實(shí)驗(yàn)室生物安全培訓(xùn)-溫州2013524課件

1、病原微生物實(shí)驗(yàn)活動中的生物安全溫州醫(yī)科大學(xué) 二一三年五月內(nèi) 容生物安全的重要性；生物風(fēng)險評估原則；實(shí)驗(yàn)活動的生物安全；個人防護(hù)裝備的選擇。一、實(shí)驗(yàn)室生物安全的重要性向左的 條向右的 條左寬右窄的 條右寬左窄的 條圖形特點(diǎn)描述比較大小圖形特點(diǎn)描述錯覺是指產(chǎn)生與實(shí)際不符的判斷性的視覺出錯是一種本能?。ㄒ唬┬掳l(fā)傳染病傳染性疾病導(dǎo)致的死亡人數(shù)占全世界死亡總數(shù)的四分之一，每年至少會造成1100萬人死亡；新發(fā)和再發(fā)傳染病接踵而來，嚴(yán)重威脅公眾健康；自1973年至今，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了約40種新的病原體。 （三）實(shí)驗(yàn)室獲得性感染（1） 實(shí)驗(yàn)室獲得性感染(LAIs) 由病原微生物實(shí)驗(yàn)活動引起的實(shí)驗(yàn)室人員及相關(guān)人員感染

2、。 最常見的病原微生物： 布魯氏桿菌、Q熱、肝炎病毒、土拉 、結(jié)核、鸚鵡熱。（三）實(shí)驗(yàn)室感染事件（3）1999-2011年病毒感染病例報道 （三）實(shí)驗(yàn)室感染事件（4）1999-2011年細(xì)菌感染病例報道 Cowpox, Laboratory infection. One reported case in USA (Georgia). Promedmail report. 2011. Venter M, et al. Transmission of West Nile virus during horse autopsy letter. Emerg Infect Dis. 2010 Labora

3、tory-Acquired Vaccinia Virus Infection, United States (Virginia), 2008. Morbidity and Mortality Weekly Report, Centers for Disease Control and Prevention. July 31, 2009Venter M,et al. Cytokine induction after laboratory-acquired West Nile virus infection. N Engl J Med 2009; 360 (12): 1260-2.Needle S

4、tick Injury, Ebola virus, one case in Germany. Promedmail - report1 - report2 - report3. 2009. Laboratory-Acquired Vaccinia Exposures and Infections, United States, 2005 - 2007. Morbidity and Mortality Weekly Report, Centers for Disease Control and Prevention. 2008 .Lewis FMT,et al. Ocular Vaccinia

5、Infection in Laboratory Worker, Philadelphia 2004. Emerging Infectious Diseases. 2006; 12: 134-137 .Lim PL, Kurup A, Gopalakrishna G et al., Laboratory-acquired severe acute respiratory syndrome(SARS). N Engl J Med. 2004; 350: 1740-1745. Wlodaver Cg, et al. Laboratory-acquired vaccinia infection. J.

6、 Clin. Virol. 2004; 29 (3): 167-170. Ebola virus , Lab Accident Death - Russia (Promedmail - report1 - report2 - report3 - report4): 2004. Mempel M, et al. Laboratory acquired infection with recombinant vaccinia virus containing an immunomodulating construct. J Invest Dermatol. 2003; 120(3):356-358.

7、 Laboratory-Acquired vaccinia infection. Public Health Agency of Canada, August 1, 2003.Moussatch N,et al. Accidental infection of laboratory worker with vaccinia virus. Emerging Infectious Diseases. 2003; 9(6): 724-726 .Laboratory-Acquired West Nile Virus Infections (USA), Morbidity and Mortality W

8、eekly Report, Centers for Disease Control and Prevention. 2002.2000-2011年實(shí)驗(yàn)室病毒感染病例報道 （三）實(shí)驗(yàn)室感染事件HFRS氣溶膠傳播HFRS 發(fā)生在野外工作人員Hantavirus 經(jīng)常發(fā)生在實(shí)驗(yàn)室人員第一例，日本，13個醫(yī)生和一個獸醫(yī)1975 -1978年，多國報道 80年代，中國，多個實(shí)驗(yàn)室動物感染1983年，陜西16 例HFRS實(shí)驗(yàn)室感染事件 2006-2007年，沈陽，8例實(shí)驗(yàn)室感染事件2010年12月，4只未經(jīng)檢疫的山羊進(jìn)入了東北農(nóng)業(yè)大學(xué)的實(shí)驗(yàn)室28名師生在實(shí)驗(yàn)后患上了布魯桿菌?。ㄈ?shí)驗(yàn)室感染事件布病感染事

9、件不當(dāng)進(jìn)入氣溶膠發(fā)生器開放工作臺培養(yǎng)8位感染實(shí)驗(yàn)室工作人員的風(fēng)險From: Baron and Miller, “Bacterial and Fungal Infections Among Diagnostic Laboratory Workers: Evaluating the Risks”, Diagn Microbiol Infect Dis. 2008 Mar; 60(3):241-6生物安全培訓(xùn)不充分安全使用生物安全設(shè)備安全程序需要改進(jìn)指導(dǎo)手冊操作對像環(huán)境（五）實(shí)驗(yàn)室生物安全的意義操作者（六）生物安全原則生物安全的基礎(chǔ)：對潛在有害生物因子的防護(hù)防護(hù)的目的：減少或消除實(shí)驗(yàn)室工作人員、其

10、他人員或外環(huán)境對潛在危險因子的暴露。生物風(fēng)險評估（1）危險性評估：認(rèn)識病原微生物的危險性，確定工作人員暴露的危險及導(dǎo)致LAIs的可能性，及感染造成的后果危險性評估信息：選擇能阻止LAIs的合適生物安全級別、微生物操作、安全和防護(hù)裝置的指南。風(fēng)險評估方法 確立微生物危險性。鑒定實(shí)驗(yàn)操作的危險性。確立安全級別和選擇防護(hù)措施。評價人員安全操作熟練度和安全設(shè)備完整性。專家、IBC檢查危險性評估。 生物風(fēng)險評估內(nèi)容（2） 微生物危險； 實(shí)驗(yàn)室操作危險； 實(shí)驗(yàn)室人員控制危險的能力 實(shí)驗(yàn)室人員的培訓(xùn)、操作技術(shù)的掌握、養(yǎng)成好的習(xí)慣，以及正確使用防護(hù)措施和安全設(shè)備。1、確立微生物危險性微生物的主要危險特性： 傳

11、染性、易感性、致病性、毒力的大小，以及有效的預(yù)防措施和治療手段。實(shí)驗(yàn)室感染的可能傳播途徑、感染劑量、在環(huán)境中的穩(wěn)定性、宿主范圍和地方性。報道的實(shí)驗(yàn)室感染事件注意事項(xiàng)自然傳播途徑實(shí)驗(yàn)室感染所引起疾病的性質(zhì)和程度與自然感染途徑不同氣溶膠傳播的微生物的實(shí)驗(yàn)室危害。傳染性氣溶膠可能不是疾病的公認(rèn)傳播途徑。感染劑量和穩(wěn)定性 考慮動物傳染病的危險性 微生物的來源：注意非本土的微生物 基因改造微生物的危險性細(xì)胞培養(yǎng)：人類細(xì)胞系屬于職業(yè)性暴露的血源性病原微生物 細(xì)胞培養(yǎng)風(fēng)險潛伏的皰疹病毒重新被激活HIV、HBV、HCV意外移植人類腫瘤細(xì)胞操作感染淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒的裸鼠導(dǎo)致多種LAIs人類細(xì)胞系可能會包

12、含血源性病原微生物 近30年有原代培養(yǎng)引起20 LAIsHerpes B (CHV-1), prions 原癌基因的潛伏：HeLa細(xì)胞的HPV-18 猴細(xì)胞SIV, STLV, SV5 BCBL-1細(xì)胞中的 HHV-82、鑒定實(shí)驗(yàn)室操作的風(fēng)險 前面的四種傳播途徑容易檢測，僅占所報道LAIs的20%。大多數(shù)感染的報導(dǎo)沒有足夠的信息確定感染的傳播途徑。調(diào)查發(fā)現(xiàn)可能的傳染源包括動物、體外寄生蟲、臨床標(biāo)本、微生物和氣溶膠，其中氣溶膠大約占50%。LAIs主要的實(shí)驗(yàn)室傳播途徑：注射針頭或銳器刺傷；溢出和飛濺；吸吮；動物叮咬和抓傷；吸入含有傳染物質(zhì)的氣溶膠主要的實(shí)驗(yàn)室操作危險 微生物的濃度、懸液的體積、產(chǎn)

13、生小顆粒氣溶膠和大顆粒飛沫的儀器和操作程序、銳器的使用動物操作 叮咬和抓傷、暴露于動物傳染微生物和接觸實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的傳染性氣溶膠復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)操作 3、確立安全級別和防護(hù)措施 實(shí)驗(yàn)操作、安全設(shè)備和防護(hù)裝置 ；存在操作微生物要求比微生物概述所描述的預(yù)防措施更高的情況；評價增加次級防護(hù)措施的有效性；人員對疾病的敏感性安全儀器和防護(hù)裝備的潛在風(fēng)險工作人員自身是第一線防護(hù)措施 防護(hù)依賴于 （1）責(zé)任 （2）熟練的微生物操作 （3）正確使用安全裝置。 減少操作的風(fēng)險：培訓(xùn)、認(rèn)識微生物和操作的危險性、好的習(xí)慣、謹(jǐn)慎、專注和關(guān)心（第二種本能）防護(hù)裝置和安全設(shè)備 4、工作人員和安全設(shè)備的評估 實(shí)驗(yàn)室人員和公眾安全保護(hù)

14、依賴工作人員；確保實(shí)驗(yàn)室工作人員已掌握熟練的技術(shù)，保證所必需的安全設(shè)備以及養(yǎng)成好的習(xí)慣；評估人員的能力：培訓(xùn)情況、處理經(jīng)驗(yàn)、儀器使用、應(yīng)急反應(yīng)和責(zé)任感。確保安全設(shè)備有效和正常工作。 三、實(shí)驗(yàn)活動中的生物安全1、實(shí)驗(yàn)活動的形式標(biāo)本分裝分離鑒定核酸提取PCR擴(kuò)增純化芯片檢測病理學(xué)檢測免疫組化血凝/血凝抑制實(shí)驗(yàn)技術(shù)2、實(shí)驗(yàn)技術(shù)動物實(shí)驗(yàn)中和實(shí)驗(yàn)空斑實(shí)驗(yàn)生物安全3、實(shí)驗(yàn)活動的類型標(biāo)本采集處理移液操作生物安全柜銳器的使用離心勻漿、超聲消毒醫(yī)療廢物4、實(shí)驗(yàn)室的生物安全規(guī)范 實(shí)驗(yàn)室的運(yùn)行規(guī)范儀器設(shè)備的使用規(guī)范針對感染性材料的操作規(guī)范個人防護(hù)用品的使用規(guī)范 實(shí)驗(yàn)室操作人員應(yīng)經(jīng)過培訓(xùn)；操作人員正確掌握標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范

15、；熟悉生物安全實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的一般規(guī)則；掌握各種儀器、設(shè)備的操作步驟。5、實(shí)驗(yàn)室工作人員必備條件1、避免產(chǎn)生氣溶膠；2、適當(dāng)處理廢棄物；3、工作結(jié)束清除污染。 - 實(shí)驗(yàn)室設(shè)施/設(shè)備- 個人防護(hù)- 技術(shù)規(guī)范- 消毒6、避免感染性物質(zhì)擴(kuò)散7、標(biāo) 本 采 集樣本類型Second column not covered in Bloodborne Pathogen Standard, possibly not occupationally related.可能傳染病原微生物感染狀態(tài)潛伏期檢測的范圍不充分?jǐn)y帶者組織和分泌物血液傳播 (HBV, HCV, HIV, HTLV-1)瘧疾、梅毒、巴貝蟲病、布氏桿菌病

16、，鉤端螺旋體病、回歸熱蟲媒病毒感染、克雅病和病毒性出血熱 7、標(biāo)本采集樣本感染風(fēng)險7、標(biāo) 本 采 集1、采集標(biāo)本者基本素質(zhì) 經(jīng)過專門培訓(xùn)。 采集標(biāo)本前要穿戴好防護(hù)裝置。2、標(biāo)本的采集 所有操作均要戴手套； 由受過培訓(xùn)的人員采集標(biāo)本； 標(biāo)本應(yīng)置于適當(dāng)容器中運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室。3、采集標(biāo)本的包裝 螺口塑料管。 A、B類包裝、專用標(biāo)本運(yùn)輸箱； 1、應(yīng)使用移液輔助器，嚴(yán)禁用口吸?。?、所有移液管應(yīng)帶有棉塞以減少移液器具的污染；3、不能向含有感染性物質(zhì)的溶液中吹入氣體；4、感染性物質(zhì)不能使用移液管反復(fù)吹吸混合；5、不能將液體從移液管內(nèi)用力吹出；6、刻度對應(yīng)移液管不需要排出最后一滴液體；7、污染的移液管應(yīng)完全浸泡

17、在消毒液中適當(dāng)時間再處理；8、盛放廢棄移液管的容器應(yīng)當(dāng)放在生物安全柜內(nèi)。8、移液器的使用9、生物安全柜的使用-生物安全柜的分類所有的生物安全柜級別一定是經(jīng)NSF認(rèn)證的生物安全柜的使用-II級生物安全柜二級生物安全柜有4種類型:Contaminated air under positive pressureHEPA-filtered airRoom air 保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員、實(shí)驗(yàn)對象和環(huán)境 實(shí)驗(yàn)區(qū)有垂直層流 前窗進(jìn)風(fēng)氣流平均流速0.38m/s 可向室內(nèi)排風(fēng) 循環(huán)氣流比例為70% 有正壓污染區(qū) 不能用于揮發(fā)性有毒的化學(xué)物質(zhì)和揮發(fā)性的放射性物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)操作 BSC-II-A1型 保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員、實(shí)驗(yàn)對象和環(huán)

18、境實(shí)驗(yàn)區(qū)有垂直層流前窗進(jìn)風(fēng)氣流平均流速0.50m/s可向室內(nèi)排風(fēng)循環(huán)氣流比例為70%正壓污染區(qū)被負(fù)壓區(qū)域包圍Contaminated air under negative pressureContaminated air under positive pressureHEPA-filtered airRoom air無外接風(fēng)道有外接風(fēng)道BSC-II-A2型生物安全柜的氣流 煙氣檢測計(jì)算機(jī)分析曲線煙氣檢測9、生物安全柜的使用正確啟動生物安全柜：排風(fēng)5分鐘之后再開始工作；在操作開始前關(guān)閉排水閥。正確使用生物安全柜不得影響安全柜內(nèi)部氣流物品距產(chǎn)生氣溶膠處15cm 外9、生物安全柜的使用不要擺放過多的

19、物品；不得影響安全柜內(nèi)部氣流9、生物安全柜的使用（1）認(rèn)真練習(xí)和仔細(xì)操作。應(yīng)盡可能用塑料制品代替玻璃制品。（2）減少使用注射器和針頭；（3）必須使用注射器和針頭時，采用銳器安全裝置。（4）不要重新給用過的注射器針頭戴護(hù)套。一次性物品應(yīng)丟棄在防耐穿透的帶蓋容器中。10、避 免 刺 傷11、離心機(jī)的使用按照手冊操作；離心機(jī)放置的高度合適；離心前檢查離心管破損、腐蝕或細(xì)微裂痕；用于離心的試管和標(biāo)本容器蓋緊；生物安全柜內(nèi)正確平衡、密封和打開；離心管的液體容積應(yīng)適當(dāng)；使用后，清除離心桶、轉(zhuǎn)子和離心機(jī)腔的污染。12、勻漿器、超聲處理器等的使用 使用實(shí)驗(yàn)室專用儀器； 檢查蓋子、杯子或瓶子沒有裂縫或變形。封蓋

20、嚴(yán)密； 生物安全柜內(nèi)操作； 應(yīng)在生物安全柜內(nèi)打開容器。防止實(shí)驗(yàn)室感染；保證試驗(yàn)正常進(jìn)行；避免污染環(huán)境。 13、消毒滅菌化學(xué)消毒及時消毒 ；徹底消毒；有效消毒；常用消毒劑 甲醛 1次氯酸鈉 70酒精下排氣滅菌器的裝載量不得超過柜室內(nèi)容量的80% ；預(yù)真空滅菌器的裝載量不得超過柜室容積90%；應(yīng)盡量將同類物品放在一起滅菌；物品裝放時，上下左右均應(yīng)間隔以利蒸汽置換空氣；難于滅菌的物品放在上層，較易滅菌的物品放在下層。壓力蒸汽滅菌器是所有滅菌器中歷史最久、應(yīng)用最廣、價格最便宜的滅菌設(shè)備之一消毒滅菌壓力蒸汽滅菌滅菌效果的質(zhì)量控制人員滅菌設(shè)備蒸汽質(zhì)量滅菌物品與包裝物品的碼放監(jiān)測滅菌過程實(shí)時監(jiān)測化學(xué)指示卡監(jiān)

21、測方法生物監(jiān)測法 14、危險化學(xué)品酒精酒精燈-易燃-燒手乙醚冰箱爆炸、麻醉液氮液氮罐-燙傷DTT 嘔吐聚丙烯酰胺神經(jīng)毒甲醛、EB、疊氮鈉、DAB致癌SDS、Triton X-100 、H2O2灼傷酸、堿腐蝕性丙酮肝、腎損傷、神經(jīng)毒二甲苯肝、腎損傷、神經(jīng)毒RNAi 別干擾了自己！生物性廢物菌毒種血液銳器吸管、吸頭培養(yǎng)物分離物污染材料包裝材料15、生物性廢物分類四、個人防護(hù)裝置1、PPE選擇 防護(hù)服裝 防護(hù)鞋/鞋套 防護(hù)手套 呼吸防護(hù)裝備 眼睛防護(hù)（器） 聽力防護(hù)（器） 濺灑防護(hù)罩（1）PPE外套、罩服防護(hù)服裝實(shí)驗(yàn)室外套/長袍，罩服圍裙/袖套（塑料）長衣和長褲 (棉質(zhì))帽子（2）PPE圍裙、袖套防護(hù)服裝實(shí)驗(yàn)室外套/長袍，罩服圍裙/袖套（塑料）長衣和長褲 (棉質(zhì))帽子（3）PPE衣、帽防護(hù)服裝實(shí)驗(yàn)室外套/長袍，罩服圍裙/袖套（塑料）長衣和長褲 (棉質(zhì))帽子（4）PPE手套手套乙烯手套腈料手套無菌手套防熱和冷凍手套帶HEPA