nk免疫細(xì)胞治療

1、中贏方舟生物工程股份有限企業(yè)NK免疫細(xì)胞治療第1頁1. CD3-CD56+ 淋巴細(xì)胞是人NK細(xì)胞(natural killer cell)。NK 細(xì)胞能直接殺傷靶細(xì)胞，含有抗腫瘤、抗感染免疫調(diào)整功效。 2. NK細(xì)胞存在外周血、肝臟、腹膜腔和胎盤中。NK細(xì)胞通常處于休眠狀態(tài)，細(xì)胞因子激活后，會(huì)滲透到組織中攻擊腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞。3. CD56dimNK 細(xì)胞亞群, 大約占10, 利用Granzymes、Trail、Perforin和FasL 直接殺傷靶細(xì)胞；CD56brightNK 細(xì)胞亞群, 大約占90%, 分泌細(xì)胞因子：IFN-、TNF-、GM-CSF、IL-3等，間接作用于靶細(xì)胞。N

2、K免疫細(xì)胞治療分子基礎(chǔ)-對(duì)腫瘤細(xì)胞直接和間接殺傷作用第2頁1. 抑制受體主要由殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(KIRs)組成。這些受體能夠識(shí)別主要組織相容性復(fù)合物(MHC)人類白細(xì)胞抗原(HLA)，使得NK細(xì)胞識(shí)別本身細(xì)胞，不予理會(huì)，而殺傷腫瘤細(xì)胞和受病毒感染細(xì)胞。2. NK細(xì)胞激活受體稱為自然殺傷受體（NCRs，又稱KARs）,這些受體是激活NK細(xì)胞主要因子。幾個(gè)已知主要NCRs：NKG2D、NKp30、NKp44 和NKp46。其中NKG2D信號(hào)系統(tǒng)對(duì)NK細(xì)胞激活處于優(yōu)勢(shì)地位。抑制和激活NK細(xì)胞分子機(jī)制-KIRs與KARs信號(hào)競(jìng)爭(zhēng)平衡第3頁Estrella et.al.腫瘤患者NK細(xì)胞功效受到顯

3、著抑制伴隨腫瘤患者免疫系統(tǒng)受到腫瘤細(xì)胞侵襲和抑制，局部微環(huán)境改變，NK細(xì)胞功效也受到顯著抑制，其分子機(jī)制主要為抑制性受體（KIRs）表示增加和激活性受體（KARs）表示降低。第4頁Estrella et.al.NK細(xì)胞治療基本方式-自體細(xì)胞和異體細(xì)胞治療第5頁NK細(xì)胞治療臨床應(yīng)用第6頁FDA同意對(duì)NK細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)外擴(kuò)增、激活治療各類腫瘤臨床試驗(yàn)有497項(xiàng)，表明NK細(xì)胞針對(duì)惡性腫瘤療效已取得普遍認(rèn)可，進(jìn)入了全方面發(fā)展階段。第7頁NK細(xì)胞治療與白血病第8頁NK細(xì)胞治療安全與有效性評(píng)定在不一樣研究者利用NK細(xì)胞所進(jìn)行多項(xiàng)臨床試驗(yàn)治療過程中，無一例嚴(yán)重GVHD發(fā)生，充分證實(shí)了其臨床應(yīng)用安全性及有效性。

4、參考文件腫瘤自體/異體有效率有/無嚴(yán)重GVHD病例數(shù)Escudier 等1腎癌自體9/10無10Ishikawa 等2膠質(zhì)瘤自體5/9無9deMagalhaes 等3乳腺癌自體4/15無15Lister 等4淋巴癌和乳腺癌自體NA無12Burns 等5乳腺癌自體NA無43Krause 等6肺癌和大腸癌自體2/12無12Ruggeri 等7白血病異體16/57無57Caligiuri 等8白血病異體49/93無93Leung 等9白血病異體18/36無36Miller 等10黑色素瘤,腎癌,白血病異體5/19無43Ren 等11實(shí)體瘤異體8/11無11Koehl 等12白血病異體3/3無3Pas

5、sweg 等13白血病異體2/5無5Sutlu 等14肝癌、腎癌 異體1/1無5Shi 等15多發(fā)性骨髓瘤異體5/10無10Brand 等16腎癌異體NA無6Barkholt 等17肝癌異體1/5無5Iliopoulou 等18肺癌異體8/16無16Geller 等19乳腺癌,卵巢癌異體NA無20Rubnitz 等20白血病異體10/10無10Bachanova等21白血病異體4/6無6Gentilini 等22白血病異體5/9無10總計(jì)：155/356總計(jì)：431第9頁在針對(duì)57例AML患者接收HSCT后臨床調(diào)查研究顯示，當(dāng)供、受者之間存在KIRs Mismatch時(shí),患者5年復(fù)發(fā)可能性為0

6、,反之復(fù)發(fā)可能性高達(dá)75%NK細(xì)胞治療在血液系統(tǒng)腫瘤應(yīng)用： KIRs MismatchRuggeri L. etal.Science. Mar 15;295(5562):2097-100.第10頁Loredana Ruggeri. Etal. BLOOD, 1 JULY VOLUME 110, NUMBER 1基于KIRs Mismatch所觸發(fā)GvL，NK細(xì)胞為主要效應(yīng)細(xì)胞在一項(xiàng)長(zhǎng)達(dá)，針對(duì)112例高風(fēng)險(xiǎn)AML患者臨床研究中發(fā)覺：在患者接收了HSCT后，因?yàn)楣⑹苷咧gKIRs Mismatch所觸發(fā)NK細(xì)胞Alloreaction決定了預(yù)后良好是否。第11頁異體NK細(xì)胞在白血病治療中應(yīng)用19

7、例接收體內(nèi)對(duì)供者NK細(xì)胞擴(kuò)增患者，5例取得了完全CR。第12頁異體NK細(xì)胞在白血病治療中應(yīng)用第13頁入選病例42例，其中13例接收異體NK細(xì)胞治療第14頁療效評(píng)價(jià)AD/PD 5人中，1人取得6個(gè)月以上CR分子生物學(xué)復(fù)發(fā)2人，分別取得9個(gè)月及4個(gè)月CRCR 6人中，3人CR狀態(tài)分別連續(xù)了34，32和18個(gè)月第15頁因?yàn)榇舜闻R床試驗(yàn)供者NK細(xì)胞是經(jīng)過血細(xì)胞分離機(jī)分離后由磁珠分選系統(tǒng)純化取得，成本高昂、數(shù)量有限，全部患者均只進(jìn)行了1次劑量在106/kgNK細(xì)胞治療，僅有1位患者因?yàn)楣┱逳K細(xì)胞量較為充分，當(dāng)其第二次分子生物學(xué)復(fù)發(fā)后再次給予了NK細(xì)胞輸注，又取得了第二次CR。這也從另一個(gè)側(cè)面反應(yīng)了NK

8、細(xì)胞免疫治療技術(shù)瓶頸所在：怎樣足夠數(shù)量及足夠純度NK細(xì)胞。療效評(píng)價(jià)第16頁異體NK細(xì)胞在多發(fā)性骨髓瘤中應(yīng)用第17頁療效評(píng)價(jià)在接收了106/kgNK細(xì)胞治療2次后，50%患者靠近了完全CR。第18頁NK免疫細(xì)胞治療前景 半相合治療基礎(chǔ)上特異性KIRs Mismatch位點(diǎn)選擇 特異性KARs激動(dòng)劑以及特異性KIRs抑制劑開發(fā) 個(gè)性化治療基礎(chǔ)上聯(lián)合治療方案確實(shí)立 NK細(xì)胞針對(duì)腫瘤細(xì)胞特異性靶向媒介研發(fā) NK細(xì)胞特異性大規(guī)模體外擴(kuò)增激活方法改進(jìn)第19頁NK細(xì)胞特異性大規(guī)模體外擴(kuò)增激活方法改進(jìn)怎樣提升NK細(xì)胞數(shù)量？怎樣提升NK細(xì)胞質(zhì)量？第20頁參考文件方法擴(kuò)增時(shí)間， 平均倍數(shù) （范圍）Huenecke

9、, J Immunother, Apheresis, IL-214, 5 (2 10.5)Koehl, KlinPediatr Apheresis, IL-2 (preclinical)14, 5 (4 9)Decot, Exp Hematol IL-2 or IL-1513, 23Klingemann, Cytotherapy IL2 + IL1514, (5-20)Iliopoulou, CII IL1523, 23 (3.2 131.3)Clemenceau, J Immunother LCL and IL-221, 260 (82-425)Carlens, Human Immunol

10、OKT3 + IL-221, 193Alici, Blood OKT3 + IL-220, 1625 (502-2658)Barkholt Immunotherapy Apheresis, OKT3 + IL-219, 7,000Siegler, Cytotherapy OKT3 + IL-219, 117 (+/- 20)Sutlu, Cytotherapy OKT3 + IL-221, 530 (bag), 1100 (flask)Spanholtz, PLoSONE GBGM, SCF, IL-2, IL7, IL15, Flt3L, G-CSF, GM-CSF, IL6, TPO35,

11、 100,000?Fujisaki, Cacner Res K562-41BB-mbIL1521, 277 (201 744)Gong, Tissue Antigens K562-MICA-41BBL-IL1524, 550 (201 880)體外擴(kuò)增技術(shù)-NK細(xì)胞治療基礎(chǔ)第21頁中贏第二代NK體外擴(kuò)增技術(shù)第22頁中贏第三代NK體外擴(kuò)增技術(shù) 擴(kuò)增效率高-從20ml外周血PBMC中經(jīng)14天擴(kuò)增可達(dá)1010數(shù)量級(jí) 擴(kuò)增純度高-NK細(xì)胞純度在90%以上 殺傷功效強(qiáng)中贏第三代NK體外擴(kuò)增技術(shù)特點(diǎn)第23頁IL-21激活7天激活14天淋巴細(xì)胞/NK細(xì)胞NK 細(xì)胞激活21天IL-21介導(dǎo)NK細(xì)胞擴(kuò)增：新型高

12、效擴(kuò)增激活方案第24頁Fold of expansionDays*從IL-2到IL21，NK細(xì)胞擴(kuò)增技術(shù)改進(jìn)與提升第25頁CD56NKp30NKp44NKp46CD56CD16NKG2DIL15IL21IL15IL21IL-15、IL-21：體外對(duì)NK細(xì)胞KARs激活第26頁MAPK、PI3-K：IL-21激活NK細(xì)胞可能靶點(diǎn)第27頁NK細(xì)胞與CIK細(xì)胞體外腫瘤細(xì)胞殺傷作用比較第28頁體外所擴(kuò)增NK細(xì)胞端粒酶活性顯著增強(qiáng)第29頁體外所擴(kuò)增NK細(xì)胞與CIK細(xì)胞殺瘤效果比較第30頁第1天第21天4x 106 Luciferase所標(biāo)識(shí)NK細(xì)胞. 尾靜脈注射至 NOD/SCID小鼠體內(nèi) 中贏專利技術(shù)

13、活化NK細(xì)胞體內(nèi)遷移過程第31頁第1天第7天第21天4x 106 Luciferase所標(biāo)識(shí)NK細(xì)胞. 皮下注射至 NOD/SCID小鼠 中贏專利技術(shù)活化NK細(xì)胞體內(nèi)遷移過程第32頁案例一、患者徐某，男，45歲，確診為原發(fā)性肝細(xì)胞癌伴隨乙肝病毒感染，同年接收肝右葉切除術(shù)并接收全身化療，年發(fā)覺肝內(nèi)轉(zhuǎn)移，至20共接收5次介入治療，入院時(shí)肝內(nèi)大部彌漫性小結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移，化療抵抗，2012月接收半相合異體NK細(xì)胞免疫治療4次，共計(jì)回輸1.21010 NK細(xì)胞。甲胎蛋白（AFP）水平由350ug/ml降至103ug/ml，乙肝病毒拷貝數(shù)由3102/ml減至檢測(cè)線以下，主訴厭食、乏力癥狀顯著減輕，未發(fā)覺任何與N

14、K細(xì)胞回輸相關(guān)副作用。中贏專利技術(shù)活化NK細(xì)胞治療部分臨床案例第33頁案例二、患者李某，男，49歲，確診為原發(fā)性肝細(xì)胞癌。后經(jīng)屢次全身化療，4次肝局部介入治療，年11月發(fā)覺左上頜骨轉(zhuǎn)移，入院時(shí)肝功效異常，其中總膽紅素水平為25.7umol/ml，谷草轉(zhuǎn)氨酶水平為250U/L，201月接收半相合異體NK細(xì)胞免疫治療4次，共計(jì)回輸0.91010 NK細(xì)胞。主訴精神狀態(tài)顯著好轉(zhuǎn)，肝功效恢復(fù)至正常水平，有一過性白介素-2引發(fā)低熱反應(yīng)，最高體溫37.8,6-8小時(shí)后自然消退。中贏專利技術(shù)活化NK細(xì)胞治療部分臨床案例第34頁案例三、患者崔某某，男，44歲，確診為惡性黑色素瘤伴隨腹股溝淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，接收局部手

15、術(shù)切除及局部淋巴結(jié)清掃術(shù)，后接收干擾素治療9個(gè)月，同時(shí)接收了多個(gè)療程化療，年10月發(fā)覺有肺轉(zhuǎn)移，201月接收自體NK細(xì)胞免疫治療6次，共計(jì)回輸1.51010 NK細(xì)胞。當(dāng)前患者主訴良好，轉(zhuǎn)移灶較10月份相比無顯著增大、增多，未發(fā)覺任何與NK細(xì)胞回輸相關(guān)副作用。中贏專利技術(shù)活化NK細(xì)胞治療部分臨床案例第35頁案例四、患者范某某，女，51歲，確診為乳腺癌并與同年接收了右乳切除術(shù)伴淋巴結(jié)清掃術(shù)，術(shù)后常規(guī)化療六個(gè)月，年7月發(fā)覺肝、骨轉(zhuǎn)移病灶，屢次全身化療后骨轉(zhuǎn)移控制良好，但肝轉(zhuǎn)移病灶進(jìn)行性增大伴有新肝轉(zhuǎn)病灶，2011月接收半相合NK細(xì)胞聯(lián)合肝內(nèi)局部介入治療免疫一次，經(jīng)肝固有動(dòng)脈及腸系膜上動(dòng)脈局部給予1109 NK細(xì)胞，術(shù)后給予靜脈回輸NK細(xì)胞治療4次，共計(jì)回輸1.31010 NK細(xì)胞?；颊咧髟V化療副作用顯著減輕，肝轉(zhuǎn)移病灶顯著縮小，未見新發(fā)肝轉(zhuǎn)移病灶。未發(fā)覺任何與NK細(xì)胞回輸相關(guān)副作用。中贏專利技術(shù)活化NK細(xì)胞治療部分臨床案例第36頁案例五、患者周某，女，78歲，確診為小細(xì)胞肺癌伴隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，無手術(shù)指癥，病人拒絕化療，年1月入院后癥狀