醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法

1、醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第1頁內(nèi)容提要污水采樣及常規(guī)監(jiān)測(cè)方法排放標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基配制 污水余氯量檢測(cè) 細(xì)菌總數(shù)及糞大腸菌群計(jì)算方法及匯報(bào)格式醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第2頁 醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水：指醫(yī)療機(jī)構(gòu)門診、病房、手術(shù)室、各類檢驗(yàn)室、病了解剖室、放射室、洗衣房、太平間等處排出診療、生活及糞便污水。當(dāng)醫(yī)療機(jī)構(gòu)其它污水與上述污水混合排出時(shí)一律視為醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水。 余氯：是指水經(jīng)加氯消毒，接觸一定時(shí)間后，余留在水中氯。醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第3頁總大腸菌群：是指在3724h培養(yǎng)能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣一群需氧及兼性厭氧革蘭陰性無芽胞桿菌。耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）：是總大腸菌群一個(gè)別。將培養(yǎng)溫度提升到44，在此條件下仍能生長

2、和發(fā)酵乳糖菌群被稱為耐熱大腸菌群。它們由埃希氏菌屬以及克雷伯菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬中一些菌種組成。其中大腸埃希菌是最準(zhǔn)確和專一糞便污染指示菌。與總大腸菌群相比，耐熱大腸菌群在水體中檢出，說明水體更為不清潔，存在腸道致病菌和食物中毒菌可能性更大。 醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第4頁醫(yī)院污水常見消毒方法醫(yī)院污水消毒方法有加熱、加氯、臭氧、紫外線及輻射等，較常見方法有氯化消毒法和臭氧消毒法。當(dāng)前我國醫(yī)院污水消毒最常見消毒劑是次氯酸鈉。 醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第5頁醫(yī)院污水日常監(jiān)測(cè)多以余氯量和糞大腸菌群測(cè)定結(jié)果來判斷消毒效果。污水監(jiān)測(cè)指示菌：大腸菌群、沙門菌、志賀菌監(jiān)測(cè)頻率：采取含氯消毒劑消毒時(shí)， 接觸池出口總余

3、氯每日監(jiān)測(cè)不得少于2次（采取間歇式消毒處理，每次排放前監(jiān)測(cè)）。糞大腸菌群數(shù)每個(gè)月監(jiān)測(cè)不得少于1次。腸道致病菌主要監(jiān)測(cè)沙門菌、志賀菌。沙門菌監(jiān)測(cè)，每季度不少于1次；志賀菌監(jiān)測(cè)，每年不少于2次。結(jié)核病醫(yī)療機(jī)構(gòu)依據(jù)需要監(jiān)測(cè)結(jié)核桿菌 醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第6頁（一）污水余氯量檢測(cè)日常監(jiān)測(cè)普通采取比色法（ 鄰聯(lián)甲苯胺比色法）：在含5ml樣品比色管內(nèi)滴加鄰聯(lián)甲苯胺溶液23滴，混勻，置暗處15min，與永久性余氯標(biāo)準(zhǔn)比色溶液比色測(cè)定。 醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第7頁（二）細(xì)菌總數(shù)及糞大腸菌群測(cè)定1、采樣時(shí)間在消毒后1小時(shí)、排放前進(jìn)行采樣。 醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第8頁2、采樣方法1）水樣瓶采集前必須進(jìn)行滅菌，并需確保在運(yùn)裝、

4、保留過程中不受污染。2）在采集水樣時(shí)，先將出水口消毒，然后將水龍頭完全打開，放水5-10min，以排除管道內(nèi)貯水后再采水樣。3）假如是經(jīng)加氯處理污水，應(yīng)按每500mL加1.5%硫代硫酸鈉2ml中和余氯，終止余氯殺菌作用。4）所采水量為采樣瓶容量80%左右，方便在檢驗(yàn)時(shí)能夠充分搖動(dòng)水樣。5）水樣從采集到檢驗(yàn)普通不應(yīng)超出2h，如放冰箱保留，也不應(yīng)超出4h。 醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第9頁細(xì)菌總數(shù)測(cè)定： 細(xì)菌總數(shù)是指1mL水樣在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，于37經(jīng)48h培養(yǎng)后，所生長細(xì)菌菌落總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)主要作為判定水質(zhì)被污染程度標(biāo)志。 醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第10頁 操作方法：（1）無菌操作吸收10mL充分混勻水樣注入盛

5、有90mL滅菌蒸餾水玻璃瓶中，混勻成1:10稀釋液。（2）吸收1:10稀釋液1mL注入盛有9mL滅菌水試管中，混勻成1:100稀釋液。依據(jù)需要可稀釋成不一樣稀釋度。（3）用涂沫法或傾注法接種平皿。（4）置37培養(yǎng)48h后計(jì)數(shù)菌落數(shù)，匯報(bào)1mL水樣中細(xì)菌總數(shù)。 醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第11頁3、糞大腸菌群檢驗(yàn)方法采取發(fā)酵法。步驟:（1）初發(fā)酵試驗(yàn)（2）平板分離（3）復(fù)發(fā)酵試驗(yàn) 醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第12頁（1）初發(fā)酵試驗(yàn)1）將水樣作110及1100稀釋2）水樣接種1100稀釋水樣（相當(dāng)于原水樣0.01ml）1ml110稀釋水樣（相當(dāng)于原水樣0.1ml）1ml原水樣1ml 以上分別注入10ml普通濃度（單料

6、）乳糖蛋白胨液中（內(nèi)有倒管）。原水樣10ml注入5ml 3倍濃縮（三料）乳糖蛋白胨液中（內(nèi)有倒管）。 醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第13頁如水樣較清潔，再取原水樣100ml注入50ml 3倍濃縮乳糖蛋白胨液中，上述發(fā)酵管置44，24h培養(yǎng)。醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第14頁(2)平板分離將產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣發(fā)酵管，分別接種伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，于37 培養(yǎng)18-24小時(shí)，挑取深紫黑色、含有金屬光澤菌落（或紫黑色，不帶或略帶金屬光澤菌落；淡紫紅色、中心色較深菌落），進(jìn)行涂片、染色、鏡檢。醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第15頁(3)復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)挑取鏡檢為革蘭陰性無芽孢桿菌經(jīng)典菌落1-3個(gè)，接種于一支單料乳糖發(fā)酵管內(nèi)，44培養(yǎng)24h，產(chǎn)

7、酸產(chǎn)氣者即證實(shí)有大腸菌群存在。醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第16頁4、結(jié)果匯報(bào)依據(jù)證實(shí)有糞大腸菌群存在陽性管（瓶）數(shù)查表1或表2，匯報(bào)每升水樣中糞大腸菌群數(shù)。醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第17頁5、污水中沙門菌、志賀菌檢驗(yàn)步驟:污水樣品過濾、稀釋、增菌處理：取200mL污水，用滅菌濾膜進(jìn)行抽濾；用100mL二倍濃度SF(亞硒酸鹽增菌液)把濾膜上截留雜質(zhì)洗脫到滅菌三角燒瓶?jī)?nèi)，充分搖勻，置于37恒溫培養(yǎng)箱，增菌培養(yǎng)1824h。平板分離：將增菌培養(yǎng)液分別接種于SS和BS(亞硫酸鉍瓊脂)培養(yǎng)基培養(yǎng)基37培養(yǎng)2448h；挑選可疑菌落接種于雙糖37培養(yǎng)1824h。判定：生化、血清學(xué)試驗(yàn)， 檢驗(yàn)結(jié)果匯報(bào)，匯報(bào)一定體積樣品中存在或不

8、存在沙門菌、志賀菌。醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第18頁培養(yǎng)基配制醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第19頁水樣大腸菌群檢測(cè)培養(yǎng)基：乳糖蛋白胨水蛋白胨10g牛肉膏3g乳糖5g pH7.27.4氯化鈉5g1.6%溴甲酚紫溶液1mL蒸餾水1000mL三料乳糖蛋白胨水即除蒸餾水外以上成份均為3倍醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第20頁 將蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化鈉置于1000mL蒸餾水中加熱溶解，調(diào)整pH為7.27.4，再加入1mL 1.6%溴甲酚紫溶液，充分混勻，分裝于裝有倒管長試管中，置高壓蒸汽滅菌器中，115 滅菌20分鐘，儲(chǔ)存于冷暗處備用。1.6%溴甲酚紫乙醇溶液配制：取1.6g溴甲酚紫置乳缽中，加入少許95%乙醇，研磨使之全溶解，然

9、后以乙醇洗入量筒中，再用乙醇配成100ml，盛入棕色玻璃瓶中備用。醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第21頁注意事項(xiàng)：倒管必須在滅菌前倒放入試管中，滅菌后倒管中應(yīng)充滿液體。醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第22頁檢測(cè)流程回顧上次試驗(yàn)進(jìn)行到了哪步？醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第23頁大腸菌群檢測(cè) -MPN法（四）MPN法計(jì)數(shù)醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第24頁了解大腸菌群計(jì)數(shù)方法 會(huì)進(jìn)行大腸菌群MPN法計(jì)數(shù) 會(huì)進(jìn)行大腸菌群檢測(cè)結(jié)果匯報(bào)醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第25頁工作任務(wù)判斷發(fā)酵管是否產(chǎn)氣查MPN表填寫匯報(bào)單醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第26頁操作步驟一、復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)培養(yǎng)管產(chǎn)氣觀察 提問：怎樣判定發(fā)酵管是否產(chǎn)氣？醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第27頁數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 發(fā)酵管 結(jié)果 1：10 產(chǎn)

10、氣 陽性 1：100 產(chǎn)氣 陽性 1：1000 產(chǎn)氣 陽性醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第28頁二、查MPN表檢索說明：1、采取3 個(gè)稀釋度0.1 g(mL)、0.01 g(mL)和0.001 g(mL)，每個(gè)稀釋度接種3 管。2、表內(nèi)所列檢樣量如改用1g （mL）、0.1 g(mL)和0.01 g(mL)時(shí)，表內(nèi)數(shù)字應(yīng)對(duì)應(yīng)降低10 倍；如改0.01g(mL)、0.001 g(mL)、0.0001 g(mL)時(shí)，則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)對(duì)應(yīng)增高10 倍，其余類推。醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第29頁醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第30頁數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)操作人1:101:1001:1000大腸菌群結(jié)果醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第31頁 格式：ZG-XJ-JL 編號(hào)

11、： 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)匯報(bào)樣品名稱： 生產(chǎn)日期： 檢測(cè)日期：稀釋度101001000菌落計(jì)數(shù)（CFU）3503302802603238平均數(shù)（CFU）結(jié)果（CFU）檢測(cè)人： 審核人：三、填寫匯報(bào)單醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第32頁 格式：ZG-DC-JL 編號(hào)： 大腸桿菌檢測(cè)匯報(bào)樣品名稱： 生產(chǎn)日期： 檢測(cè)日期：稀釋度101001000初發(fā)酵產(chǎn)氣管數(shù)復(fù)發(fā)酵產(chǎn)氣管數(shù)MPN表結(jié)果檢測(cè)人： 審核人：三、填寫匯報(bào)單醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第33頁比較大腸菌群和細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)差異大腸菌群檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)培養(yǎng)基Lst月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯培養(yǎng)基BGLB煌綠乳糖膽鹽肉湯培養(yǎng)基平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基接種方法和次數(shù)液體接種 2次傾注法接種

12、 一次培養(yǎng)時(shí)間和溫度36 1度 48 2小時(shí)36 1度 48 2小時(shí)計(jì)數(shù)方法MPN檢索表30300之間菌落計(jì)數(shù)和公式計(jì)算醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第34頁1.小倒管作用是觀察樣品是否產(chǎn)氣，若樣品產(chǎn)氣則小倒管內(nèi)積累氣泡，使小倒管上浮。2.企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)比國家標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格或者與國家標(biāo)準(zhǔn)一致。3.放置冰箱冷藏，一周內(nèi)計(jì)數(shù)。醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第35頁飲用水總大腸菌群檢測(cè)醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第36頁操作步驟：100ml 飲用水+ 50ml 3 倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)瓶（含倒管）100ml 飲用水+ 50ml 3 倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)瓶（含倒管）10ml 飲用水+ 5ml 3 倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)管（共10管）總接種水量300ml。

13、醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第37頁飲用水總大腸菌群檢測(cè)置 36 培養(yǎng)24 h, 觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況, 如都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣, 則為未檢出, 如有產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣發(fā)酵管, 則在麥康凱培養(yǎng)基分離培養(yǎng)后再進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn), 證實(shí)為總大腸菌群陽性管數(shù), 查大腸菌群檢數(shù)表（表3）, 結(jié)果除以10，匯報(bào)每100 ml 水樣MPN 值。醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第38頁醫(yī)院污水糞大腸菌群及沙門菌、志賀菌檢測(cè)1、糞大腸菌群檢測(cè)操作步驟（采取發(fā)酵法）：（1）初發(fā)酵試驗(yàn)1）將水樣作110及1100 稀釋2）水樣接種1100稀釋水樣（相當(dāng)于原水樣0.01ml）1ml110 稀釋水樣（相當(dāng)于原水樣0.1ml）1ml原水樣1ml以上分別注入10ml普通濃度（單料）乳糖蛋白胨液中（內(nèi)有倒管）。原水樣10ml注入5ml 3 倍濃縮（三料）乳糖蛋白胨液中（內(nèi)有倒管）。上述發(fā)酵管置44，24h培養(yǎng)。醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第39頁（2）平板分離將產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣發(fā)酵管，分別接種麥康凱培養(yǎng)基上，于37 培養(yǎng)18-24 小時(shí)。醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第40頁（3）復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)挑取紅色經(jīng)典菌落1-3 個(gè)，接種于一支單料乳糖發(fā)酵管內(nèi)，44培養(yǎng)24h，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者即證實(shí)有大腸菌群存在。醫(yī)院污水監(jiān)測(cè)方法第41頁（4）結(jié)果匯報(bào)依據(jù)證實(shí)有糞大腸菌群存在陽性管（瓶）數(shù)查表2，匯報(bào)每升水樣中糞大腸菌群數(shù)