專(zhuān)題五DNA的粗提取與鑒定1

1、復(fù)習(xí)：DNA的粗提取與鑒定1 DNA的溶解性DNA和蛋白質(zhì)等成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同利用這一特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)柠}濃度就能使DNA充分溶解，而使雜質(zhì)沉淀；或者讓其他成分溶解，DNA析出 DNA不溶于酒精溶液 DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性1、提取DNA的原理2DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離。 DNA不溶于酒精溶液 DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性 蛋白酶水解蛋白質(zhì)， 對(duì)DNA沒(méi)有影響 高 溫大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受6080 而DNA在80以上才會(huì)變性 洗滌劑溶解細(xì)胞膜，去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì) 但對(duì)DNA沒(méi)有影響34（1）實(shí)驗(yàn)材料的選取從下列材

2、料中選取23種原則：菜花、香蕉、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜；魚(yú)卵、豬肝、雞血、哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞；在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌凡是含有DNA的生物材料都可以考慮選用DNA含量相對(duì)較高的組織2、DNA提取的實(shí)驗(yàn)步驟5從核DNA數(shù)目來(lái)看，豬38條，雞78條，哺乳動(dòng)物血0條，獼猴桃58條，洋蔥16條，豌豆14條，菠菜12條，大腸桿菌1條。請(qǐng)選擇動(dòng)植物材料各一種。哺乳動(dòng)物的血細(xì)胞無(wú)細(xì)胞核及細(xì)胞器。液體培養(yǎng)基中的大腸桿菌的DNA量減少。魚(yú)卵是減數(shù)分裂的產(chǎn)物。（1）實(shí)驗(yàn)材料的選取2、DNA提取的實(shí)驗(yàn)步驟6（2）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液1、動(dòng)物細(xì)胞2、植物細(xì)胞容易破碎需要溶解細(xì)胞膜雞血細(xì)胞溶液：加入一定量的

3、蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過(guò)濾后收集濾液 加入一定的洗滌劑和食鹽 充分的攪拌和研磨，過(guò)濾后收集研磨液2、DNA提取的實(shí)驗(yàn)步驟7（3）除去濾液中的雜質(zhì) DNA的溶解：濾液2mol/L的NaCl溶液40mL， 玻棒沿一個(gè)方向輕緩攪拌。析出含DNA的粘稠物：濾取含DNA的粘稠物： 在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并沿一個(gè)方向輕輕攪拌，出現(xiàn)絲狀物；當(dāng)絲狀物不在增加時(shí)，停止加水（此時(shí)NaCl溶液的濃度相當(dāng)于0.14mol/L）。 用多層紗布過(guò)濾，含DNA的粘稠物留在紗布上。 1、DNA的初次溶解與析出：2、DNA提取的實(shí)驗(yàn)步驟82、DNA粘稠物的再溶解與析出：20mL2mol/L的NaCl溶液 含DNA的粘

4、稠物在20mL燒杯中輕緩攪拌3min，使盡可能多的DNA溶解在NaCl溶液。過(guò)濾含有DNA的NaCl溶液： 用放有兩層紗布的漏斗過(guò)濾步驟所得的溶液，濾液中含有DNA。提取含有雜質(zhì)較少的DNA： 所得的濾液體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻酒精50mL，用玻棒沿一個(gè)方向輕緩攪拌，溶液中（析出）出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。（3）除去濾液中的雜質(zhì)9101.共有“五次攪拌、三次過(guò)濾，兩次析出”2.加入“兩次蒸餾水，兩次NaCl溶液，一次酒精”11試劑：（二）DNA的鑒定條件：二苯胺沸水浴條件下，DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色沸水浴現(xiàn)象：1. DNA的鑒定的原理122. DNA的鑒定 向

5、兩支試管中分別加入 2mol/L NaCl 溶液5ml 其中一支試管中加入DNA絲狀物 各加入二苯胺試劑4ml 混勻后，置于沸水浴中加熱5min 待冷卻后，比較兩只試管中溶液的顏色變化 觀察現(xiàn)象：溶解絲狀物的溶液變?yōu)樗{(lán)色132.實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)的量濃度為2 molL和0.14 molL對(duì)DNA有何影響?1.在DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是( )。A.稀釋血液、沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出C.使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA答：B答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出143.DNA遇二苯胺(沸水浴)會(huì)染成( ) A.磚紅色 B.橘黃色 C.紫色 D.藍(lán)色4.提取雞血中的