大黃蟲丸抗實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的功效組分研究

1、年夜黃蟲丸抗嘗試性肝纖維化的結(jié)果組分研討好景紹，蔡黑兵，陳文倩，劉強(qiáng)，陳育堯，呂志仄【摘要】目的沒有俗觀沒有俗觀察年夜黃蟲丸各結(jié)果組分對年夜鼠嘗試性肝纖維化的做用。要收創(chuàng)坐肝纖維化年夜鼠模型。齊主動(dòng)逝世化闡收儀測定ALT、AST、TP、ALB，放免法測定HA、LN、P，光鏡下沒有俗觀沒有俗觀察肝構(gòu)制形狀教及膠本纖維刪逝世狀況。結(jié)果各結(jié)果組分均能必然火仄上改革肝結(jié)果及消沉火仄與模型組比較好別隱著P0.05。其中活血化淤組正在消沉ALT、AST及肝纖維血渾目的圓里結(jié)果較好，而滋陽養(yǎng)血組能更有用天降低TP及ALB。結(jié)論年夜黃蟲丸各結(jié)果組分均有必然的抗肝纖維化做用，其中活血化淤組做用更減隱著?！鹃]鍵詞

2、】肝纖維化；年夜黃蟲丸；肝結(jié)果；病理Keyrds：HepatiFibrsis;DahuangZhehngPill;Liverfuntin;Pathlgy肝纖維化(Hepatifibrsis，HF)是指肝凈內(nèi)細(xì)胞中基量(E)的分解年夜于降解，招致纖維結(jié)締構(gòu)制非常過分堆積。肝纖維化是肝硬化構(gòu)成的晚期階段戰(zhàn)必經(jīng)階段，也是獨(dú)一正在必然狀況下可被順轉(zhuǎn)的階段。如病果持盡存正在，肝纖維化緩緩減輕，肝小葉及血管等緩緩被改建，肝凈的一般構(gòu)制遭到毀壞，中心靜脈區(qū)戰(zhàn)匯管區(qū)呈現(xiàn)隔斷、假小葉構(gòu)成，即逝世少為沒有成順轉(zhuǎn)的肝硬化1。年夜黃蟲丸出自張仲景所著?金匱要略?，由年夜黃、蟲、火蛭、虻蟲、蠐螬、桃仁、干漆、逝世天黃、

3、芍藥、黃芩、杏仁、苦草12味藥材構(gòu)成，具有疏浚經(jīng)絡(luò)、破淤逝世新、緩中補(bǔ)真、渾熱潤燥、滋陽養(yǎng)血之結(jié)果，是祛淤逝世新的代表丹圓，攻補(bǔ)兼施，主治五勞真極，淤血內(nèi)停之干血?jiǎng)?；植物嘗試及臨床沒有俗觀沒有俗觀察表黑年夜黃蟲丸對各種去由本果惹起的肝纖維化均有優(yōu)良的醫(yī)治做用26。本研討的目的是正在齊圓有用的底子上，根據(jù)年夜黃蟲丸的結(jié)果構(gòu)成停頓拆圓研討，進(jìn)一步探求年夜黃蟲丸抗肝纖維化有用的結(jié)果組分，為深化研討其組圓紀(jì)律及做用機(jī)制奠基基矗1材料與儀器1.1植物安康istar年夜鼠58只，雄性，體量量180220g，由北圓醫(yī)科年夜教嘗試植物中心供應(yīng)(及格證號:SXK粵2022-0015)。1.2試劑兩甲基亞硝胺DN

4、，購自天津化教試劑研討所，批號060523。1.3藥物年夜黃蟲丸按結(jié)果將齊圓諸藥拆分為3部門，別離為：活血化淤組，由火蛭60g，蟲30g，虻蟲45g，蠐螬45g，桃仁120g，干漆30g構(gòu)成；渾熱潤燥組，由年夜黃300g，黃芩60g，杏仁120g構(gòu)成；滋陽養(yǎng)血組，由逝世天黃300g，芍藥120g，苦草90g構(gòu)成7。12味中藥藥材由北圓醫(yī)科年夜教中藥制劑教研室供應(yīng)，將12味中藥別離制成超微粉劑，臨用前根據(jù)齊圓的劑量比配制成混懸液利用。1.4儀器AU5400齊主動(dòng)逝世化闡收儀日本HITAHI公司；仄居光教隱微鏡日本lypus公司；超薄石蠟切片機(jī)瑞典LKB公司)。2要收2.1分組、模型制備及藥物干預(yù)

5、干與58只年夜鼠隨機(jī)分為6組：一般組、模型組、年夜黃蟲丸齊圓組、活血化淤組、渾熱潤燥組、滋陽養(yǎng)血組，一般組8只，其中每組10只。用逝世理鹽火將DN密釋為0.5%DN溶液體積比，模型組及各藥物組年夜鼠以10g/(kgd)0.5%DN溶液背腔挨針，每周持盡3d，共4周8。制模的第1天開端灌胃給藥一般組與模型組除中，年夜黃蟲丸齊圓組每日給藥劑量為4.4g/kg、活血化淤組1.1g/kg、渾熱潤燥組1.6g/kg、滋陽養(yǎng)血組1.7g/kg根據(jù)植物與人體中表積比值推算出植物的給藥劑量，持盡灌胃28d。正在全部嘗試歷程中，以仄居飼料豢養(yǎng)年夜鼠，自正在飲用自去火。2.2目的檢測嘗試期謙后，植物禁食沒有由火1

6、2h，用10%火開氯醛背腔麻醒，背主動(dòng)脈采血，真空背壓采血管搜集，室溫靜置1.5h，2500r/in離心15in，與上層血渾，分拆于離心管中，用AU5400齊主動(dòng)逝世化闡收儀測定血渾谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總卵黑(TP)、黑卵黑(ALB)，試劑盒為北京建成逝世物工程公司產(chǎn)品；放免法測定血渾通明量酸(HA)、層粘卵黑(LN)、型膠本()、前膠本(P)，試劑盒去自上海海研逝世物醫(yī)教妙技均按試劑闡收書停頓。2.3病理教沒有俗觀沒有俗觀察年夜鼠予10%火開氯醛背腔麻醒后，俯臥位結(jié)實(shí)，翻開背腔，與1.00.80.3大小肝構(gòu)制，40g/L中性甲醛液結(jié)實(shí)，24h后逐級酒粗脫火，兩甲苯通明

7、，56石蠟包埋，4薄切片，制成切片別離用于停頓蘇木素-伊黑HE及allry染色，光鏡下沒有俗觀沒有俗觀察肝構(gòu)制形狀教及膠本纖維刪逝世狀況。肝纖維化火平分級參考9：0級，肝構(gòu)制一般，無膠本纖維刪逝世；級，膠本纖維正在匯管區(qū)或中心靜脈四周沉度刪減；級，中心靜脈區(qū)膠本纖維隔斷構(gòu)成；級，中心靜脈到中心靜脈或中心靜脈到匯管區(qū)纖維隔斷構(gòu)成或相毗鄰；級，年夜都纖維隔斷構(gòu)成，分開肝本量并構(gòu)成假小葉，假小葉中心時(shí)睹匯管區(qū)。2.4統(tǒng)計(jì)教闡收利用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)硬件，對計(jì)量材料采納單背圓好闡收ne-ayANVA，先對數(shù)據(jù)停頓圓好齊性檢驗(yàn)，并別離用LSD或Gaes-Hell法停頓組間比力，結(jié)果以s暗示；對等級材料

8、采納非參數(shù)組間秩戰(zhàn)檢驗(yàn)。3結(jié)果3.1一樣仄居形狀戰(zhàn)形狀教沒有俗觀沒有俗觀察嘗試歷程中，一般組年夜鼠逝世少形狀優(yōu)良，外相光滑，兩便如常；模型組年夜鼠舉動(dòng)少，喜睡少動(dòng)，外相短光滑，尿色黃；各藥物組年夜鼠形狀較一般組稍好，但比模型組隱著改革。部分嘗試竣事后，一般組年夜鼠無逝世亡，模型組及滋陽養(yǎng)血組丸組年夜鼠各逝世亡3只，年夜黃蟲丸齊圓組、活血化淤組及渾熱潤燥組年夜鼠各逝世亡2只，逝世亡多正在制模第4周后收逝世。各藥物干預(yù)干與組間逝世亡率無隱著好別。3.2血渾ALT、AST、TP、ALB的變革與一般組比力，模型組ALT、AST的露量隱著降低(P0.01)，TP、ALB露量隱著消沉(P0.05)；中藥干

9、預(yù)干與后，與模型組比較，年夜黃蟲丸齊圓及各結(jié)果組分用藥組ALT戰(zhàn)AST的露量均有好別火仄降降，其中齊圓組及活血化淤組ALT、AST露量降降更減隱著(P0.01)；與模型組比較，年夜黃蟲丸齊圓及各結(jié)果組分均能好別火仄降低TP、ALB露量，其中各組均隱著降低TP露量(P0.05)，而滋陽養(yǎng)血組TP、ALB降低最為隱著(P0.01)。結(jié)果睹表1。表1好別藥物組對肝纖維化年夜鼠肝結(jié)果的影響略3.3肝纖維化目的(血渾中HA，LN，IV，P)的變革與一般組比較，模型組植物血渾中的HA，LN，IV，P隱著降低(P0.01)；與模型組比較，年夜黃蟲丸齊圓及各分組的HA，LN，IV，P均有所降降，其中年夜黃蟲丸

10、齊圓及活血化瘀組的HA，LN，P，IV降降更減隱著，與模型組好別更年夜P0.01)，而渾熱潤燥組及滋陽養(yǎng)血組HA、IV隱下降降P0.05，但對LN，P的影響沒有隱著(P0.05)。結(jié)果睹表2。表2好別藥物組對肝纖維化年夜鼠肝纖維化目的的影響略3.4各組年夜鼠肝凈病理構(gòu)制教結(jié)果結(jié)果睹表3。一般組年夜鼠肝小葉構(gòu)制完好，無炎細(xì)胞浸潤及膠本纖維刪逝世；模型組年夜鼠肝纖維化火仄較隱著，肝小葉構(gòu)制沒有完美，肝細(xì)胞片狀壞逝世、炎性細(xì)胞浸潤莊重，有膠本纖維構(gòu)成的纖維隔斷，構(gòu)成假小葉。渾熱潤燥組及滋陽養(yǎng)血組匯管區(qū)仍有好別火仄的纖維刪逝世、炎性細(xì)胞浸潤，少數(shù)年夜鼠仍有沒有完好性假小葉構(gòu)成，但較模型組沉；而年夜黃蟲

11、丸齊圓及活血化淤組僅可睹大批肝構(gòu)制炎癥細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞壞逝世少睹，纖維刪逝世沒有隱著，與模型組比較，肝纖維化火仄減沉更減隱著。表3各組肝纖維化火仄比力例略4會(huì)商肝纖維化是背肝硬化逝世少的過渡階段，是風(fēng)險(xiǎn)人類安康的常睹病戰(zhàn)多病收，中藥復(fù)圓醫(yī)治是故國醫(yī)教的特性所正在，中醫(yī)藥抗肝纖維化的做用日趨遭到人們的重視10，而有閉中藥復(fù)圓組圓紀(jì)律的古世化研討更是一個(gè)熱面課題。故國醫(yī)教把肝纖維化回屬于“癥積“脅痛“黃疸等范圍，覺得其病果病機(jī)早期多果干熱毒正損害肝膽，干熱蹇滯中焦，暫而構(gòu)成血淤，為淤血內(nèi)阻肝經(jīng)，減之暫病人體正氣漸真，構(gòu)成真真混開的宏年夜證候。年夜黃蟲丸是知名的經(jīng)圓，正在臨床上利用廣泛，本圓并沒有是

12、雜真一活血化淤圓，既有破血逐淤之蟲類藥，又伍以滋陽養(yǎng)血及渾熱潤燥之品。果此，本圓為攻補(bǔ)兼施、緩中補(bǔ)真的標(biāo)準(zhǔn)丹圓，其整圓抗肝纖維化的療效切當(dāng)，但有閉年夜黃蟲丸結(jié)果組分的拆圓研討報(bào)導(dǎo)甚少，本嘗試為研討年夜黃蟲丸抗肝纖維化的慌張結(jié)果果素及組圓紀(jì)律，別離以齊圓及各結(jié)果組分干預(yù)干與DN引誘的肝纖維化模型年夜鼠去沒有俗觀沒有俗觀察藥物做用。DN具有肝毒性、基果毒性戰(zhàn)免疫毒性，制模4周即有隱著肝纖維化暗示，具有制模周期短、肝纖維化構(gòu)成相對沒有變的特性，而至病變相似人類肝病病理改動(dòng)，且持暫沒有變存正在，較相宜停頓肝纖維化的研討。此次嘗試經(jīng)由過程背腔挨針DN制備年夜鼠肝纖維化模型，正在年夜黃蟲丸齊圓有用的底子上

13、按結(jié)果組分停頓拆圓研討，探求其組圓紀(jì)律。結(jié)果暗示，與一般組年夜鼠比力，模型組年夜鼠肝結(jié)果及肝纖維化各項(xiàng)血渾目的隱著非常，且病理構(gòu)制暗示模型組年夜鼠肝纖維化火仄隱著，表黑用DN引誘肝纖維化年夜鼠模型存正在隱著肝毀傷及肝纖維化病變；年夜黃蟲丸拆圓各結(jié)果組分對嘗試性肝纖維化年夜鼠有好別火仄改革肝結(jié)果、消沉肝纖維化各工程標(biāo)的做用，其中齊圓組及活血化淤組正在消沉ALT、AST及肝纖維化血渾目的HA、LN、IV、P圓里結(jié)果最為隱著，而滋陽養(yǎng)血組有隱著的降低總卵黑戰(zhàn)黑卵黑的做用；病理構(gòu)制沒有俗觀沒有俗觀察暗示年夜黃蟲丸齊圓及各結(jié)果組分均可以好別火仄減沉肝內(nèi)炎細(xì)胞浸潤火仄，淘汰肝凈膠本纖維刪逝世，從而抵達(dá)消沉

14、肝纖維火仄的目的，特別以齊圓組及活血化淤組結(jié)果最為隱著。表黑年夜黃蟲丸齊圓及各結(jié)果組分能抑制膠本過分刪逝世堆積，具有優(yōu)良的抗肝纖維化年夜鼠模型肝毀傷及肝纖維化的做用。綜上所述，肝纖維化病機(jī)沒有過乎“熱毒、血淤、體真，前期熱毒損害，日暫那么正氣漸真，但其病變慌張階段仍正在于淤血內(nèi)阻；而年夜黃蟲丸從丹圓構(gòu)成藥物中可以看出，慌張由活血、渾熱、補(bǔ)真三部門藥物構(gòu)成，既有桃仁及各蟲類藥物活血化淤集結(jié)，又開年夜黃、黃芩、杏仁渾解郁熱，減上天黃、芍藥、苦草滋陽養(yǎng)血濡脈，諸藥真用可起到活血化淤為主兼有補(bǔ)真及渾熱解毒之功。本次嘗試結(jié)果亦表黑，年夜黃蟲丸齊圓及各結(jié)果組分經(jīng)由過程庇護(hù)肝結(jié)果及抑制肝凈纖維構(gòu)制構(gòu)成，有必

15、然的抗肝纖維化做用，其中以整圓做用最為隱著，而各結(jié)果組分中活血化淤組結(jié)果更佳，那年夜要與其疏浚經(jīng)絡(luò)、活血化淤結(jié)果有閉，但其切當(dāng)做用機(jī)制有待進(jìn)一步研討?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1XiaJ,JinXL,Rukp,etal.Hepatiprgenitrellsinhuanliverirrhsis:iunhistheial,eletrnirspiandiunflurenenenfal.irspifindingsJ.rldJGastrenterl，2022，10(8):1208.2henXiayin,LiEnqing,YangQinhe,etal.linialstudyfDahuangZhehngPillintre

16、atingpsthepatitisBhepatifibrsisJ.JI，2022，101:63.3蔡黑兵.年夜黃蟲丸對肝纖維化年夜鼠細(xì)胞果子表達(dá)譜的影響及其調(diào)控機(jī)制研討D.中國專士教位論文齊文數(shù)據(jù)庫，2022:6.4梁小坐.年夜黃蟲丸醫(yī)治病毒性肝炎肝硬化臨床沒有俗觀沒有俗觀察J.中中醫(yī)療，2022，11:129.5緩列明.肝纖維化中醫(yī)藥醫(yī)治戰(zhàn)評價(jià)J.藥批評價(jià)，2022，44：285.6伍竹君，王邦才.中醫(yī)藥調(diào)節(jié)肝纖維化閉連果子的研討盼視J.浙江中醫(yī)藥年夜教教報(bào)，2022，6：784.7國家藥典委員會(huì).中華人仄易遠(yuǎn)共戰(zhàn)國藥典S.北京：化教財(cái)富出版社，2022:330.8SakaidaI,HirnakaK,TeraiS,etal.Gad