安捷倫5975CGCMS使用與定量操作

1、文件名稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-011版本：A/0標題:氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)操作規(guī)程頁碼：1/101目的從而確保儀器不受誤操為規(guī)范本化學檢測中心氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)的使用,作損壞和傷害實驗人員并得到可靠檢測數(shù)據(jù)，故制定本規(guī)程。2范圍本程序文件適用于本分析測試中心的美國Agilent7890A-5975G3設(shè)備參數(shù)m/z范圍10-1050amu靈敏度EI全掃描1pg八氟萘分辨率單位質(zhì)量分辨掃描速度最高12,500amu/sec質(zhì)量穩(wěn)定度0.1amu/48小時4操作程序4.1注意事項(1)老化柱子S/N400:1分段老化。按溫度從低到高分段，程序升溫老化。這

2、是最好的老化方法。如HP-5柱,5-6C/min至250C,反復數(shù)次；再升至280C,反復數(shù)次；接到MS上看基線情況。270C以后基線提高為正常。再老化到300C半小時。無論何種方式，載氣必須充足。進樣口用紅色或灰色隔墊，可減少隔墊流失。GC/MS接口處必須用vesper墊圈(5062-3508)。注意安裝方向(大的一端朝向質(zhì)譜)。(4)新柱子安裝時無方向性,但一旦使用過，再不要改變方向。(5)保存柱子時注意將兩端密封好，避免水和空氣破壞柱子內(nèi)涂層。4.2儀器配置4.2.1在操作系統(tǒng)桌面雙擊Config/配置圖標進入儀器配置界面4.2.2點擊所要配置的儀器4.2.3配置MSD及GC：在出現(xiàn)的畫

3、面中輸入儀器名稱、序列號等信息后，在質(zhì)譜儀一欄中選擇MSD的型號，并輸入MSD的IP地址，選擇DC極性(標注于MSD側(cè)板的中部金屬上部)；同樣配文件名稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-011版本：A/0標題：氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）操作規(guī)程頁碼：2/10置GC后點擊確定退出。配置完成后桌面上應(yīng)出現(xiàn)“Instrument#1”和“Instrument#1DataAnalysis，啲圖標（名稱由配置時輸入的儀器名稱決定）。4.3開機4.3.1打開載氣鋼瓶（He）控制閥，設(shè)置分壓閥壓力至0.5Mpa4.3.2打開計算機，登錄進入WindowsXP（SP2）系統(tǒng)，初次開機時建議使用59

4、75的小鍵盤LCP輸入IP地址和子網(wǎng)掩碼，并使用新地址重啟，否則安裝并運行BootpService4.3.3打開7890GC、5975MSD電源（若MSD真空腔內(nèi)已無負壓則應(yīng)在打開MSD電源的同時用手向右側(cè)推真空腔的側(cè)板直至側(cè)面板被緊固地吸牢），等待儀器自檢完畢4.3.4在桌面雙擊“Instrument#1”圖標，進入MSD化學工作站4.3.5在InstrumentControl/儀器控制界面下，單擊View/視圖菜單，選擇TuneandVacuumControl/調(diào)諧及真空控制進入調(diào)諧與真空控制界面，在Vacuum/真空菜單中選擇VacuumStat真/空狀態(tài)，觀察真空泵運行狀態(tài)。4.3.6

5、如果儀器真空泵配置為分子渦輪泵，狀態(tài)顯示渦輪泵轉(zhuǎn)速oPumpSpeed/渦輪泵轉(zhuǎn)速應(yīng)很快達到100Percent，否則，說明系統(tǒng)有漏氣，應(yīng)檢查側(cè)板是否壓正、放空閥是否擰緊、柱子是否接好；（如果儀器為5975擴散泵配置，請咨詢現(xiàn)場工程師的講解.狀態(tài)顯示壓力Pressure應(yīng)很快達到100mToor左右，否則，說明系統(tǒng)有漏氣，應(yīng)進行上述檢查）。調(diào)諧調(diào)諧應(yīng)在儀器至少開機2個小時后方可進行，若儀器長時間未開機或儀器為5975擴散泵配置，為得到好的調(diào)諧結(jié)果建議將此時間延長至4小時。1）首先確認打印機已連好并處于聯(lián)機狀態(tài)。2）在操作系統(tǒng)桌面雙擊Instrument#1圖標進入工作站系統(tǒng)。3）在上圖Inst

6、rumentControl/儀器控制界面下，單擊View/視圖菜單，選擇TuneandVacuumControl/調(diào)諧及真空控制進入調(diào)諧與真空控制界面。4）單擊Tune/調(diào)諧菜單，選擇Autotune/自動調(diào)諧或Gainautotune/增益自動調(diào)諧，進行調(diào)諧，調(diào)諧結(jié)果自動打印。5）一般根據(jù)需要選擇所要進行的調(diào)諧，Autotune/自動調(diào)諧為最大靈敏度調(diào)諧，而Standardspectratu標準譜圖調(diào)諧為標準譜圖調(diào)諧，其與Autotune/自動調(diào)諧相比靈敏度稍低，但與譜庫中標準譜圖的匹配度更高，適合于譜庫檢索與定性，Gain文件名稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-011版本：A/0標

7、題：氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）操作規(guī)程頁碼：3/10autotune/增益自動調(diào)諧可消除由于EM老化造成設(shè)定相對電壓時EM放大倍數(shù)變化的問題，從而保證信號的穩(wěn)定性。選定調(diào)諧后儀器將自動完成整個調(diào)諧過程（約35分鐘）并將調(diào)諧結(jié)果由打印機輸出。調(diào)諧文件會自動保存并覆蓋相應(yīng)文件。如果要保存手動調(diào)諧中的參數(shù)如：修改燈絲1為燈絲2時注意要先將調(diào)諧文件保存。要手動保存或另存調(diào)諧參數(shù)，從file/文件中執(zhí)行操作。6）點擊view/視圖然后選擇instrumentcontrol/儀器控制返回到儀器控制界面。注意:自動調(diào)諧文件名為ATUNE.U標準譜圖調(diào)諧文件名為STUNE.U其余調(diào)諧方式有各自的文件名.

8、每次調(diào)諧之后如果不改名另存則會自動覆蓋上次相同方式的調(diào)諧文件.7890A配置編輯：點擊“Instrument/儀器”菜單，選擇“GCConfiguration./編輯GC軟配置”進入如圖所示畫面。在“Connection/連接”畫面下，輸入GCName：女口“GC7890”；可在Notes處輸入7890A的配置，如“7890GCwith5975CMSD”。點擊“GetGCConfiguration/獲得GC配置”按鈕獲取7890A的配置。ALS/自動液體進樣器配置設(shè)定點擊“Conjuration/配置”按鈕,點擊“ALS”子按鈕，輸入注射器的體積，如T0ul”；選擇溶劑清洗模式：如A，B。-若

9、無ALS,則無此內(nèi)容。模塊配置設(shè)定點擊“Modules/模塊”按鈕進入下圖所示畫面，點擊下拉式箭頭，分別選擇進樣口、檢測器、PCM等的氣體類型。柱參數(shù)設(shè)定點擊“Columns/色譜柱”按鈕，進入柱參數(shù)設(shè)定畫面。點擊“1”處，進入“安裝色譜柱”畫面。如果要安裝的色譜柱不是Agilent或J&W的，請自行編輯添加，如果是，則點擊“使用清單替換”進入目錄。查找并選中型號匹配的色譜柱點擊“確定”鈕，則該柱被加到目錄中，并選中它，點擊“完成”返回到柱配置界面：接下來點擊該柱后面對應(yīng)下拉式箭頭選擇連接的進樣口、檢測器及加熱類型。如：FrontInlet/前進樣口、FrontDetector/前檢測器、MS

10、D/真空、Oven/柱箱。同樣方法添加其它柱子。4.3.10其他項設(shè)定點擊“Miscellaneous/其他”進入其他項設(shè)定，如：選擇壓力單位：psi；輸文件名稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-011版本：A/0標題：氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）操作規(guī)程頁碼：4/10入柱子的最大耐高溫：如：325C（19091S433柱）。將輔助加熱器類型配置為MSDTransferline/MSD傳輸線；若閥用于進樣或DEANSWITCH切割，在ValveType/閥類型區(qū)域選擇閥號，并選擇類型為“SwitchingValve/開關(guān)閥”，（儀器上有幾個閥就選幾個，與TimeTable配合使用進行

11、閥進樣/切換）。點擊“Ok”退出配置畫面并保存方法。數(shù)據(jù)采集方法編輯開始編輯完整方法從“Method/方法”菜單中選擇“EditEntireMethod/編輯完整方法”項，選中除“DataAnalysis/數(shù)據(jù)分析”外的三項，點擊“OK/確定”，進入下一畫面。編輯關(guān)于該方法的注釋：點擊“OK/確定”進樣器選擇如果未使用自動液體進樣器7683B，則在“SelectInjectionSource/Location/進樣方式”畫面中選擇“Manual/手動”，使用則選擇“GCALS”。點擊“Ok/確定”，進入下一畫面。柱模式設(shè)定進入柱模式設(shè)定畫面，點擊T”處進行柱1設(shè)定，然后選中“On/打開”左邊方

12、框；選擇控制模式，“flow/流速”或“pressure/壓力”。如：選擇“flow/流速”，輸入1.0,點“Apply/應(yīng)用”,則設(shè)定的流速為1.0ml/min。進樣器參數(shù)設(shè)定進入進樣器參數(shù)設(shè)定畫面。點擊“FrontInjector/前進樣器”或“BackInjector/后進樣器”按鈕，進入?yún)?shù)設(shè)定畫面。選中進樣體積（如1ul）Prelnj進樣前，Postlnj-進樣后;Volume（ul）一清洗的體積；SampleWash用樣品洗針次數(shù)；SolventAWash溶劑A洗針的次數(shù)；SolventBWash溶劑B洗針的次數(shù)；Pumps趕氣泡抽吸的次數(shù),5-6次左右即可。閥參數(shù)設(shè)定點擊“”圖標

13、，進入閥設(shè)定畫面。若儀器安裝有閥而且該閥用于進樣或DeanSwitch切換，應(yīng)在儀器配置界面將“Type類型”配置為SwitchingValve/開關(guān)閥”，在此方法編輯界面將初始狀態(tài)設(shè)為：Off。（儀器上有幾個閥就選幾個，與TimeTable配合使用進行閥進樣）。分流不分流進樣口參數(shù)設(shè)定進入進樣口設(shè)定畫面。點擊“SSL-Front/SSL-前”或“SSL-Back/SSL-后”按鈕進入毛細柱進樣口設(shè)定畫面。點擊“Mode/模式”右方的下拉式箭頭,選擇進樣方式為不分流方式文件名稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-011版本：A/0標題：氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）操作規(guī)程頁碼：5/10

14、“Splitless/不分流”或“Split/分流”。在空白框內(nèi)輸入進樣口的溫度（如250C），然后選中左邊的所有方框；選擇“SeptumPurgeFlowMode/隔墊吹掃流量模式”為Standard/標準”，并輸入隔墊吹掃流量：女如3ml/min。對于特殊應(yīng)用亦可選擇“Switched/可切換的”，進行關(guān)閉。在“PurgeFlowtoSplitVent/分流出口吹掃流量”下邊的空白框內(nèi)輸入吹掃流量（如0.75min后60ml/min）,選擇分流方式，則要輸入分流比或分流流量。柱溫箱溫度參數(shù)設(shè)定進入柱溫參數(shù)設(shè)定。在空白表框內(nèi)輸入溫度，選中“OvenTempOn/柱箱溫度為開”左邊的方框；Ra

15、mp-升溫階次；C/min一升溫速率；Holdmin一保持的時間；輸入柱子的平衡時間（如1min）；下為一程序升溫的例子：75C（0.5min）20C/min190C（0min）AUX參數(shù)設(shè)定進行輔助參數(shù)設(shè)定。在輔組加熱區(qū)設(shè)定質(zhì)譜的接口溫度如280C時間表設(shè)定點擊“”圖標，進入時間表參數(shù)設(shè)定，在“Time/時間”下方的空白處輸入時間（如O.Olmin）,點擊“Eventtype/事件類型”下方的下拉式箭頭，選中事件（如，閥）；點擊“Position/位置”下方的下拉式箭頭，選中事件的位號（如閥1）；點擊“Setpoint/設(shè)定值”下方的下拉式箭頭，選中事件的狀態(tài)（如打開）。輸入完一行，依此輸入

16、多行。點擊“OK/確定”鈕。信號參數(shù)設(shè)定進入信號參數(shù)設(shè)定畫面。點擊“SignalSource/信號源”下方下拉式箭頭，選擇“FrontSignal/前部信號”，本例中為FID；點擊“DataRate/MinPeakWidth/數(shù)據(jù)采集頻率/最小峰寬”下方的下拉式箭頭，選擇數(shù)據(jù)采集數(shù)率（如5HZ），選擇“SaveData/保存”，存儲所有的數(shù)據(jù)。進行配置瀏覽。點擊“OK/確定”，進入下一畫面。若GC包含有其他檢測器且正在使用,在是否需要實時繪圖所使用的信號“Display/顯示”前打鉤，然后點擊“OK/確定”，如果沒有GC檢測器，直接按“OK/確定”跳過此畫面。選擇所需的質(zhì)譜調(diào)諧文件，然后點擊“

17、OK/確定”編輯掃描方式質(zhì)譜參數(shù)編輯溶劑延遲時間以保護燈絲，調(diào)整倍增器電壓模式（共有三種模式：絕對值，相對值和增益因子），選擇要是用的數(shù)據(jù)采集模式，如掃描（Scan）、選擇離子（Sim）等。文件名稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-011版本：A/0標題：氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）操作規(guī)程頁碼：6/10點擊“ScanParameters/掃描參數(shù)”編輯掃描參數(shù)根據(jù)分析需要設(shè)置掃描質(zhì)量范圍。如果對樣品不很熟悉不必分組：設(shè)置溶劑延遲時間選擇采集模式調(diào)整倍增器電壓根據(jù)分析需要設(shè)置閾值和采樣速率，閾值的值會影響到基線，設(shè)得過大，可能看不到基線甚至有時候看不到分子離子等較低的碎片離子，過小則

18、基線太雜，采樣率通常根據(jù)掃描范圍來定，使Scans/Sec的值達到3左右為好。設(shè)置實時繪圖參數(shù)然后點擊“Close/關(guān)閉”完成掃描參數(shù)設(shè)定。編輯SIM質(zhì)譜參數(shù)編輯SIM方式參數(shù)點擊“SIMParameters/SIM參數(shù)”編輯選擇離子參數(shù)編輯SIM參數(shù)：停留時間（dwelltime）和分辨率參數(shù)適用于組里的每一個離子。在Dwell列中輸入的時間是消耗在選擇離子的采樣時間。它的缺省值是100毫秒。它適用于在一般毛細管GC峰中選擇2-3個離子的情況。如果多于3個離子，使用短一點的時間（如30或50毫秒），編輯完SIM參數(shù)后，在“EditSIMParams”畫面點擊“OK”加入組加入所選離子采集數(shù)據(jù)

19、從Method/方法菜單下點擊RunMethod/運行方法來運行一個方法。若儀器配有自動進樣器設(shè)定進樣瓶號點擊“OKandrunmethod”則將自動完成數(shù)據(jù)的采集若為手動進樣則依提示在GC面板上先按“PreRun”鍵，待儀器準備好后進樣的同時按GC面板上的“Start”鍵，以完成數(shù)據(jù)的采集。依次輸入文件名；操作者；樣品名等相關(guān)信息。注意1：當工作站詢問是否取消溶劑延遲時,回答NO或不選擇。如果回答YES則質(zhì)譜開始采集，容易損壞燈絲。數(shù)據(jù)分析要想進行譜庫檢索您首先要購買并安裝好商業(yè)譜庫（如NIST05譜庫）或已建立好自己的用戶譜庫。雙擊桌面上文件名稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-01

20、1版本：A/0標題：氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）操作規(guī)程頁碼：7/10的“Instrument#1DataAnalysis”圖標，打開MSD的DataAnalysis4.3.21調(diào)入數(shù)據(jù)文件選擇所要處理的數(shù)據(jù)文件，然后點擊“0K/確定”，本底扣除。執(zhí)行本底扣除操作。經(jīng)過扣除本底的文件以原文件名保存在DATA/BSB文件夾中。在希望扣除本底的區(qū)域，按住鼠標右鍵拖拽或雙擊右鍵，上述為整體扣除背景，如果想扣除單點背景，則可使用工作站的譜圖相減功能，即按下面方式得到化合物的質(zhì)譜圖后，在右鍵雙擊峰。附近基線的位置得到本底的質(zhì)譜圖，然后在菜單Spectrum下選擇Subtract即可得到扣除本底后該化

21、合物的質(zhì)譜圖。用鼠標右鍵在目標化合物TIC譜圖區(qū)域內(nèi)拖拽可得到該化合物在所選時間范圍內(nèi)的平均質(zhì)譜圖，右鍵雙擊則得到單點的質(zhì)譜圖。選擇譜庫：在Spectrum菜單下選擇SelectLibrary。按“Browse/瀏覽”在Database目錄下選擇所需的譜庫，選中譜庫名后點擊OK/確定”。在所示的總離子流圖的峰位置雙擊右鍵得到該保留時間的質(zhì)譜圖。在得到的質(zhì)譜圖區(qū)域任意位置雙擊鼠標右鍵，即可得到該譜圖在所選譜庫中的檢索結(jié)果將結(jié)構(gòu)式加注在質(zhì)譜圖上。在上圖選擇合適的檢索結(jié)果，單擊“Done/完成”，然后在質(zhì)譜圖的目標位置按住鼠標右鍵拖拽一個矩形即可將該化合物的結(jié)構(gòu)式加注到譜圖上。4.3.22百分比報告

22、在Method方法下調(diào)入采集此數(shù)據(jù)的方法然后積分。通過點擊“AutoIntegrate/自動積分”或“Integrate/積分”得到積分結(jié)果，如果對自動積分的結(jié)果不滿意，可以到Chromatogram/色譜圖菜單選擇“MsSignalIntegrationParameters/質(zhì)譜信號積分參數(shù)”更改積分參數(shù)，然后選擇“Integrate/積分”，直到得到滿意的積分結(jié)果。選擇百分比報告：要想得到好的積分結(jié)果，積分參數(shù)的優(yōu)化非常重要。如threshold（斜率靈敏度）就直接影響到一個峰的積分起始位置。4.4外標法定量調(diào)出要制定的標準曲線中最高濃度的數(shù)據(jù)，右鍵雙擊要定量的峰，選擇合適的目標離子文件名

23、稱:作業(yè)指導書文件編號：RC/ZY/02-011版本：A/0標題：氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）操作規(guī)程頁碼：8/10和參考離子（或參考文獻、標準等選取）。使用EIC功能提取目標離子和參考離子。優(yōu)化積分參數(shù)，確保目標離子和參考離子都能夠得到好的積分：設(shè)定定量參數(shù)：點擊“Calibrate/校正”菜單，選擇第一項“Setupquantitation/設(shè)置定量”進入定量設(shè)置界面。為定量曲線取個名字，并選擇合適的曲線類型等，點擊確定進入下一界面。點擊“insertabove/插入上方”進行定量離子的編輯?？捎米箧I畫框的方式將要定量的第一個峰放大，然后右鍵雙擊得到質(zhì)譜圖。在“name”框中輸入該化合

24、物的名稱，然后將鼠標移至目標離子，左右鍵同時點擊將其選取到定量表中，使用同樣方法選取參考離子點擊“Save”完成對該化合物的編輯，同時進入另一個化合物的編輯。等所有化合物設(shè)定完成后，點擊Exit退出編輯界面：再次點擊Exit，在彈出的對話框上選擇“Yes/是”進行定量校正。輸入該校正點化合物的濃度，在level欄里面輸入T”，點擊“DoUpdate”完成第一個點的校正，彈出的對話框顯示的是校正過的各化合物的曲線等信息，如果有的化合物濃度不一致，在此可修改。相對于第一個校正點來說，后面的校正點的加入就簡單得多了，點擊0K并選擇Save退出校正界面。調(diào)出第二個校正點的數(shù)據(jù)，在“Calibrate/校正”菜單下選擇“Update/升級”，在彈出的對話框中選擇“Updateonelevel/升級一個級別,，在選擇Yes進入第二個級別的校正，只要輸入該級