金屬硫蛋白對仔豬抗氧化功能及SOD基因表達(dá)的影響

1、金屬硫卵白對仔豬抗氧化成效及SOD基因表達(dá)的影響李麗立，劉云華，侯德興，印遇龍，張彬，侯振平，邱細(xì)敏【關(guān)鍵詞】金屬硫卵白；抗氧化酶；基因表達(dá)；仔豬【Keyrds】etallthinein;antixidativeenzye;geneexpressin;piglet【摘要】目的：用仔豬作模子，研究經(jīng)鋅元素誘導(dǎo)的外源性金屬硫卵白ZnT對機(jī)體抗氧化成效和超氧化物歧化酶(SD)基因表達(dá)的影響.要領(lǐng)：選用杜長大雜交仔豬18頭，隨機(jī)分為3組(1,2和3.別離肌肉注射經(jīng)生理鹽水溶解的豬肝ZnT0g/kg(1組，0.8g/kg2組,1.6g/kg3組，讓仔豬活動產(chǎn)生應(yīng)激.注射T后3h和6h，別離從每組取3頭仔

2、豬屠宰取肝臟，測定肝臟中與抗氧化有關(guān)的生化指標(biāo)，檢測肝臟SD基因表達(dá)程度.效果：在應(yīng)激條件下，增補(bǔ)外源性ZnT一段時間后，仔豬肝臟SD，GSHPX活性明顯升高(P0.05)，DA含量明顯低落(P0.05)，肝臟抗活性氧和抗超氧陰離子程度也有進(jìn)步的趨勢.在注射ZnT后6h，0.8g/kg，1.6g/kg組仔豬肝臟SD基因表達(dá)程度比比擬組明顯進(jìn)步(P0.05).0.8g/kg組和1.6g/kg組6hSD基因表達(dá)程度比3h明顯增長，表白T對SD基因表達(dá)的誘導(dǎo)與時間和劑量干系嚴(yán)密.結(jié)論：增補(bǔ)外源性ZnT可進(jìn)步應(yīng)激機(jī)體的抗氧化物酶活性，從而進(jìn)步機(jī)體的抗應(yīng)激本領(lǐng).【關(guān)鍵詞】金屬硫卵白；抗氧化酶；基因表達(dá)；

3、仔豬0弁言1質(zhì)料和要領(lǐng)1.1質(zhì)料選用胎次、日齡雷同而且體質(zhì)量相近的杜長大三元雜交雄性仔豬18頭，14d一次性斷奶，單欄豢養(yǎng)，自由采食和飲水.試驗前體質(zhì)量4.420.24kg.屠宰前1d停食，不竭水.梯度PR儀：德國Eppendrf消費(fèi)，型號為5331055888；穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀：北京六一儀器廠消費(fèi)，型號為DYY6B；凝膠成像體系：美國UVPBilagingSyste消費(fèi)，型號為GDS8000；紫外闡發(fā)儀：北京六一儀器廠消費(fèi)，型號為D9403B；紫外分光光度計：德國Eppendrf消費(fèi)，型號為603105430；超低溫冰箱：青島海爾股份消費(fèi)，型號為BD396LT65；臺式離心機(jī)：德國Eppend

4、rf消費(fèi)，型號為entrifuge5415D；低溫離心機(jī)：德國Eppendrf消費(fèi)，型號為entrifuge5810R；微波爐：青島海爾股份消費(fèi)，型號為HR6702D.豬肝ZnT：本課題組提取的產(chǎn)物；BIXYTEHSD525T試劑盒：購自XIS公司；谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPX)活力測定試劑盒、丙二醛(DA)測定試劑盒、活性氧(RS)測定試劑盒、超氧陰離子(SA)自由基測定試劑盒：購自南京建成生物工程研究所；ISGEN總RNA抽提試劑盒：購自日本基因株式會社；RTPR試劑：購自AershaPharaiaBiteh公司；瓊脂糖及Tris：購自Rhe公司；GeneRulerT100bpDNALa

5、dder：購自BIFerntas公司.1.2要領(lǐng)2效果2.1T對仔豬肝臟抗氧化本領(lǐng)的影響仔豬應(yīng)激時注射外源性ZnT一段時間后，仔豬肝臟SD，GSHPX活性升高，DA含量低落，抗活性氧和抗超氧陰離子程度也有進(jìn)步的趨勢.尤其在注射ZnT后6h，肝臟SD，GSHPX活性，DA含量各組比力差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05，表1).同時由表1知，注射雷同劑量ZnT，6hSD，GSHPX活性比3h進(jìn)步，且組6hSD，GSHPX活性比3h進(jìn)步(P0.05)，DA含量低落(P0.01).各組肝臟抗活性氧和抗超氧陰離子程度6h與3h比擬也有進(jìn)步的趨勢.表1差異劑量的T對仔豬肝臟中與抗氧化有關(guān)的指標(biāo)的影響2.2T對

6、仔豬肝臟SD基因表達(dá)程度的影響由表2和圖1,2可知，注射T后3h各組比擬，肝臟SD基因表達(dá)程度差異不明顯(P0.05).注射T后6h各組比擬，組肝臟SD基因表達(dá)程度比組明顯進(jìn)步(P0.05).注射雷同劑量ZnT在差異的時間，第1組3h與6h肝臟中SD基因表達(dá)程度比擬差異不明顯(P0.05).第2組和第3組6h肝臟中SD基因表達(dá)程度比其3h的明顯進(jìn)步(P0.05).表2差異劑量的T對仔豬肝臟中SD基因表達(dá)程度的影響3討論正常環(huán)境下，機(jī)體存在一個完備的包羅酶系和非酶系的抗氧化體系，抗氧化酶有SD，GSHPX等，非酶系有VE、復(fù)原性谷胱甘肽等，均有掃除自由基的作用.在他們的協(xié)同作用下，使體內(nèi)過多的自

7、由基變化為無害的水，起到抗氧化的作用.羥自由基是最活潑，也是毒性較大的含氧自由基.由于至今體內(nèi)尚未創(chuàng)造羥自由基的掃除酶系，T有用地抗羥自由基作用顯得緊張.Adel等5比力了T與谷胱甘肽抗羥自由基庇護(hù)DNA的作用，創(chuàng)造當(dāng)T濃度為13l/L時，DNA的落解險些完全被按捺，而10l/L的GSH才氣到達(dá)此作用.而且在某些應(yīng)豪環(huán)境下，GSH程度落落，而T合成增長.本試驗效果表白，注射外源ZnT后，在必然的時間和濃度下，可明顯進(jìn)步仔豬肝臟SD，GSHPX的活性，低落肝中DA的含量.肝臟抗活性氧和抗超氧陰離子的程度也有進(jìn)步的趨勢,從而進(jìn)步機(jī)體的抗應(yīng)激本領(lǐng).本效果同時表白，仔豬應(yīng)激時，外源性增補(bǔ)ZnT一段時間

8、后，SDRNA表達(dá)程度進(jìn)步，SD的活性增長.Sugin等6研究小鼠的黃酮細(xì)胞創(chuàng)造SD活性還受精胺的調(diào)控，這種調(diào)控是產(chǎn)生在轉(zhuǎn)錄程度.ZnT中半胱氨酸含量富厚，在巰基化合物天生的同時，并有精氨酸殘基，如許提供了SD活性加強(qiáng)的物質(zhì)底子.【參考文獻(xiàn)】1祁克宗.內(nèi)毒素性微循環(huán)山羊氧自由基代謝的研究J.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，1999,32(3):90-95.2ZhuZB.EffetfZn7etallthinEinnxidativestressinliverfratsithseveretheralinjuryJ.AtaPharalSin，2022,24(8):764-760.3鄭軍恒，李海洋，茹剛，等.金屬硫卵白掃

9、除羥自由基的研究J.北京大學(xué)學(xué)報:天然科學(xué)版，1999,35(2):573-576.4HuDX,Fukuda,Fujii,etal.Transriptinalregulatinfnitinaideadeninedinuletidephsphate:quinnexidredutaseinurinehepataellsby6(ethylsufinyl)hexylisthiyanate,anativepriniplefasabi(Eutreaasabiaxi.)J.anerLett,2000,161:195-200.5AdelJ,deRuiterN.InhibitinfhydrxylradialgeneratedDNAdegradatinbyetallthineinJ.TxilLett,1989,47:191-196.6SuginN,Telleria.Differntialregulatinfpperzinsuperxidedi