血清載脂蛋白A1免疫透射比濁法測(cè)定法

1、血清載脂蛋白A1免疫透射比濁法測(cè)定法1. 實(shí)驗(yàn)原理免疫透射比濁終點(diǎn)測(cè)定法。使用抗Apo A1抗體和樣品中的Apo A1進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)。反應(yīng)完成后，用透射比濁法檢測(cè)吸光度的變化反映Apo A1濃度。2. 標(biāo)本：2.1 病人準(zhǔn)備：12小時(shí)禁食。2.2 類型：血清、肝素或EDTA血漿。3. 標(biāo)本存放：穩(wěn)定性：1525保存可穩(wěn)定5天；28保存可穩(wěn)定2周；-20保存可穩(wěn)定3個(gè)月；標(biāo)本不可反復(fù)凍融。4. 標(biāo)本運(yùn)輸：常溫條件下保存運(yùn)輸。5. 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)本細(xì)菌污染的標(biāo)本。6. 實(shí)驗(yàn)材料6.1 試劑威特曼APOA1測(cè)定試劑盒 試劑1；試劑2 6.1.1 試劑準(zhǔn)備：試劑為即用式。6.1.2 試劑穩(wěn)定性與

2、貯存試劑保存于28，若無污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑不可冰凍。開蓋后放于儀器的冰箱中可以穩(wěn)定30天。6.1.3 變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有看得見的微生物生長(zhǎng)，有濁度，或者未開蓋的液體有沉淀時(shí)，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。6.1.4 注意事項(xiàng)：試劑中含疊氮鈉（0.95g/L）為防腐劑。不可入口！避免接觸皮膚及粘膜。應(yīng)采取必要的預(yù)防措施使用試劑6.2 校準(zhǔn)品：建議使用威特曼公司提供的校準(zhǔn)品對(duì)自動(dòng)分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)，校準(zhǔn)穩(wěn)定期：4周。具體參見生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。6.3 質(zhì)控品：具體參見生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。7. 儀器：奧林巴斯AU2700生化分析儀8. 操作步驟8.1 項(xiàng)目基本參數(shù)

3、：參見AU2700生化分析儀項(xiàng)目測(cè)定參數(shù).SOP文件8.2儀器操作步驟：參見AU2700生化分析儀操作規(guī)程.SOP文件9. 檢驗(yàn)結(jié)果的判斷與分析10. 質(zhì)量控制：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水平I與II質(zhì)控做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。11. 計(jì)算方法：按照公司配套校準(zhǔn)品使用要求，用3個(gè)不同水平的校準(zhǔn)液，并以9g/L氯化鈉溶液為空白，經(jīng)校準(zhǔn)測(cè)定，儀器自動(dòng)對(duì)校準(zhǔn)品響應(yīng)量通過合適的數(shù)學(xué)模型如Logit/Log，擬合成校準(zhǔn)曲線。校準(zhǔn)儀器后，在病人結(jié)果可報(bào)告范圍內(nèi)，儀器直接報(bào)告可靠的檢測(cè)結(jié)果。12. 參考值

4、范圍 3女性：1.201.90g/L男性：1.101.70g/L參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考值。13. 臨床意義1,2：載脂蛋白A1(Apo A1)是高密度脂蛋白(HDL)的主要結(jié)構(gòu)蛋白，它可以去除細(xì)胞中的膽固醇，因此具有預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的作用。流行病學(xué)研究表明以Apo A1表示的HDL水平與冠心病(CHD)的流行率呈負(fù)相關(guān)。在使用總膽固醇和甘油三酯來過篩冠心病危險(xiǎn)時(shí)，除檢測(cè)脂蛋白(a)與載脂蛋白B之外，同時(shí)檢測(cè)載脂蛋白A1能對(duì)脂類失調(diào)提供更多的信息，也可替代高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)檢測(cè)。一些研究表明，當(dāng)Apo B濃度上

5、升(女性Apo B1.50g/L，男性Apo B1.55g/L)，而Apo A1濃度下降(女性Apo A11.20g/L，男性Apo A11.10g/L)，對(duì)于預(yù)測(cè)CHD危險(xiǎn)非常有用。14. 操作性能14.1 線性范圍：0.012.5g/L14.2 精密度：精密度的評(píng)估是根據(jù)NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法，AU2700批內(nèi)精密度小于3%，總精密度小于3%。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。批內(nèi)精密度n=20(g/L)s(g/L)CV(%)批間精密度n=20(每天校準(zhǔn))(g/L)s(g/L)CV(%)樣品10.3630.00661.81樣品10.4390.00701.60樣品20

6、.8640.00141.66樣品20.8850.02082.35樣品31.520.00563.65樣品31.460.02801.92批間精密度n=20(一次校準(zhǔn))(g/L)s(g/L)CV(%)樣品10.4420.00811.84樣品20.9170.02292.50樣品31.500.03152.1014.3 方法學(xué)比較：本公司的試劑盒(y)與某商品化試劑盒(x)，同時(shí)對(duì)53個(gè)樣品進(jìn)行Apo A1檢測(cè)，將檢測(cè)結(jié)果作方法學(xué)比較，其統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下：y=1.15x-0.077g/L；r=0.994。14.4 靈敏度：本試劑的檢測(cè)限為0.002g/L。14.5 病人結(jié)果可報(bào)告范圍：0.012.50g/L。

7、15. 超出范圍結(jié)果處理：本法的檢測(cè)范圍為0.012.50g/L。當(dāng)樣品測(cè)定值超過上限時(shí)，應(yīng)將樣品用9g/L氯化鈉溶液作1+1稀釋后，重新測(cè)定，結(jié)果乘以2。16. 病危報(bào)警值的處理：無。17. 方法局限性17.1 本法的檢測(cè)范圍為0.012.50g/L。當(dāng)樣品測(cè)定值超過上限時(shí)，應(yīng)將樣品用9g/L氯化鈉溶液作1+1稀釋后，重新測(cè)定，結(jié)果乘以2。17.2 干擾物質(zhì)：DiaSys公司的Apo A1試劑中抗體特異地只與人Apo A1發(fā)生免疫反應(yīng)。當(dāng)樣品中抗壞血酸濃度1704 mol/L，膽紅素濃度598mol/L，血紅蛋白濃度5.00g/L，甘油三酯濃度22.6mmol/L時(shí)沒有觀察到干擾。試劑與Ap

8、oA2和ApoB沒有交叉反應(yīng)。17.3 前帶限制：血清Apo A1值5.00g/L時(shí)，沒有觀察到前帶效應(yīng)。18. 補(bǔ)救措施：當(dāng)儀器發(fā)生故障時(shí)，迅速聯(lián)系儀器廠家進(jìn)行維修。19. 參考文獻(xiàn)1. Bhatnagar D, Durrington PN. Measurement and clinical significance of apolipoproteins A-I and B. In: Rifai N, Warnick GR, Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC Press, 1997: p

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