梅毒螺旋體實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)課件

1、灌南縣第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科金建懷2016年6月17日梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷概述梅毒及其病原學(xué)特征梅毒流行狀況梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷暗視野顯微鏡檢查及臨床意義梅毒血清學(xué)檢查及臨床意義梅毒檢測(cè)試劑評(píng)估梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)知識(shí)要點(diǎn)與報(bào)告要求梅毒及其病原學(xué)特征梅毒螺旋體特征有612個(gè)規(guī)則的螺旋螺旋整齊，數(shù)目固定折光性強(qiáng)，較其他螺旋體亮運(yùn)動(dòng)緩慢而有規(guī)律，有三種運(yùn)動(dòng)方式圍繞其長(zhǎng)軸旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)伸縮其螺旋間距離移動(dòng)彎曲扭動(dòng)如蛇行暗視野梅毒螺旋體梅毒螺旋體 熒光法檢查梅毒螺旋體梅毒螺旋體致病性致病物質(zhì)：莢膜樣物質(zhì)、粘多糖酶所致疾病梅毒后天梅毒經(jīng)性接觸傳染 臨床分期 一期梅毒：外生殖器硬性下疳 二期梅毒：全身梅毒疹 三期梅毒：皮膚粘膜潰瘍、

2、侵犯內(nèi)臟器官或組織 隱性梅毒：無任何梅毒性的癥狀和體征先天梅毒經(jīng)胎盤傳給胎兒 胎兒表現(xiàn)為流產(chǎn)、死胎 出生后表現(xiàn)為鋸齒形牙、鞍形鼻等2010年全國梅毒疫情年齡與性別分布男女性別比：0.94115-39歲：女性多于男性40歲以上：男性多于女性 標(biāo)本采集部位：皮膚或粘膜損害 有痂者去痂，先用無菌棉球或紗布蘸生理鹽水，將皮損拭凈，輕壓皮損至滲液（避免出血）。然后用載玻片印取滲液，立即檢查，未破潰者用手術(shù)刀刮破皮疹，取滲出液。淋巴結(jié)穿刺液 以無菌操作法用注射器吸取0.25-0.5ml生理鹽水，穿刺入淋巴結(jié)，再回吸23次，最后將吸取液涂玻片上，立即檢查。梅毒暗視野采樣暗視野顯微鏡檢查結(jié)果解釋陽性暗視野顯微

3、鏡查陽性，臨床上可確診梅毒特別對(duì)一期梅毒硬下疳，腫大淋巴結(jié)，二期梅毒皮膚粘膜損害的診斷有重要價(jià)值，尤其使用于早期梅毒血清學(xué)陰性時(shí)暗視野顯微鏡檢查結(jié)果解釋陰性陰性結(jié)果不能排除梅毒螺旋體數(shù)量不足已用過抗生素或某些外用藥 損害接近自然消退損害不是梅毒檢驗(yàn)人員技術(shù)暗視野顯微鏡檢查特點(diǎn)該方法具有快速、方便、可靠的特點(diǎn)，已被WHO確定為性病實(shí)驗(yàn)室必備項(xiàng)目之一口腔中含有其他密螺旋體，與梅毒螺旋體不易區(qū)別，暗視野顯微鏡查不推薦于口腔皮損材料梅毒血清學(xué)檢查血清學(xué)方法是診斷各期梅毒的主要方法，包括：非特異性血清學(xué)試驗(yàn)（非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)） 用于初篩試驗(yàn)、療效觀察。特異性血清學(xué)試驗(yàn)（梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)）

4、用于確證試驗(yàn)，對(duì)療效觀察意義不大。局限性：非常早期的梅毒可能出現(xiàn)陰性，還需做病原體檢查。國內(nèi)梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的傳統(tǒng)程序是：先以非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（如RPR、TRUST、VDRL等）進(jìn)行初篩，再以梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（如TPPA、TPHA、FTA-ABS等）進(jìn)行確認(rèn)。美國、法國和比利時(shí)也采用類似的程序。該程序的優(yōu)點(diǎn)是排除了大多數(shù)感染過梅毒但經(jīng)過充分治療的病人，從而使臨床更易決定是否需要進(jìn)行抗梅治療。 將梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)和非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)組合在一起（如RPR+TPHA或TPPA）作為初篩試驗(yàn)可以最大限度地檢出各期梅毒病例（除一期梅毒的極早期），同時(shí)保證了敏感性和特異性，是最為理

5、想的梅毒初篩方案。這是世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的方案，英國等一些歐洲國家也已采用多年。其缺點(diǎn)是費(fèi)時(shí)費(fèi)力，實(shí)驗(yàn)室的工作量較大。 非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)本法主要檢測(cè)抗梅毒螺旋體細(xì)胞膜上脂類的IgG和IgM抗體。 原理：人體感染梅毒螺旋體后，組織破壞所釋放的類脂，與梅毒螺旋體結(jié)合后形成完全抗原，刺激機(jī)體產(chǎn)生類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素）。主要為IgG，IgM的混合抗體非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)已知抗原：心磷脂、卵磷脂及膽固醇檢測(cè)成分：血清梅毒反應(yīng)素方法：性病研究實(shí)驗(yàn)室玻片試驗(yàn)（VDRL）血清不需加熱的反應(yīng)素玻片試驗(yàn)（USR）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR）甲苯胺紅血清不需加熱試驗(yàn)（TRUST）RPR/T

6、RUST原理:RPR:以黑色的炭顆粒作為指示標(biāo)記物TRUST:以紅色的甲苯胺紅顆粒作為指示標(biāo)記物檢測(cè)成分：血清梅毒反應(yīng)素RPR/TRUST定性試驗(yàn)在紙卡圓圈中加入50L待檢血清，涂滿整個(gè)圓圈使用滴管和專用針頭，加1滴混勻的抗原懸液旋轉(zhuǎn)100rpm，8min立即判斷結(jié)果RPR/TRUST結(jié)果判斷陽性：在圓圈中見不規(guī)則大小黑色/紅色凝集塊陰性：在圓圈中無黑色/紅色凝集塊，僅見黑色/紅色顆粒集于中央一點(diǎn)或均勻分散。非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： *敏感性特異性好 *不需要昂貴設(shè)備，簡(jiǎn)單易行 *適用于大量人群的血清篩查 *有效治療后血清滴度可下降并陰轉(zhuǎn)，故可作療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)。 *20分

7、鐘可獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 *試劑與方法均已標(biāo)化，各實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果可比較。 *試驗(yàn)可被內(nèi)部質(zhì)控和外部質(zhì)控監(jiān)控進(jìn)行。缺點(diǎn)： *敏感性和特異性低于螺旋體抗原試驗(yàn)，BFP反應(yīng)和前帶現(xiàn)象 渾濁（定性）RPR/TRUST定量試驗(yàn)待檢血清用等滲鹽水在紙卡圓圈中作梯度稀釋：原血清，1:2，1:4，1:8，1:16，1:32按定性試驗(yàn)步驟操作，以出現(xiàn)陽性反應(yīng)的最高稀釋度報(bào)告結(jié)果（倍比稀釋）RPR/TRUST注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度應(yīng)為：23-29 抗原應(yīng)保存于4 冰箱，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)恢復(fù)到室溫。抗原應(yīng)防止凍結(jié)。血液標(biāo)本實(shí)驗(yàn)前應(yīng)恢復(fù)到室溫，并在24小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。試驗(yàn)完畢應(yīng)立即觀察結(jié)果。RPR/TRUST假陰性有25%-40%的

8、未治療梅毒在晚期隱性期可自然逆轉(zhuǎn)為陰性，約30%的心血管和神經(jīng)梅毒呈陰性前帶現(xiàn)象：抗原抗體量比例不適，抑制陽性反應(yīng)。一般易發(fā)生在滴度在1：500以上的標(biāo)本中。 1%的II期梅毒會(huì)出現(xiàn)前帶現(xiàn)象操作人員應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)的溫度，試劑盒從冰箱取出后應(yīng)恢復(fù)至室溫，室溫過低（10）可能出現(xiàn)假陰性或結(jié)果不準(zhǔn)確（即使出陽性結(jié)果，試驗(yàn)滴度也不準(zhǔn)）。RPR/TRUST生物學(xué)假陽性：急性或慢性傳染?。猴L(fēng)疹、麻疹、水痘、瘧疾、上呼吸道感染、病毒性肝炎，活動(dòng)性肺結(jié)核、麻風(fēng)，肺炎球菌性肺炎等；其它疾?。篠LE、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)心病、DLE、肝硬化、慢性腎炎、系統(tǒng)性硬化癥、自身免疫性溶血性貧血等；身體狀況改變：麻醉劑成癮、妊娠

9、、年老等一般假陽性血清抗體滴度1：8應(yīng)排除技術(shù)性、生理性和生物學(xué)假陽性，并用特異性試驗(yàn)來證實(shí)梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)已知抗原：梅毒螺旋體抗原檢測(cè)成分：抗梅毒螺旋體抗體方法： 1.熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS） 2.梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA） 3.梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA） 4.梅毒螺旋體ELISA試驗(yàn) 5.快速試驗(yàn)（膠體金）TPPA原理：用整菌和其片斷做抗原致敏的明膠顆粒，此致敏顆粒與人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見的凝集反應(yīng)敏感性和特異性均高敏感性：一期梅毒：70%-100%， 二期梅毒：100% 三期梅毒95%-98%特異性：94%-100%容許做梅

10、毒的精確診斷TPPA原理示意圖明膠顆?？乖璗PPA材料U型板 、微量加樣器（25ul）、振蕩器TPPA試劑盒(溶解液，樣本稀釋液, 致敏顆粒, 非致敏顆粒,質(zhì)控血清,專用滴管）方法TPPA結(jié)果判斷陰性():顆粒沉積在孔底,周邊平滑,或形成致密圓圈 可疑反應(yīng)():明膠顆粒沉積在孔底,中央形成致密小環(huán), 周邊平滑陽性(+/+):內(nèi)有清晰的寬環(huán)且外緣粗糙強(qiáng)陽性(+/ +):孔內(nèi)凝聚顆粒形成均一的膜覆蓋在整 個(gè)孔底者孔內(nèi)樣品與致敏和非致敏顆粒均產(chǎn)生凝集者,則需作重吸收試驗(yàn)后進(jìn)一步檢測(cè)TPPATPPATPPA注意事項(xiàng)專用滴管應(yīng)標(biāo)明不能混用，不能用來稀釋血清。未致敏孔不發(fā)生凝集，否則試驗(yàn)無效。如果標(biāo)本與非

11、致敏和致敏顆粒均產(chǎn)生凝集，需作重吸收試驗(yàn)。反應(yīng)板要清潔干凈，孔內(nèi)無異物。試劑保存于210，不可凍結(jié)，不同批號(hào)試劑間不可混用其它常用確證方法梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）快速檢測(cè)試劑（膠體金）梅毒血清學(xué)檢查臨床意義非特異性血清學(xué)試驗(yàn)陽性可能表示：現(xiàn)癥感染、接受或未接受過治療的近期感染可用于療效觀察、判愈、判定復(fù)發(fā)及再感染 早期梅毒患者經(jīng)充分治療后，滴度逐漸下降，半年到2年大部分非特異性血清學(xué)試驗(yàn)陰轉(zhuǎn)可能有生物學(xué)假陽性(滴度常1:8）適用于人群篩查、產(chǎn)前檢查及健康體檢梅毒血清學(xué)檢查臨床意義特異性血清學(xué)試驗(yàn)陽性結(jié)果表示現(xiàn)癥感染接受或末接受過治療的近期感染既往曾經(jīng)感染特異性血清學(xué)試驗(yàn)因其敏感

12、性高，特異性強(qiáng)，可作為證實(shí)試驗(yàn)及排除假陽性。特別是隱性梅毒及一些非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)陰性而又懷疑為梅毒的患者。在多數(shù)情況下，一旦感染了梅毒，特異性血清學(xué)試驗(yàn)抗體陽性可保持?jǐn)?shù)年，甚至終生陽性，故定性的特異性血清學(xué)試驗(yàn)不能用于觀察療效、判斷復(fù)發(fā)及再感染。梅毒血清學(xué)檢查臨床意義梅毒感染的較早期，機(jī)體尚未產(chǎn)生抗體，非特異性血清學(xué)試驗(yàn)和特異性血清學(xué)試驗(yàn)均可陰性，需追蹤觀察。試驗(yàn)結(jié)果RPR+,TPPA-RPR+,TPPA+RPR-, TPPA+RPR-, TPPA- RPR假陽性現(xiàn)癥梅毒，治愈的晚期梅毒極早期梅毒，治愈的早期梅毒排除梅毒感染意義極早期梅毒（尚無任何抗梅毒抗體產(chǎn)生）常見結(jié)果分析常見結(jié)果分

13、析常見結(jié)果分析檢測(cè)策略檢測(cè)策略梅毒檢測(cè)試劑評(píng)估結(jié)果試劑名稱敏感性 (% ) 特異性(%)廈門英科ELISA100.098.2北京科美發(fā)光 100.097.3珠海麗珠ELISA100.096.5北京萬泰ELISA 100.096.5濰坊三維ELISA 100.096.5北京科衛(wèi)ELISA100.095.6北京華大ELISA 99.599.1上?？迫AELISA 99.598.5北京金豪ELISA 99.197.4廈門英科RT 99.493.9杭州艾康RT94.796.5北京萬泰RT 94.793.9北京藍(lán)十字93.481.6梅毒螺旋體抗體檢測(cè)試劑評(píng)估結(jié)果試劑名稱敏感性 (% ) 特異性(%)北京萬泰TRUST97.888.0上海榮盛TRUST96.797.7上?？迫ARPR96.790.3鄭州安圖TRUST92.497.2北京金豪TRUST92.492.6英科新創(chuàng)TRUST91.398.6北京科衛(wèi)RPR89.187.0非梅毒螺旋體抗體檢測(cè)試劑評(píng)估結(jié)果梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)知識(shí)要點(diǎn)梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn) 梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)衛(wèi)生部衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)(WS2732007)。梅毒診斷分為一期、二期、三期、隱性和胎傳梅毒。梅毒診斷原則應(yīng)根據(jù)流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室檢查等進(jìn)行綜合分析。 梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn) 梅毒經(jīng)充分治療后，應(yīng)隨訪23年。第一年每3個(gè)月復(fù)查一次，以后每半年復(fù)查一次，包括臨床和血清（