乳與乳制品非常規(guī)理化指標檢驗維生素B6的測定

1、乳與乳制品非常規(guī)理化指標檢驗維生素B6的測定 YLNB 5.12 1. 范圍本方法規(guī)定了用反相液相色譜法測定維生素B6的方法。本方法適用于嬰幼兒配方食品和乳粉中維生素B6的測定。2.原理樣品經(jīng)熱水萃取等前處理后，經(jīng)C18色譜柱分離，熒光檢測器檢測，外標法定量維生素B6(吡哆醇 、吡哆醛、吡哆胺)的含量。3. 試劑所有試劑，如未注明規(guī)格，均指分析純；所有實驗用水，如未注明其他要求，均指三級水。3.1 高峰氏淀粉酶3.2 鹽酸溶液為:5mol/l3.3 氫氧化鈉溶液為:5mol/l3.4 冰乙酸:優(yōu)級純3.5 無水甲醇:色譜純3.6 辛烷磺酸鈉:優(yōu)級純3.7 三乙胺體積分數(shù)99.9%3.8 標準溶

2、液3.8.1 吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺標準貯備溶液濃度均為200ug/ml。準確稱取吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺標準品各用水溶解并定容至容量瓶中。3.8.2 吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺標準工作溶液，濃度均為2.0 ug/ml。取1.0ml標準貯備溶液（3.8.1），用水定容至100ml。4. 儀器4.1 超聲波振蕩器。4.2 高壓液相色譜儀：帶熒光檢測器。4.3 色譜柱：304mm，C18或具有同等性能的色譜柱。4.4 酸度計。5. 方法5.1 樣品預處理5.1.1 含淀粉的樣品精確稱取 5.0g 樣品，放人150mL錐形瓶中，加入0.5g Taka淀粉酶(3.1)，再加入25mL45- 50的蒸餾水，混

3、合均勻后，用氮氣排除瓶內(nèi)空氣，蓋上瓶塞，置450烘箱內(nèi)30min，取出冷卻至室溫。5.1.2 不含淀粉的樣品精確稱取5.0g 樣品，放入150mL錐形瓶中，加入25mL60的蒸餾水，振搖，靜置5-l0min，使樣品充分溶解并降至室溫。5.2 測定液的制備5.21 用鹽酸溶液（3.2）慢慢調(diào)節(jié)樣品溶液的pH值至1.70 ，放置約1min，再用氫氧化鈉溶液(3.3)調(diào)節(jié)樣品溶液的pH值至4.50。5.2.2 將樣品溶液轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶中，用蒸餾水反復沖洗錐形瓶，洗液合并于50mL容量瓶中，并用水定容至50mL.5.2.3 把上述容量瓶放人超聲波水浴(4.1)中，振蕩10min5.2.4 另取5

4、0mL容量瓶，上面放入三角漏斗和濾紙，把樣品溶液倒入其中，自然過濾。濾液再經(jīng)0.45 um微孔濾膜加壓過濾，用試管收集，即為樣品待測液。5.3 色譜條件檢測靈敏度:0.002AU/ MV 檢測器條件:熒光激發(fā)波長Ex:293nm，發(fā)射波長Em:395nm。柱溫 :30流速 : 1.00mL/min流動相 : 體積分數(shù)為5.0%的甲醇、0.20 g/l00mL辛烷磺酸鈉、體積分數(shù)為25%的三乙胺水溶液，用乙酸調(diào)pH= 3.00 。5.4 定量分析(外標法)注射一定量的標準工作液(3.8.2)進入色譜儀，得到組分i的峰高(或峰面積)Ai，注射等體積的樣品待測液進入色譜儀，得到組分i的峰高(或峰面積)Bi。6. 結(jié)果計算n樣品中維生素B6的含量(mg/l00g)= X醇 + X醛+ X胺(1)注:樣品中維生素B6是各組分的含量之和.樣品中各組分含量(mg/100g)=式中:Bi 樣品組分i的峰高或面積；Ai 標準工作液中組分i的峰高或面積；C 標準工作液中