過(guò)氧化物酶染色Washburn法骨髓巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

1、過(guò)氧化物酶染色Washburn法骨髓巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)1. 實(shí)驗(yàn)原理粒細(xì)胞和部分單核細(xì)胞的溶酶體顆粒中含有過(guò)氧化物酶，pox能分解H2O2釋放出新生氧，使四甲基聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合，再進(jìn)一步氧化形成穩(wěn)定的藍(lán)色物質(zhì)，沉淀于酶活性的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。2. 標(biāo)本采集2.1 病人準(zhǔn)備：了解病人是否對(duì)局麻藥有過(guò)敏史。凝血因子嚴(yán)重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎癥或有畸形，晚期妊娠婦女作骨髓穿刺時(shí)要慎重。2.2 標(biāo)本種類：新鮮抽取的骨髓穿刺液2.3 標(biāo)本采集要求2.3.1 高壓消毒的穿刺針，一次性無(wú)菌手套和抽取骨髓液的無(wú)菌注射器。2.3.2 臨床上首選穿刺部位為髂后上棘；翻身困難，

2、需多部位穿刺患者可選擇髂前上棘為穿刺部分。小于3歲的小兒還可選擇脛骨頭內(nèi)側(cè)為穿刺部位。3. 標(biāo)本儲(chǔ)存：室溫避光處保存，若不能及時(shí)測(cè)定，可采用95乙醇固定2分鐘，可保存數(shù)天。4. 標(biāo)本運(yùn)輸：室溫運(yùn)輸5. 標(biāo)本拒收的標(biāo)準(zhǔn)：溶血、稀釋標(biāo)本不能作測(cè)定。6. 試劑6.1 試劑名稱：血細(xì)胞pox染色試劑6.2 試劑生產(chǎn)廠家：上海太陽(yáng)生物技術(shù)公司6.3 試劑組成試劑1：pox液（紫紅色）2-8避光保存，有效期六個(gè)月。試劑2：pox液（無(wú)色）2-8避光保存，有效期六個(gè)月。試劑3：95乙醇，室溫避光保存。試劑4：瑞氏染液，室溫避光保存。7. 操作步驟7.1 新鮮涂片滴加液數(shù)滴（覆蓋血膜為宜），室溫放置1分鐘，勿

3、沖洗即滴加液數(shù)滴，混合后室溫放置5分鐘，流水沖洗。7.2 滴加95乙醇脫色，水洗后瑞氏染色，復(fù)染后鏡檢觀察結(jié)果。8. 結(jié)果判斷8.1 陽(yáng)性細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃或藍(lán)黑色顆粒沉淀物質(zhì)，定位于胞質(zhì)。8.2 陰性細(xì)胞內(nèi)無(wú)棕黃色或藍(lán)黑色顆粒。9. 臨床意義9.1 粒細(xì)胞系統(tǒng)呈集中狀粗顆粒強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，單核細(xì)胞系統(tǒng)呈彌散狀顆粒弱陽(yáng)性反應(yīng)，部分原始單核細(xì)胞可呈陰性反應(yīng)。網(wǎng)狀細(xì)胞及吞噬細(xì)胞有不同程度的陽(yáng)性。9.2 淋巴細(xì)胞系、紅細(xì)胞系、巨核細(xì)胞系、漿細(xì)胞系等均為陰性反應(yīng)。10. 操作性能：快速簡(jiǎn)便，特異性強(qiáng)，靈敏度高。11. 方法局限性11.1 標(biāo)本應(yīng)新鮮，且未受其他化學(xué)物的污染。若標(biāo)本采集后不能及時(shí)測(cè)定，可采用95乙醇固定2分鐘后，可保存數(shù)天。11.2 雙氧水（液）最適濃度為0.05mol/L左右，濃度過(guò)高，將會(huì)抑