高效液相色譜法測定地龍配方顆粒中次黃嘌呤的含量

1、高效液相色譜法測定地龍配方顆粒中次黃嘌呤的含量【摘要】目的測定地龍配方顆粒中次黃嘌呤的含量。方法采用反相高效液相色譜法。色譜柱：InertsilDS-EP柱，流動相：水-甲醇-四氫呋喃1000.50.5，流速：1.0lin-1，檢測波長：254n。結(jié)果次黃嘌呤在0.04060.4060g間與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r0.9999；平均加樣回收率為97.6%，RSD為0.63%n=9。結(jié)論該法操作簡便、準(zhǔn)確，可用作為該制劑的含量測定方法?！娟P(guān)鍵詞】地龍配方顆粒次黃嘌呤反相高效液相色譜Abstrat：bjetiveTdeterinethententfHypxanthineinPheretiapun

2、dingGranules.ethdsAnRP-HPLasestablished.ThehratgraphilunasInertsilDS-EP.ThebilephaseasH2-H3H-4H8(1000.50.5).Theflrateas1.0lin-1,andthedetetinavelengthas254n.ResultsHgpxanthineshedgdlinearrelatinshipintherangef0.04060.4060g.TheaveragereveryfrHypxanthineas97.6%andRSDas0.63%(n=9).nlusinThisethdissiple,

3、aurateandanbeusedfrntentdeterinatinfPheretiapundingGraunles.Keyrds：PheretiapundingGranules;Hypxanthine;RP-HPL地龍為巨蚓科動物參環(huán)毛蚓或正蚓科動物背暗唇蚓等的全蟲體。性味咸寒，有清熱、平肝、定喘、通絡(luò)之成效，主治高熱狂躁、驚風(fēng)抽搐、風(fēng)熱頭痛、目赤、中風(fēng)半身不遂、喘息、喉痛、關(guān)節(jié)疼痛、齒衄、小便不通、瘰疬、痄腮、瘡瘍等疾病1。據(jù)報道次黃嘌呤是地龍擴(kuò)張支氣管成分，從地龍中別離出的次黃嘌呤有抗組胺、降血壓等作用2。地龍配方顆粒的內(nèi)在質(zhì)量，本文以次黃嘌呤為指標(biāo)成分，建立地龍配方顆粒中次黃嘌呤含量

4、測定的高效液相色譜法，為本品質(zhì)量控制指標(biāo)提供參考。1器材1.1儀器日本島津高效液相色譜儀L10ATVP溶劑輸送泵，SPD-10AVP紫外檢測器；H2000色譜工作站南京千譜軟件。1.2試藥與試劑次黃嘌呤對照品國藥集團(tuán)化學(xué)試劑提供，批號F20220219，純度為99.8%；地龍配方顆粒劑樣品批號為030598，0407136，0409959，0504632，0507026及缺地龍藥材的陰性對照品廣東一方制藥提供，規(guī)格為每袋1g，相當(dāng)于每袋10g飲片；甲醇、四氫呋喃為色譜專用試劑，其余為分析純；水為雙蒸水。2方法與結(jié)果2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性實驗色譜柱InertsilDS-EP柱2504.6，5

5、，迪馬公司；流動相為水-甲醇-四氫呋喃1000.50.5；流速為1.0lin-1；檢測波長為254n。柱溫：室溫。分別取對照品溶液，供試品溶液和陰性樣品溶液20l注入色譜儀，按上述色譜條件，記錄色譜圖圖13。次黃嘌呤與樣品中相鄰色譜峰別離較好R1.5，理論板數(shù)以次黃嘌呤峰計算應(yīng)不低于2600，保存時間約5.5in。圖1次黃嘌呤對照品HPL圖略圖2地龍配方顆粒樣品HPL圖略圖3陰性對照樣品HPL圖略2.2供試品溶液的制備取本品研細(xì)的粉末約0.075g，精細(xì)稱定，置于25l容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。2.3陰性對照品溶液的制備方法同供試品溶液的制備一樣。2

6、.4對照品溶液的制備精細(xì)稱取次黃嘌呤對照品20.30g，置于100l容量瓶中，加水超聲處理溶解并稀釋至刻度，搖勻，使成0.203gl-1貯備液，再精細(xì)汲取貯備液10l置于100l容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得次黃嘌呤濃度為0.0203gl-1的對照品貯備液，分別精細(xì)汲取一定量的對照品0.0203gl-1貯備液用水稀釋成濃度為2.03，4.06，8.12，10.15，12.18，16.24，20.30gl-1對照品溶液，搖勻，即得。2.5線性關(guān)系考察分別精細(xì)汲取不同濃度的對照品溶液各20l，注入液相色譜儀測定，以峰面積A對對照品溶液濃度進(jìn)展回歸，得回歸方程A41342+6140.3，r0.9

7、999。實驗說明次黃嘌呤在0.04060.4060g范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。2.6精細(xì)度實驗取濃度為8.12gl-1的次黃嘌呤對照品溶液20l，注入液相色譜儀連續(xù)測定5次，記錄峰面積并計算，結(jié)果次黃嘌呤峰面積的平均值為338681，RSD為1.01%n5，說明儀器精細(xì)度良好。2.7穩(wěn)定性實驗取地龍配方顆粒供試品溶液批號0409959，在0，2，3，4，6，8h進(jìn)樣20l，記錄峰面積，結(jié)果次黃嘌呤峰面積的平均值為194873，RSD為1.46%，說明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。2.8重現(xiàn)性實驗取同一批號批號0409959樣品6份，按樣品“2.10項方法測定，結(jié)果次黃嘌呤平均含量為1.5614

8、gg-1，RSD為1.96%，說明分析方法精細(xì)度良好。2.9加樣回收率實驗精細(xì)稱取含量批號0409959的地龍配方顆粒樣品約0.0750g，共9份，分別精細(xì)參加濃度為0.203gl-1的次黃嘌呤對照品貯備液，3.8，3.8，3.8，7.6，7.6，7.6，11.4，11.4，11.4l，按“2.2項方法下制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣20l進(jìn)展分析。結(jié)果見表1。表1加樣回收率測定結(jié)果略2.10樣品測定取不同批號地龍配方顆粒劑樣品5批，按“2.2項方法下制備供試品溶液，另精細(xì)汲取濃度為8.12gl-1的次黃嘌呤對照品溶液和制備的供試品溶液20l，注入液相色譜儀，測定，計算次黃嘌呤的含量。結(jié)

9、果見表2。表2樣品測定結(jié)果略3討論3.1供試品溶液制備的選擇分別考察了水和不同濃度的乙醇10%95%溶液溶解樣品，測定次黃嘌呤的含量，結(jié)果水溶解提取的含量最高，而乙醇隨濃度增加次黃嘌呤的含量降低。說明次黃嘌呤在水溶液中的溶解度大于醇溶液。3.2對測定波長的選擇取次黃嘌呤8.12gl-1對照品溶液和批號009959供試品溶液，用水做參比，置紫外可見分光光度計儀器中，在200400n波長掃描，結(jié)果次黃嘌呤對照品和供試品溶液均在254n處都有最大吸收波長，故254n選擇作為檢測波長。3.3對流動相的選擇我們參照有關(guān)文獻(xiàn)使用水甲醇四氫呋喃1000.120.04為流動相條件3，結(jié)果別離不太理想，我們嘗試了不同比例水甲醇四氫呋喃流動相對別離的影響，結(jié)果說明水甲醇四氫呋喃1000.50.5為流動相條件，地龍配方顆粒中次黃嘌呤可和其它組分基線別離，并且峰形良好。實驗結(jié)果說明地龍配方顆粒制劑不同批號的次黃嘌呤含量有較大差異，故在對其制劑作質(zhì)量控制時，尤其重要。配方用次黃嘌呤含量作為制劑中相應(yīng)的有效成分建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，能準(zhǔn)確反映該制劑的質(zhì)量。該方法別離效果好、簡便、準(zhǔn)確，可