DB13-T1384-3-2011飼料中鏈霉素的測(cè)定

1、ICS 65.120B 46DB13河北省地方標(biāo)準(zhǔn)DB13/T 1384.32011飼料中鏈霉素的測(cè)定Determination of streptomycin in feed2011 - 05 - 10 發(fā)布2011 - 05 - 20 實(shí)施河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā) 布DB13/T 1384.32011I前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.12009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河北省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、石家莊市疾病預(yù)防控制中心、北京出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心、河北省醫(yī)科大學(xué)、河北省飼料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張巖、楊立學(xué)、李揮、叢斌、呂品、張宏、盧

2、曉宇、李志平、賈茜、張敬軒、馬春玲、米振杰、沈磊、高振同、武英利。 PAGE 4飼料中鏈霉素的測(cè)定范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中鏈霉素的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中鏈霉素的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限為20 g/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（GB/T 66821992，neq ISO 3696:1987)原理試樣經(jīng)提取，高速離心后再用陽(yáng)離子交換柱凈化，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定，子離子豐度比定性，外標(biāo)

3、法定量。試劑和材料除另有說(shuō)明外，所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。甲醇：色譜純。七氟丁酸酐（HFBA）：優(yōu)級(jí)純。三氯乙酸。磷酸二氫鉀（KH2PO4）。鹽酸。二水合乙二胺四乙酸二鈉（Na2EDTA2 H2O）。樣品提取液（10 mmol/L KH2PO4 溶液，含 0.4 mmol/L EDTA 和 2三氯乙酸）：準(zhǔn)確稱量 1.36 g KH2PO4 于1 000 mL 容量瓶中，加入少量水，用鹽酸調(diào) pH 至 4.0，再加入 1.5 g Na2EDTA2 H2O 和20 g 三氯乙酸，用水定容至刻度，混勻即得。氫氧化鈉。鏈霉素硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品：純度99。鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液

4、：分別稱取經(jīng)折算相當(dāng)于 0.010 0 g 鏈霉素的標(biāo)準(zhǔn)品，用水溶解定容至 100mL，溶液濃度為 100 g/mL。14冷藏保存，保存期 1 個(gè)月。空白樣品提取液：用不含鏈霉素的樣品，按照 6.1 和 6.2 制備空白樣品溶液。鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：根據(jù)需要用空白樣品溶液將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋成 15 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、250 ng/mL、300 ng/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，相當(dāng)于樣品中含有 6 g/kg、10 g/kg、20 g/kg、100 g/kg、120 g/kg 鏈霉素，現(xiàn)配。CBX 陽(yáng)離子交換柱，或相當(dāng)者：500 mg，6 mL。乙酸。10乙酸甲醇溶

5、液：準(zhǔn)確量取 10 mL 乙酸于 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻即可。100 mmol/L HFBA 水溶液：準(zhǔn)確量取 6.5 mL 七氟丁酸酐，用水稀釋至 500 mL（4避光保存6 個(gè)月）。20 mmol/L HFBA 水溶液：準(zhǔn)確量取 100 mmol/L HFBA 溶液 50 mL，用水稀釋至 250 mL（4 避光保存 6 個(gè)月）。5 mmol/L HFBA 水溶液：準(zhǔn)確量取 20 mmol/L HFBA 溶液 25 mL，用水稀釋至 100 mL（4避光保存 6 個(gè)月）。20 mmol/L HFBA 乙腈溶液：準(zhǔn)確量取 1.3 mL 七氟丁酸酐，用乙腈稀釋至 500

6、 mL（4避光保存 6 個(gè)月）。儀器和設(shè)備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源。微孔濾膜。pH 計(jì)。高速離心機(jī)。旋渦混勻器。固相萃取裝置。測(cè)定步驟提取準(zhǔn)確稱取樣品 1 g（精確到 0.01 g）至 10 mL 離心管中，加樣品提取液 10 mL，旋渦混勻 10 min，12 000 r/min 離心 10 min，移出上清液。重復(fù)提取一次，合并上清液，調(diào) pH 至 8.0，12 000 r/min 離心 10 min，取上清液備用。凈化將上清液移入 CBX 柱（使用前分別用 5 mL 甲醇、5 mL 水預(yù)處理，保持柱體濕潤(rùn)）。溶液以 2.0 mL/min 的流速過(guò)柱，然后依次用水淋洗，減壓抽

7、干 20 min。用 10乙酸甲醇溶液 5 mL 洗脫，收集洗脫液于 40下氮?dú)獯蹈?。?5 mmol/L HFBA 水溶液 0.5 mL 溶解殘?jiān)?5 000 r /min 離心 10 min，經(jīng) 0.22 m 濾膜過(guò)濾后，待測(cè)。測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件色譜柱：C18，5 m，50 mm2.l mm（內(nèi)徑）或相當(dāng)者。流動(dòng)相：20 mmol/L HFBA 水溶液（A）20 mmol/L HFBA 乙腈溶液（B）。流速：0.25 mL/min。梯度：0 min10.0 min 560 B，10.0 min10.1 min 605 B，10.1 min15.0 min 5B。柱溫：30。 進(jìn)樣

8、量：10L。離子源：電噴霧離子源。掃描方式：正離子掃描。檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。電噴霧電壓、碰撞電壓等自動(dòng)優(yōu)化至最佳值。定性離子對(duì)：582.7/263.1，582.7/246.3。 定量離子對(duì)：582.7/263.1。色譜測(cè)定根據(jù)試樣中被測(cè)樣液的含量情況，選取響應(yīng)值相近的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行色譜分析。標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣液中待測(cè)物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)。鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)品多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM色譜圖參見(jiàn)附錄 A.定性、定量按照液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件測(cè)定樣品和標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，如果檢測(cè)的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品一致，定量測(cè)定時(shí)采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。定性時(shí)應(yīng)當(dāng)與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的相對(duì)豐度一致，相對(duì)豐度允許偏差不超過(guò)表 1 規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在對(duì)應(yīng)的被測(cè)物。表1定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度/()5020 至 5010 至 2010允許的相對(duì)偏差/()20253050空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按上述操作步驟進(jìn)行。結(jié)果計(jì)算和表述用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或用標(biāo)準(zhǔn)曲線按式（1）計(jì)算試樣中鏈霉素含量：式中：X c V m1000.(1)X 一一試樣中鏈霉索的量，單位為毫克每千克（mg/kg）；c 一一從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的待測(cè)液中鏈霉