WatersHPLC2695操作規(guī)程參考模板范本

1、Waters HPLC 2695操作規(guī)程一、日常開機步驟1. 制備新鮮流動相和清洗液 流動相水 純凈水。緩沖劑 首先溶解鹽，調(diào)節(jié)pH值，然后過濾除去不溶解的物質(zhì)，緩沖鹽濃度100mMol。四氫呋喃 使用不穩(wěn)定的THF時，請確保溶劑是新鮮的。先前打開過的THF瓶含有過氧化物雜質(zhì)，將導致基線漂移。有機相 原裝進口的色譜純。清洗液洗針液根據(jù)樣品和流動相的化學性質(zhì)選用洗針液，確保所有溶液和緩沖劑都是易混合和可溶解的，最好選擇與最終梯度條件相似的洗針液。推薦使用的洗針液：80%甲醇/20%水色譜條件洗針液緩沖水溶液，反相80%有機相/20%水非水溶液，反相100%甲醇正相流動相GPC流動相離子交換水清洗

2、柱塞密封墊（seal wash）的溶液 含5% 10%甲醇的超純水（一般放在弱洗溶液中）注意：所有流動相和清洗液均需盛放于硼硅玻璃制作的高質(zhì)量實驗室玻璃器皿中，混合均勻并在使用前要經(jīng)過0.45m的膜式過濾器的過濾，超聲脫氣1-2min。2. 開機及系統(tǒng)準備2.1 開機先打開電腦，再依次接通2695分離單元、檢測器的電源。接通2695分離單元后，約20秒儀器自檢，約1分鐘后，顯示主屏幕，此時繼續(xù)各部件的初始化，待主屏幕上主標題區(qū)出現(xiàn)“Idle”儀器自檢通過，表示開機測試正常，之后啟動Emperor軟件。A管帶黃色標記、B管帶藍色標記號、C管帶紅色標記、D管帶綠色標記，綠色管為沖洗泵頭用，白色管為

3、沖洗進樣器用，將各泵頭放到相應的溶劑瓶中備用。2.2灌注 (Prime)當溶劑的管路是干的或存在較多氣泡不易排出時，需進行灌注?？上蚬芾韱T求助。2.3 平衡色譜柱在“Status”界面上，按流動相比例設定各通道溶劑比例后，設置流速，平衡色譜柱30-60min。（可在工作站中設置）。2.4 樣品的配制所有樣品均需經(jīng)過濾膜過濾，置于液相小瓶內(nèi)，達到樣品瓶的1/3以上。二、基本操作1. 創(chuàng)建項目 雙擊電腦桌面圖標“Empower”，用戶名輸入“system”密碼輸入“manager”選中操作項目和色譜系統(tǒng)確定。在菜單欄“管理”創(chuàng)建新項目選擇父項目下一步輸入表空間值按“下一步”逐步設置完成管理改變/項

4、目，在該窗口切換項。2. 新建儀器方法 進入“運行樣品”后，選擇“創(chuàng)建方法組”調(diào)用方法組編輯向?qū)?。出現(xiàn)“新建方法組選擇儀器方法”，單擊“新建”來創(chuàng)建新的儀器方法，此時出現(xiàn)“儀器方法編輯器”界面，按相關的要求填寫各參數(shù)，根據(jù)需要編輯不同的方法，編輯完畢后單擊“文件”，“另存為”后出現(xiàn)“保存儀器方法”對話框，輸入此方法用于的測定藥品名稱，單擊“保存”。3. 新建方法組選擇所需的方法名稱，點擊“下一步”，輸入方法組名（與方法名一致），即完成方法組的建立。4. 監(jiān)視基線和單次進樣4.1監(jiān)視基線點擊平衡系統(tǒng)/監(jiān)視基線圖標輸入儀器方法平衡監(jiān)視器，開始按設置方法平衡基線。待基線平衡、壓力平穩(wěn)后，點擊“中斷樣

5、品組”開關，終止觀察基線。4.2 單進樣當進行單進樣時，在“運行樣品”的“單進樣”界面中輸入“樣品名”“功能”“方法組”“進樣體積”“運行時間”等；然后點擊“單進樣”圖標，或選擇上方的“進樣”再選擇“進樣”，這樣就開始了單次進樣。單次進樣完成分析后系統(tǒng)即停止檢測（流動相正常流動）。當要對分析方法做修改時，通過中斷運行樣方法組儀器隨時改變方法另存覆蓋平衡監(jiān)視執(zhí)行新方法，可重復至最佳分析方法確定。5. 運行樣品組 當多進樣時，在“運行樣品”的“樣品”界面點擊“樣品瓶”輸入所有樣品分別所在位置（輸入所在編號），接著分別設定“樣品名稱”、“進樣體積”、“進樣數(shù)”、“功能”等采集參數(shù)，在“方法組”中選擇

6、需要的方法組，在“運行時間”中設定相關的時間。開啟綠色“運行”或點擊“進樣”，在選擇“運行樣品組”，輸入樣品組名稱，運行模式（只運行），適應性模式（出錯時繼續(xù)），點擊運行。如果有另外一組樣品需要運行的話，也可返回“樣品”表單繼續(xù)編輯新的一組樣品，隨后單擊“運行”，即可在此樣品組結束后繼續(xù)運行新的一組。如需修改正在運行樣品的測試樣品，在“運行樣品”的“正在運行”界面，點擊“編輯”菜單中“改變當前運行樣品的信息”，點擊確定，修改樣品以后，須重新點擊“運行”。三、數(shù)據(jù)處理1. 利用處理方法向?qū)Ы⑻幚矸椒?.1 單擊Empower軟件Pro界面中的“瀏覽項目”進入數(shù)據(jù)瀏覽畫面，開始查找數(shù)據(jù)。1.2

7、選擇“通道”，進入通道畫面。選擇需處理的數(shù)據(jù)，選擇菜單“工具-查看”打開。1.3 出現(xiàn)“查看-主窗口”，單擊菜單“文件-新建-處理方法”，出現(xiàn)新建處理方法對話框，在“處理類型”選擇“LC”，“積分算法”選擇“傳統(tǒng)”，在“使用處理方法向?qū)А鼻懊娲蚬?，然后點擊“確定”。1.4 出現(xiàn)“積分-峰檢測1”畫面，設定峰寬或者接受缺省值，單擊“下一步”。1.5 在“積分-峰檢測2”畫面，設定積分閥值或者接受缺省值，單擊“下一步”。1.6 在“積分-積分區(qū)域”中，直接輸入保留時間或者用鼠標左鍵拖拽放大選定積分區(qū)域，單擊“下一步”。1.7 在“積分峰剔除”中，根據(jù)需要設定最小面積或最小高度，或者不作任何改變，單

8、擊“下一步”。1.8 在“校正-普通”頁中，除有特定要求外，接受缺省選項，單擊“下一步”,出現(xiàn)對話框，選擇“否”。1.9 在“校正-名稱和保留時間”頁中，在“名稱”欄中，輸入組分的名稱，或不作改動，1.10 在“校正-缺省量”頁中，“含量”和“單位”欄不填，單擊“下一步”。1.11 在“校正-內(nèi)表樣”頁中，接受缺省選項（外標校正），單擊“下一步”。1.12 出現(xiàn)處理方法名對話框，在“在處理方法名”中輸入方法名，然后單擊“完成”結束處理方法向?qū)А?.13 再次出現(xiàn)主窗口，下部的“峰”表中出現(xiàn)積分結果，并在狀態(tài)條中顯示新處理方法名稱。然后打開菜單“文件-保存-全部”，進行保存，最后關閉窗口。1.1

9、4 回到“瀏覽項目”里面，選擇“方法”，然后“更新”，剛建立的處理方法就出現(xiàn)在里面。2. 直接建立處理方法2.1 單擊 Empower 軟件 Pro 界面中的“瀏覽項目”。2.2選擇“文件-新建方法-處理方法”，進入“新處理方法”對話框，在“處理類型”選擇“LC”，“積分算法”選擇“傳統(tǒng)”，單擊“確定”。2.3 進入“處理方法編輯器-LC處理方法”窗口，分別在“積分”、“平滑/偏移”、“組分”、 “峰比率”、“缺省含量”、“命名組”、“定時組”、“適應性”、“限制”、“噪音與漂移”根據(jù)圖譜處理需要設定相關的參數(shù)。2.4 相關的參數(shù)設定后，選擇“文件-另存為”，在“保存當前的處理方法”的對話框里

10、輸入此處理方法的名稱，單擊“保存”。2.5 回到“瀏覽項目”里面，選擇“方法”，然后“更新”，剛建立的處理方法就出現(xiàn)在里面。3. 定量計算3.1 回到“通道”選項卡，選中要處理的樣品，然后單擊“處理”。3.2 出現(xiàn)“后臺處理報告”對話框，在“處理”中，選“使用指定的處理方法”，并在下拉菜單中選擇建立的處理方法。在“清除校正”方框中打勾，并使“打印”和“導出”方框中為空，單擊“確定”。3.3 回到“結果”選項卡，單擊“更新”鍵更新結果。雙擊即可瀏覽色譜圖和“峰”結果， 查看計算的“含量”結果。4. 數(shù)據(jù)報告的打印4.1 單擊Empower軟件Pro界面中的“瀏覽項目”，選擇所要打印數(shù)據(jù)所在的項目

11、后，單擊“確定”，進入項目瀏覽畫面。4.2 在“結果”選項卡中選擇欲打印的結果，選擇菜單“工具-預覽/出版”。4.3出現(xiàn)“打開報告方法”對話框，在“使用以下的報告方法”下拉菜單中選擇“峰綜合報告”，然后單擊“確定”。4.4在屏幕上即出現(xiàn)報告預覽窗口，如預覽后無誤，選擇菜單“文件-打印”或單擊打印的圖標，打印報告。四、關機1. 使用完畢后，按規(guī)定用適當?shù)娜軇_洗色譜柱、系統(tǒng)管路、自動進樣器、進樣針和柱塞桿密封墊。2. 確保2695分離單元已徹底沖洗干凈后，關閉電源開關，關閉計算機及顯示器電源。填寫使用及維修保養(yǎng)記錄。五、使用注意1. 含鹽的流動相的沖洗方法：每天操作結束后，先用純化水或含甲醇 5

12、%（最高濃度在20%以下）的水沖洗時間約2030分鐘，再用高濃度甲醇（含甲醇85%以上）溶液沖洗，約3060分鐘(注：不能直接用有機溶液沖洗，鹽類易析出，堵塞色譜柱，污染儀器管道。)2. 不含鹽的流動相的沖洗方法：每天操作結束后，先用流動相沖洗約1015分鐘， 再用含5%甲醇的水沖洗1020分鐘。最后用高濃度甲醇（含甲醇85%以上）溶液或純甲醇沖洗，時間約2030分鐘。2. 系統(tǒng)短期不使用，應該在每次使用后沖洗系統(tǒng) 30分鐘以上。3. 當泵出現(xiàn)壓力明顯高于正常值的情況，應先拆卸掉在線過濾器再連接好流路，觀察泵壓讀數(shù)，若泵壓讀數(shù)依然很高，則在線過濾器沒有堵塞。預柱、分析柱同樣處理。發(fā)現(xiàn)哪個部件有堵塞則拆卸掉超聲清洗20m