活性進(jìn)行更深入的研究，南板藍(lán)根將有更加廣

9、闊的應(yīng)用前景1。牛衛(wèi)寧等2對(duì)方中南板藍(lán)根的薄層色譜鑒別進(jìn)行研究，他們認(rèn)為部頒標(biāo)準(zhǔn)中方法陰性有干擾，專屬性不強(qiáng)；且點(diǎn)樣量太大，耗費(fèi)工時(shí)；檢視也需噴顯色劑加熱，方法均較復(fù)雜；Rf值也較大，分離效果不好；展開(kāi)劑所用苯是一種毒性很強(qiáng)的有機(jī)物，為I類人類致癌物，美國(guó)早在1992 年就禁止在學(xué)生試驗(yàn)中作用苯。因此，他們建立了一種新的南板藍(lán)根薄層色譜鑒別方法，既解決了陰性干擾問(wèn)題，又具有較好的分離效果。而本論文則進(jìn)一步完善南板藍(lán)根薄層色譜鑒別方法。紫花地丁性寒味微苦，有清熱解毒的功效。主治黃疸、痢疾、乳腺炎、目赤腫痛、咽炎；外敷治跌打損傷、癰腫、毒蛇咬傷3。紫花地丁所含黃酮甙類及有機(jī)酸對(duì)金色葡萄球菌、豬巴氏

10、桿菌、大腸桿菌、鏈球菌和沙門氏菌都有較強(qiáng)的抑菌作用4。所富集微量元素，對(duì)人體內(nèi)多種酶的活性有作用，對(duì)核酸蛋白的合成、免疫過(guò)程、細(xì)胞繁殖都有直接或間接的作用，可促進(jìn)上皮細(xì)胞修復(fù)，使細(xì)胞分裂增加，T細(xì)胞增高，活性增加，從而對(duì)生物體的免疫功能起調(diào)節(jié)作用，通過(guò)酶系統(tǒng)發(fā)揮對(duì)機(jī)體代謝的調(diào)節(jié)和控制。所含鋅可抗病毒，并能刺激抗毒素的合成，提高對(duì)傳染病的抵抗力。是其：“清熱解毒”、“治疽療毒”的基礎(chǔ)5。而蒲公英具有清熱解毒、消腫散結(jié)、利尿通淋之功效，該藥對(duì)金葡萄、鏈球菌、卡他球菌均有效，并激發(fā)機(jī)體免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體抗病能力，為常用中藥，歷代藥典均有記載。近年來(lái)有關(guān)蒲公英制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究報(bào)道較多6-9。可見(jiàn)，紫

11、花地丁和蒲公英兩藥在方中起著很大的功效作用，故有必要對(duì)該兩藥進(jìn)行更高的質(zhì)量控制，本論文參考2010年版中國(guó)藥典，分別對(duì)方中的紫花地丁和蒲公英建立了薄層色譜鑒別方法。為提高復(fù)方南板藍(lán)根片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本論文除了對(duì)其進(jìn)行定性研究，還進(jìn)行了定量分析研究。許剛10對(duì)方中的君藥南板藍(lán)根所含成分靛藍(lán)進(jìn)行了HPLC含量測(cè)定，其流動(dòng)相為：甲醇-水（55:45）,流速:1.2ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為294nm,測(cè)得的結(jié)果表明靛藍(lán)在濃度為0.06360.5088g 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。而趙紅旗，李欽11則對(duì)方中蒲公英中所含有效成分咖啡酸進(jìn)行了含量測(cè)定。他們以甲醇-磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鈉1. 56g,加水使溶解成

12、1000ml,再加1%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值3.84.0,即得）（23:77）為流動(dòng)相，流速: 1.0mLmin-1,檢測(cè)波長(zhǎng)：323nm,測(cè)得的結(jié)果為：咖啡酸對(duì)照品進(jìn)樣量在0.1450.726g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率在96.3%100.9%之間，RSD為1.76%（n=5）。2 材料與儀器2.1 實(shí)驗(yàn)材料復(fù)方南板藍(lán)根片三批（廣東羅浮山國(guó)藥股份有限公司，批號(hào)分別為：L13A022、L13A023、L13A024）；南板藍(lán)根對(duì)照藥材（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：120971-200404）；咖啡酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110885-200102）；硅膠G板（自制，規(guī)格102

13、0cm，厚度0.5mm）；液相用的甲醇（色譜純，天津市彪仕奇科技發(fā)展有限公司）；其他試劑均為分析純。2.2 儀器AB135-S型電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司，0.001g）；JA5003B型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司，0.01mg）；DG200C型二斤裝中藥材粉碎機(jī)（浙江省瑞安市春海藥材器械廠）；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司）；SK250型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；DHG-9070A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥器（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；ZF-90型暗箱式紫外透射儀（上海顧村電光儀器廠）；LXJ-IIB型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；LC-10

14、AT VP型高效液相色譜儀（島津香港有限公司）。3 方法與結(jié)果3.1 薄層鑒別3.1.1 南板藍(lán)根的薄層鑒別（部頒標(biāo)準(zhǔn)法和新建方法比較）對(duì)部頒標(biāo)準(zhǔn)中的方法和新建的方法進(jìn)行比較，以下將部頒標(biāo)準(zhǔn)中的方法簡(jiǎn)稱標(biāo)法，將新建的方法簡(jiǎn)稱新法。3.1.1.1 溶液的制備標(biāo)法和新法中溶液的制備方法比較結(jié)果如下。（見(jiàn)表1）表1 標(biāo)法和新法中溶液制備的比較溶液的制備標(biāo)法新法供試品溶液的制備取本品 5片，除去糖衣，研細(xì)，加乙醚30ml，冷浸 1小時(shí)，振搖，濾過(guò)，濾液置水浴濃縮至約1ml，作為供試品溶液取本品5片，除去包衣，研細(xì)，加三氯甲烷20ml，加熱回流30min，濾過(guò)，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液對(duì)照藥材溶

15、液的制備另取南板藍(lán)根對(duì)照藥材5g，加水50ml，微沸30分鐘，濾過(guò)，濾液放冷，置分液漏斗中，加乙醚30ml提取，乙醚液置水浴濃縮至約1ml作為對(duì)照藥材溶液另取南板藍(lán)根對(duì)照藥材2g，加三氯甲烷20ml，同供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液陰性對(duì)照溶液的制備按處方除去南板藍(lán)根，其余處方與工藝不變，制成缺南板藍(lán)根的陰性樣品。取陰性對(duì)照1g，按供試品溶液的制備法制成陰性對(duì)照溶液取按處方同法制備不含南板藍(lán)根的樣品粉末1g，按供試品溶液制備方法制備，作為陰性樣品溶液3.1.1.2 薄層展開(kāi)條件標(biāo)法和新法薄層展開(kāi)條件比較結(jié)果如下。（見(jiàn)表2）表2 標(biāo)法和新法中薄層展開(kāi)條件的比較薄層展開(kāi)條件標(biāo)法新法薄層板硅膠G

16、板（自制）硅膠G板（自制）點(diǎn)樣分別吸取上述供試品、對(duì)照藥材、陰性液各50L，點(diǎn)在同一薄層板上分別吸取上述供試品、陰性溶液各10L，對(duì)照藥材4L，點(diǎn)在同一薄層板上展開(kāi)劑石油醚苯（9.5:0.5）甲苯-三氯甲烷-丙酮（5:3:1）檢視噴以20磷鉬酸乙醇液，在 105加熱10分鐘置紫外光燈（365nm）下檢視3.1.1.3 供試品的鑒別供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，標(biāo)法中顯相同顏色的主斑點(diǎn)（結(jié)果見(jiàn)圖1），新法中顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)（結(jié)果見(jiàn)圖2），二者陰性對(duì)照色譜均無(wú)干擾。溶劑前沿 溶劑前沿 1.供試品溶液（50L） 1.陰性對(duì)照溶液（10L） 24.對(duì)照藥材溶液（30L、40L、50

17、L） 24.供試品溶液（10L） 5.對(duì)照藥材溶液（4L）圖1 南板藍(lán)根薄層鑒別圖譜（標(biāo)法） 圖2 南板藍(lán)根薄層鑒別圖譜（新法）3.1.2 紫花地丁的薄層鑒別3.1.2.1 供試品溶液的制備取本品5片，除去糖衣，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，攪拌，使溶解，濾過(guò)，濾液蒸干。殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。3.1.2.2 對(duì)照藥材溶液的制備取紫花地丁對(duì)照藥材粉末1g，加甲醇20ml超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，攪拌，使溶解，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。3.1.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備取除紫

18、花地丁外的處方中其他藥材，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的制備工藝制取陰性對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。3.1.2.4 薄層展開(kāi)條件薄層板：硅膠G板（自制）。點(diǎn)樣：分別吸取上述供試品、陰性溶液、對(duì)照藥材各5L，點(diǎn)在同一薄層板上。 展開(kāi)劑：取甲苯乙酸乙酯甲酸（5:3:1）的上層溶液。檢視：置紫外光燈（365nm）下檢視。3.1.2.5 供試品的鑒別供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液色譜中則無(wú)此斑點(diǎn)。（結(jié)果見(jiàn)圖3） 溶劑前沿 1.陰性對(duì)照溶液（5L） 24.供試品溶液（5L） 5.對(duì)照藥材溶液（5L） 圖3 紫花地丁的薄層鑒別圖譜 3.1.3 蒲公英的薄

19、層鑒別3.1.3.1 供試品溶液的制備取本品5片，加甲醇20ml，加熱回流30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，濾過(guò)，濾液用醋酸乙酯振搖提取2次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml使溶解，作為供試品溶液。3.1.3.2 咖啡酸對(duì)照品溶液的制備另取咖啡酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。3.1.3.3 陰性對(duì)照溶液的制備按原處方組成比例，除去蒲公英，并按供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。3.1.3.4 薄層展開(kāi)條件薄層板：硅膠G板（自制）。點(diǎn)樣：分別吸取上述供試品、陰性溶液、對(duì)照藥材各6L，點(diǎn)在同一薄層板上。展開(kāi)劑：取醋酸乙酯-

20、甲酸-水（7:2.5:2.5）的上層溶液。檢視：置紫外光燈（365nm）下檢視。3.1.3.5 供試品的鑒別供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，缺蒲公英的陰性對(duì)試驗(yàn)無(wú)干擾。（結(jié)果見(jiàn)圖4） 溶劑前沿 1.陰性對(duì)照溶液（6L） 24.供試品溶液（6L） 5.咖啡酸對(duì)照溶液（6L） 圖4 蒲公英的薄層鑒別圖譜3.2 咖啡酸的含量測(cè)定3.2.1 溶液的制備3.2.1.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取在110干燥至恒重的咖啡酸對(duì)照品3.75mg，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每1ml中含咖啡酸0.015mg）。3

21、.2.1.2 供試品溶液的制備 取復(fù)方南板藍(lán)根片5片，除去糖衣，精密稱定重量，研細(xì)，取細(xì)粉0.7g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，精密加5%甲酸的甲醇溶液10ml，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40KHz）30min，取出，放冷，再稱定重量，用5%甲酸的甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，用微孔濾膜（0.45m）濾過(guò)，濾液置棕色瓶中，即得。3.2.2 色譜條件色譜柱：菲羅門Phenomenex C18（2504.60mm），流動(dòng)相：甲醇-磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鈉1.56g，加水使溶解成1000ml，再加1%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值3.84.0，即得）（23:77）

22、，柱溫：30，流速：1.0mlmin-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：323nm，進(jìn)樣量：10L。3.2.3 對(duì)照品、供試品的HPLC圖（a）（b）咖啡酸對(duì)照品 （b） 供試品 圖5 HPLC色譜圖由色譜圖可見(jiàn)，咖啡酸對(duì)照品的保留時(shí)間約13分鐘，在供試品色譜相應(yīng)的保留時(shí)間處出現(xiàn)色譜峰。（見(jiàn)圖5）3.2.4 線性關(guān)系考察分別精密吸取濃度為0.015mg/ml的對(duì)照品溶液5，10，15，20，25L，注入液相色譜儀中，按“3.2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定咖啡酸色譜峰面積，以峰面積吸收度積分值（y）為縱坐標(biāo)，以咖啡酸的含量（x）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為：y=4282300 x+14400，R2=0.999

23、6，結(jié)果表明，咖啡酸在0.150.75 g范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。（見(jiàn)表3，圖6）表3 線性關(guān)系考察結(jié)果咖啡酸量（g）0.150.300.450.600.75峰面積6395381299076196861425981523201690圖6 咖啡酸對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線3.2.5 精密度考察精密度系指規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度包含重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性，一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。用于定量測(cè)定的分析方法均應(yīng)考察方法的精密度。3.2.5.1 重復(fù)性考察取同一批樣品（批號(hào)：L13A022），平行6份，按“3.2.1.2”項(xiàng)下方

24、法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液10L，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值，計(jì)算咖啡酸的含量?？Х人岬钠骄繛?.3693 mgg-1，RSD為1.53 %（n=6），結(jié)果表明，重復(fù)性良好。（見(jiàn)表4）表4 重復(fù)性考察結(jié)果編號(hào)取樣量（g）含量（mgg-1）平均含量（mgg-1）RSD（%）10.69980.3690 20.70030.3776 30.70010.3694 0.36931.5340.69970.3703 50.69920.3599 60.70020.3695 3.2.5.2 中間精密度考察取同一批樣品（批號(hào)：L13A022），平行6份，分別由三個(gè)人，在不同時(shí)間，用同一臺(tái)高效液相

25、色譜儀，按“3.2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液各10L，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值，計(jì)算咖啡酸的含量。咖啡酸的平均含量為0.3682 mgg-1，RSD為1.71%（n=6），結(jié)果表明，中間精密度良好。（見(jiàn)表5）表5中間精密度考察結(jié)果（n=6）編號(hào)取樣量（g）含量（mgg-1）平均含量（mgg-1）RSD（%）10.69980.3690 20.70060.377130.70020.37040.36821.7140.69970.366350.69850.357760.69990.36923.2.6 穩(wěn)定性考察按“3.2.1.2”項(xiàng)下方法制備復(fù)方南板藍(lán)根片供試品溶液，

26、分別于0、2、4、6、8 h精密吸取供試品溶液各10L，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值，計(jì)算咖啡酸的含量。咖啡酸的平均含量為0.3717mgg-1，RSD為0.68%（n=6），結(jié)果表明，供試品溶液在8h內(nèi)測(cè)定基本穩(wěn)定。（見(jiàn)表6）表6 供試品溶液穩(wěn)定性考察結(jié)果時(shí)間含量（mgg-1）平均含量（mgg-1）RSD（%）00.375220.373540.36990.3717 0.6860.370180.36973.2.7 回收率試驗(yàn)準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)試。用于定量測(cè)定的分析方法均需做準(zhǔn)確度驗(yàn)證。試驗(yàn)方法：可用已知純

27、度的對(duì)照品做加樣回收測(cè)定，即于已知被測(cè)成分含量的供試品中再精密加入一定量的已知被測(cè)成分對(duì)照品，依法測(cè)定。計(jì)算方法：回收率：100% （C-A）/B式中 A 為供試品所含被測(cè)成分量；B 為加入對(duì)照品量；C 為實(shí)測(cè)值取復(fù)方南板藍(lán)根片（批號(hào)：L13A022）的細(xì)粉0.35g，精密稱定6份，每份各加咖啡酸對(duì)照品溶液（0.1502mg/ml）1ml，及5%甲酸的甲醇溶液9ml，按含量測(cè)定方法操作、測(cè)定，計(jì)算咖啡酸的回收率?？Х人岬钠骄厥章蕿?8.85%，RSD為0.81%（n=6）。（見(jiàn)表7）表7 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）編號(hào)取樣量（g）樣品含量（mg）加入量（mg）實(shí)測(cè)量（mg）回收率（%）平均回收

28、率（%）RSD（%）10.34970.1291 0.15020.276197.87 20.35190.1300 0.1502 0.2803100.0730.35040.1294 0.15020.277698.6498.850.8140.34990.1292 0.15020.276798.2050.35120.1297 0.15020.279099.3760.35050.1294 0.15020.278098.95 3.2.8 樣品含量測(cè)定取復(fù)方南板藍(lán)根片三批（批號(hào)分別為：L13A022、L13A023、L13A024），分別按照供試品溶液的制備方法制備供試液，在上述色譜條件下測(cè)定峰面積， 計(jì)算

29、復(fù)方南板藍(lán)根片中咖啡酸的含量。（見(jiàn)表8）表8 樣品含量測(cè)定結(jié)果編號(hào)取樣量（g）含量（mgg-1）平均含量（mgg-1）RSD（%）10.69980.3697 20.70020.3705 0.37010.1130.70010.3701 4 討論4.1 薄層鑒別4.1.1 南板藍(lán)根的薄層鑒別本實(shí)驗(yàn)中南板藍(lán)根的指標(biāo)性成分為靛藍(lán)、靛玉紅。部頒標(biāo)準(zhǔn)中方法點(diǎn)樣量太大，耗費(fèi)工時(shí)；檢視也需噴顯色劑加熱，方法較復(fù)雜；Rf值較大，展開(kāi)時(shí)需要在層析缸中放入濾紙并進(jìn)行充分的飽和，否則主斑點(diǎn)都會(huì)跑到前沿線上，分離效果也不好。故采用新的薄層鑒別方法，其色譜圖結(jié)果顯示，Rf值適中，分離效果好，且點(diǎn)樣量少，節(jié)約工時(shí)，溶液制備

30、方法也簡(jiǎn)單，是比較理想的薄層色譜鑒別方法。4.1.2 紫花地丁的薄層鑒別本實(shí)驗(yàn)中紫花地丁的指標(biāo)性成分為秦皮乙素。此薄層鑒別的展開(kāi)劑取甲苯乙酸乙酯甲酸（5:3:1）的上層溶液，在配制過(guò)程中，分層不明顯，且甲酸很容易揮發(fā)掉，故配制時(shí)加大到3倍量，并靜置分層30分鐘。4.1.3 蒲公英的薄層鑒別本實(shí)驗(yàn)中蒲公英的指標(biāo)性成分為咖啡酸。此薄層鑒別的展開(kāi)劑取醋酸乙酯-甲酸-水（7:2.5:2.5）的上層溶液，在配制時(shí)為使分層明顯，需靜置30分鐘。4.2 含量測(cè)定在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)前，由文獻(xiàn)12可知，南板藍(lán)根雖為方中主藥，但因復(fù)方南板藍(lán)根片采用水煎煮提取工藝，無(wú)合適的活性成分作為含量測(cè)定指標(biāo)。咖啡酸為蒲公英的活性成分

31、之一，具有抗菌抗病毒性。所以，選擇咖啡酸為復(fù)方南板藍(lán)根沖劑的含量測(cè)定指標(biāo)。因生物體內(nèi)咖啡酸往往以游離和鹽的形式存在，所以用5%甲酸的甲醇溶液作為溶劑超聲提取更完全。因咖啡酸為有機(jī)酸，酸性可抑制其電離，使峰形穩(wěn)定，分離度較好，故選擇酸性流動(dòng)相。參考文獻(xiàn)1 孫小兵,盛家榮,王定培.南板藍(lán)根化學(xué)成分及藥理作用研究J.廣西師范學(xué)院學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2008,25(4):66-69.2 牛衛(wèi)寧,和芳,胡玉霞,郭銀漢.復(fù)方南板藍(lán)根片薄層色譜鑒別方法改進(jìn)J.世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2011,13(6):1054-1056.3 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中國(guó)藥典一部.化學(xué)工業(yè)出版社,2000,278

32、.4 劉湘新.紫花地丁的有效成分分析及抗菌作用研究J.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志,2004(3):16-18.5 董乙文,胡玉濤.紫花地丁的研究概況J.中國(guó)林副特產(chǎn):2006,(3):78-80.6 XIONG FL,LI ZX,CAO ZH,etal.Study on quality standard of Puqinxiaoyan tablets J.Chin Tradit Pat Med,2004,26(2):103-105.7 PAN J,LIANG J,XIE HM,etal.Study on quality standard of Dandelion extracts J.Lishizhen

33、Med Mater Med Res,2008.19(9):2064-2065.8 SHENG XJ,LIU W.Study on quality standard of compound Gongying tabletsJ.Chin Tradit Pat Med,2006,28(12):1853-1854.9 CHEN F,HE BB,YANG XH.Study on quality standard for Puding mixture J.Chin J Mod Appl Pharm,2006,23(4):319-321.10 許剛.HPLC法測(cè)定復(fù)方南板藍(lán)根片中靛藍(lán)的含量J.云南中醫(yī)中藥雜

34、志:2010,31(9):70-71.11 趙紅旗,李欽.RP-HPLC測(cè)定復(fù)方南板藍(lán)根片咖啡酸的含量J.中成藥:2004,26(10).12 李欽,程鐵峰,許啟太,等.復(fù)方南板藍(lán)根沖劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究J.中國(guó)藥學(xué)雜 志:2004,39(12):938-940.綜述復(fù)方南板藍(lán)根片中南板藍(lán)根、蒲公英的研究進(jìn)展復(fù)方南板藍(lán)根片是部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑2005冊(cè)收載品種，方中有南板藍(lán)根、紫花地丁、蒲公英3味藥，具有消炎解毒的功效，用于腮腺炎、咽炎、乳腺炎、瘡癤腫痛。南板藍(lán)根是方中的君藥，其味苦，性寒，具有清熱解毒、涼血等作用，可用于溫病發(fā)斑，丹毒；臨床主要用于防治流感、流腦以及治療肝炎等1。中華人民共和國(guó)藥

35、典自1985年起，經(jīng)1990，1995，2000，2005年版均只將十字花科植物菘藍(lán)的干燥根作為正品板藍(lán)根；1999，2000，2005版一部將馬藍(lán)正式以南板藍(lán)根為名收載單列為一種2。雖然在藥典中已經(jīng)明確區(qū)分了南、北板藍(lán)根，但是目前研究多以北板藍(lán)根為主，對(duì)南板監(jiān)根的研究還需深入。隨著對(duì)南板藍(lán)根研究的深入，在研究過(guò)程中還會(huì)不斷有新的化學(xué)成分被發(fā)現(xiàn)，這些成分有的有一定的毒副作用，有的還有致癌作用。因此，我們?cè)谂R床使用中一定要小心，不能忽視其毒副作用3。蒲公英味苦、甘，性寒，歸肝胃二經(jīng)，具有清熱解毒、消癰散結(jié)、利尿通淋的作用，臨床主要用于乳癰、肺癰、腸癰、痄腮、瘰疬、疔毒瘡癰、目赤腫痛、感冒發(fā)熱、咳

36、嗽、咽喉腫痛、胃炎、腸炎、痢疾、肝炎、膽囊炎、尿路感染、蛇蟲(chóng)咬傷等。蒲公英屬植物有效成分復(fù)雜,用途廣泛。其中綠原酸為主要抗菌成分, 黃酮類可清除超氧陰離子抗氧化的作用,抗腫瘤活性成分值得深人研究。蒲公英具有十分有效的藥用、保健作用,且已有上千年的藥用歷史,資源儲(chǔ)蓄量大,分布較廣、產(chǎn)量受環(huán)境影響小, 用來(lái)研究開(kāi)發(fā)保健藥物、化妝品具有廣泛的應(yīng)用前景4。1 南板藍(lán)根的研究進(jìn)展南板藍(lán)根來(lái)源于爵床科植物的馬藍(lán)Baphicacanthus cusia （ Nees） Bremek的干燥根莖及根,其部位不同、各化學(xué)成分含量亦不同，顯示出的藥理作用也有所不同。通過(guò)對(duì)南板藍(lán)的根、莖、葉中的靛玉紅、靛藍(lán)的含量的比

37、較，發(fā)現(xiàn)南板藍(lán)根莖、葉中靛藍(lán)的含量均較靛玉紅高，而葉中靛玉紅和靛藍(lán)的含量最高，其次是莖，含量最少者為根。因此，在臨床用藥或制劑的過(guò)程中應(yīng)注意用藥部位的選擇，才能保證藥物治療效果的穩(wěn)定3。1.1 化學(xué)成份化學(xué)成分是中藥藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。南板藍(lán)根中含有多種化學(xué)成分，到目前為止已經(jīng)分離出的化合物主要有生物堿、黃酮、有機(jī)酸、苷類、甾醇類、五環(huán)三萜類、蒽醌類、氨基酸、糖類化合物。生物堿類化合物包括吲哚類生物堿、喹唑酮類生物堿及其他類型生物堿。其中，吲哚類生物堿有靛玉紅5、靛藍(lán)5等，靛玉紅和靛藍(lán)在南板藍(lán)根中的含量較高，靛玉紅在南板藍(lán)根中的含量高達(dá)360g/g，在北板藍(lán)根中為7g/g左右，二者相差幾十倍6

38、。在南板藍(lán)根化學(xué)成分的研究中，陳熔，江山7分離鑒定了大黃酚成分；吳煜秋等4經(jīng)提取從石油醚部分得到3個(gè)甾醇類化合物和1個(gè)三萜類化合物，分別鑒定為豆甾醇-5，22-二烯-3，7-二醇、豆甾醇-5，22-二烯-3，7-二醇、-谷甾醇和羽扇烯酮；廖富華8利用氨基酸分析儀對(duì)對(duì)南板藍(lán)根氨基酸進(jìn)行分離測(cè)定, 證實(shí)其含有脯氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸、丙氨酸、天門冬氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、絲氨酸等十四種氨基酸,根據(jù)文獻(xiàn)2記載，在此基礎(chǔ)上，還新增了色氨酸、胱氨酸、精氨酸、賴氨酸和組氨酸五種氨基酸。 1.2 藥理作用和臨床應(yīng)用現(xiàn)代研究表明，南板藍(lán)根具有抗菌、抗腫瘤、抗病

39、毒、抗炎等方面藥理活性。1.2.1 抗菌作用南板藍(lán)根具有很強(qiáng)的抗菌作用，藥理試驗(yàn)表明馬藍(lán)根對(duì)金黃色葡萄球菌和肺炎桿菌有良好的抑制作用，且馬藍(lán)葉也具有抗菌、消炎和解熱作用5；南板藍(lán)根中的色胺酮對(duì)皮膚病真菌有較強(qiáng)的抑菌作用，其最低抑菌濃度為5ug/ml9。1.2.2 抗腫瘤作用南板藍(lán)根中含有靛玉紅、靛藍(lán)、色胺酮等抗腫瘤活性成分。靛玉紅對(duì)腫瘤細(xì)胞生成具有一定的選擇性抑制作用10，無(wú)論對(duì)動(dòng)物移植性腫瘤還是人體腫瘤均有一定治療作用，有抑制血液中嗜酸性粒細(xì)胞的作用，臨床上靛玉紅用于治療慢性粒細(xì)胞性白血病有明顯的療效11。1.2.3 抗病毒作用南板藍(lán)根具有良好的抗病毒作用，其獨(dú)特療效在抗病毒方面優(yōu)于北板藍(lán)根

40、12。臨床上用于防治流感、流行性腮腺炎、流行性乙型腦炎、治療玫瑰糠疹、治療流行性出血性結(jié)膜炎等。其中，南板藍(lán)根所含的腺苷對(duì)HSV-1病毒有直接殺滅作用，而且呈濃度依賴性；腺苷可抑制HSV-1病毒的生物合成，且隨腺苷濃度增加，病毒抑制率明顯升高13。另外，Tanaka T等14發(fā)現(xiàn)南板藍(lán)根中的苯基乙醇葡萄糖苷在低濃度時(shí)具有拮抗HSV-1病毒的作用。1.2.4 抗炎、促進(jìn)免疫作用Otsuka等15研究發(fā)現(xiàn)，苯并噁嗪酮衍生物能抑制組織胺的釋放而具有抗炎作用，苯并噁嗪酮類衍生物在南板藍(lán)根中含量較高，南板藍(lán)根的抗炎作用可能與苯并噁嗪酮類成分有關(guān)。2 蒲公英的研究進(jìn)展蒲公英（Herba Taraxaci）

41、別名蒲公草、地丁、婆婆丁、黃花地丁、蒲公丁、奶汁草等。中華人民共和國(guó)藥典（2010版）規(guī)定，蒲公英為菊科植物蒲公英（Taraxacum mongolicum HandMazz）、堿地蒲公英（Taraxacum sinicum Kitag） 或同屬數(shù)種植物的干燥全草。蒲公英原產(chǎn)歐洲，全世界約2000余種，我國(guó)有70余種，遍及全國(guó)大多數(shù)省區(qū)。我國(guó)入藥的蒲公英為菊科植物蒲公英、華蒲公英及其同屬多種植物的干燥全草。2.1 化學(xué)成份國(guó)外蒲公英化學(xué)成分的研究最早見(jiàn)于1912年，Power等從藥用蒲公英（歐蒲公英，Toffwinale Wigg）的根中分離得到對(duì)羥基苯乙酸、咖啡酸和膽堿，從不溶于水的樹(shù)脂中得

42、到蒲公英甾醇（taraxasterol）。以后又有學(xué)者不斷從該種及其它種中提出許多化學(xué)成分16。蒲公英的化學(xué)成分研究較多，主要包括黃酮類、倍半萜內(nèi)酯類、香豆素類、三萜類、植物甾醇類、綠原酸、咖啡酸、酚酸類、胡蘿卜素類、色素類、揮發(fā)油類，此外還含有多種脂肪酸、糖、膽酸、維生素、礦物質(zhì)、果膠、蛋白質(zhì)等。2.2 藥理作用和臨床應(yīng)用2.2.1 抗病原微生物蒲公英具有廣譜抑菌活性，采用微量肉湯稀釋法進(jìn)行體外的抑菌實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)蒲公英對(duì)葡萄球菌屬細(xì)菌、肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌、腸球菌、腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、枸櫞酸桿菌、綠膿桿菌、流感嗜血桿菌、卡他布蘭漢菌等常見(jiàn)臨床分離細(xì)菌有明顯的抗菌活性17

43、。2.2.2 對(duì)胃腸道的作用蒲公英對(duì)消化系統(tǒng)的作用主要在胃和十二指腸之間，可增強(qiáng)家兔離體胃、十二指腸平滑肌的收縮力18。單味蒲公英或黨參、川芎、蒲公英配伍的復(fù)方煎劑，均能明顯減輕應(yīng)激所致的大鼠胃黏膜損傷，使?jié)儼l(fā)生率和潰瘍指數(shù)明顯下降，對(duì)大鼠因幽門結(jié)扎和無(wú)水乙醇所致胃黏膜損傷性潰瘍也均有不同程度的保護(hù)作用19。2.2.3 抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)研究顯示蒲公英單味提取物在體外對(duì)肝癌細(xì)胞、大腸癌Lovo細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用；在體內(nèi)對(duì)腫瘤細(xì)胞有明顯的抑制作用，認(rèn)為蒲公英單昧提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞的體外體內(nèi)增殖有明顯抑制作用，提示對(duì)腫瘤的治療可能有一定的應(yīng)用價(jià)值20。2.2.4 對(duì)免疫系統(tǒng)作用蒲公英煎液具有促

44、進(jìn)地塞米松誘導(dǎo)免疫功能低下小鼠的IL-2、IFN-y、IL-4的分泌，即通過(guò)改善機(jī)體的免疫抑制狀態(tài)，增強(qiáng)和調(diào)節(jié)免疫功能的作用。實(shí)驗(yàn)研究還顯示蒲公英多糖能顯著提高小鼠免疫器官指數(shù)，促進(jìn)免疫器官發(fā)育，有利于增強(qiáng)機(jī)體免疫21。2.2.5 降血糖作用蒲公英多糖可顯著降低糖尿病模型小鼠的血糖，增進(jìn)免疫和抗氧化作用及抑制 葡萄糖昔酶活性是其降血糖機(jī)制之一。蒲公英乙醇提取物以140gml-1給藥，體外考察55mM存在條件下INS-1細(xì)胞釋放胰島素的活性。結(jié)果蒲公英提取物在40ugml-1時(shí)顯示出促進(jìn)胰島素分泌活性22。2.2.6 其他活性實(shí)驗(yàn)研究表明蒲公英能夠提高創(chuàng)傷性大鼠腦組織SOD活性，能夠有效減少自由

45、基對(duì)腦組織的損傷，是一種較強(qiáng)的自由基清除劑。蒲公英還有利尿和降血脂等藥理作用。2.2.7 臨床應(yīng)用蒲公英在臨床上用于治療上呼吸道感染、流行性腮腺炎、急性乳腺炎、慢性胃炎、胃潰瘍和皮膚疾病，蒲公英還常常與其他中藥配伍治療各種腫瘤、肝膽疾病以及各種感染性疾病。3 結(jié)語(yǔ)綜上所述，南板藍(lán)根的作用是通過(guò)多種化學(xué)成分、多靶點(diǎn)、多途徑地作用于機(jī)體來(lái)發(fā)揮藥效。日前我們研究還局限于單一化學(xué)成分的研究。因此，我們有必要盡快找到發(fā)揮各個(gè)藥效的活性部位，對(duì)南板藍(lán)根制劑進(jìn)行深入的研究開(kāi)發(fā)，為中藥現(xiàn)代化研究奠定基礎(chǔ)。蒲公英在臨床上應(yīng)用范圍隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的深入而不斷擴(kuò)大，現(xiàn)已廣泛用于各種感染性疾病、惡性腫瘤、胃腸道疾病、

46、糖尿病以及婦產(chǎn)科疾病的治療。同時(shí)由于蒲公英還含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、微量元素及維生素等，還是開(kāi)發(fā)綠色保健品的理想資源，值得我們進(jìn)行醫(yī)療、新藥研制、食品保健、美容等多方面綜合利用。參考文獻(xiàn)1 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部M.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:170.2 孫小兵,盛家榮,王定培.南板藍(lán)根化學(xué)成分及藥理作用研究J.廣西師范學(xué)院學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2008,25(4):66-69.3 肖元,鐘鳴.南板藍(lán)根的化學(xué)成分、藥理作用研究進(jìn)展J.河南中醫(yī),2006,26(8):78-79.4 吳煜秋,錢斌,張榮平,等.南板藍(lán)根的化學(xué)成分研究.中草藥,2005,36(7):982-983.5 楊秀賢,呂曙華,吳壽金.馬藍(lán)葉化學(xué)成分的研究J.中草藥,1995,26(12):622.6 王麗霞,赫炎.南北板藍(lán)根化學(xué)成分研究進(jìn)展J.開(kāi)封醫(yī)專學(xué)報(bào),1999,18(3):52-537 陳熔,江山.南板藍(lán)根中大黃酚的分離鑒定.中藥材,1990,13(5):29-30.8 廖富華.南板藍(lán)根氨基酸的分析.中國(guó)獸藥雜志,2003,37(3):39-41.9 李清華,金繼曙,宋兆友,等.青黛抗真菌成分的研究J.中草藥,1983,14(10):8.10 周金黃,王建華.中藥藥理與臨床研究進(jìn)展(第一冊(cè))M.北京:科學(xué)出版社,1