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文檔簡介

1、專題三植物的組織培養(yǎng)技術(shù)課題一菊花的組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)的基本過程細(xì)胞分化:。離體的植物組織或細(xì)胞,在培養(yǎng)了一段時間以后,會通過細(xì)胞分裂,形成愈傷組織,愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則,是一種的薄壁細(xì)胞。由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程,稱為植物細(xì)胞的,或者叫做。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),又可以重新分化成根或芽等器官,這個過程叫做1。再分化形成的試管苗,移栽到地里,可以發(fā)育成完整的植物體。植物細(xì)胞工程具有某種生物全的任何一個活細(xì)胞,都具有發(fā)育成的能力,即每個生物細(xì)胞都具有。但在生物體的生長發(fā)育過程中并不表現(xiàn)出來,這是因?yàn)樵跅l件下,通過基因的,構(gòu)成不同組織和器官。細(xì)胞分化是一種

2、持久性的變化,它有什么生理意義?答:使多細(xì)胞生物體中細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能趨向?qū)iT化,有利于提高各種生理功能的效率。比較根尖分生組織和愈傷組織的異同組織類型細(xì)胞來源細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞排列細(xì)胞去向根尖分生組織受精卵止方形無液泡緊密分化成多種細(xì)胞組織愈傷組織高度分化細(xì)胞一高度液泡化疏松再分化成新個體宜物組織鼎刖條件都通過有絲分裂進(jìn)行細(xì)胞增殖材料:不同的植物組織,培養(yǎng)的難易程度差別很大。植物材料的選擇直接關(guān)系到試驗(yàn)的成敗。植物的、材料的和等都會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇作材料。一般來說,容易進(jìn)行無性繁殖的植物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。選取生長旺盛嫩枝進(jìn)行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好,容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。營養(yǎng)

3、:離體的植物組織和細(xì)胞,對營養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對特殊,需要配制適宜的培養(yǎng)基。常用的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基,其中含有的是,是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co,有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。激素:植物激素中和是啟動細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。在生長素存在的情況下,細(xì)胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強(qiáng)趨勢。在培養(yǎng)基中需要添加生長素和細(xì)胞分裂素等植物激素,其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果。生長素類有:、。細(xì)胞分裂素類有:、。赤霉素類有:。使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先生長素,后細(xì)胞分裂素先細(xì)胞分裂素, 后生長素同時使用生長素/細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果比值高時比值低時

4、比值適中環(huán)境條件:PH溫度、光等環(huán)境條件。不同的植物對各種條件的要求往往不同。進(jìn)彳T菊花的組織培養(yǎng),一般將pH控制在5.8左右,溫度控制在1822C,并且每日用日光燈照射12h.4、操作流程配制MS固體培養(yǎng)基:配制各種母液:將各種成分按配方比例配制成的濃縮液(培養(yǎng)基母液)。使用時根據(jù)母液的濃縮倍數(shù),計(jì)算用量,并加蒸儲水稀釋。配制培養(yǎng)基:母液:無機(jī)物中的大量元素濃縮倍,微量元素濃縮倍。、以及用量小的有機(jī)物一般單獨(dú)配制成母液。取配制好的、和的母液,并用蒸儲水定容到1000毫升。在菊花組織培養(yǎng)中,可以不添加植物激素原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比較容易。滅菌:采取的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。MS培養(yǎng)基中各種營

5、養(yǎng)物質(zhì)的作用是什么?與肉湯培養(yǎng)基相比,MS培養(yǎng)基有哪些特點(diǎn)?大量元素和微量元素提供植物細(xì)胞所必需的無機(jī)鹽;蔗糖提供碳源,維持細(xì)胞滲透壓;甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。(微生物培養(yǎng))微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主,如:牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基(又稱肉湯培養(yǎng)基,培養(yǎng)細(xì)菌)、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基(培養(yǎng)大腸桿菌-菌落成黑色)(植物組織培養(yǎng))MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)。(也有有機(jī)物如蔗糖)。動物細(xì)胞培養(yǎng)的營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同,需要有盤氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素。由于人們對細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚,因此,在使用合成培養(yǎng)基時,通常需

6、加入血清、血漿等一些天然成分。外植體的消毒外植體:用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。選取菊花莖段時,要取。菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉,用軟刷輕輕刷洗,刷洗后在流水下沖洗20min左右。用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分,放入體積分?jǐn)?shù)為中搖動23次,才!續(xù)67s,立即將外植體取出,在無菌水中清洗。取出后仍用無菌吸水紙吸干外植體表面水分,放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為中12min。取出后,在無菌水中至少清洗3次,漂洗消毒液。注意:對外植體進(jìn)行表面消毒時,就要考慮,又要考慮。接種:接種過程中插入外植體時,每個錐形瓶接種78個外植體。外植體接種與細(xì)菌接種相似,操作步驟相同,而且都要求。培養(yǎng):應(yīng)該放在無菌箱中進(jìn)行

7、,并定期進(jìn)行消毒,保持適宜的溫度(1822C)和光照(12h)移栽:栽前應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜,讓其在培養(yǎng)間生長幾日,然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。然后將幼苗移植到消過毒的等環(huán)境中生活一段時間,進(jìn)行。最后進(jìn)行露天栽培。栽培:外植體在培養(yǎng)過程中可能會被污染,原因有外植體;培養(yǎng)基;接種中被雜菌污染;錐形瓶密封性差等。專題二月季的花藥培養(yǎng)被子植物的花粉發(fā)育被子植物的雄蕊通常包含花絲、花藥兩部分。花藥為囊狀結(jié)構(gòu),內(nèi)部含有許多花粉?;ǚ凼怯山?jīng)過而形成的,因此,花粉是。被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小抱子、和等階段。在小抱子四分體時期,4個單倍體細(xì)胞連在一起,進(jìn)入單核期時,四分體的4個單倍體細(xì)胞彼此分離,形成4個具

8、有單細(xì)胞核的花粉粒。這時的細(xì)胞含,核位于細(xì)胞的中央()。隨著細(xì)胞不斷長大,細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)(),并分裂成1個和1個,進(jìn)而形成兩個細(xì)胞,一個是,一個是。生殖細(xì)胞將在分裂一次,形成。注意:同一生殖細(xì)胞形成的兩個精子,其基因組成完全相同?;ㄋ帣M切1.各字母代表的具體時期是:ABCDE(1)圖中所示的植物的基因型為AaBb(兩對基因遵循自由組合定律遺傳),則的基因型為,、的基因型可能為、2)、所指的結(jié)構(gòu)依次是、;兩者的基因型是否相同?。3)某同學(xué)用上述花藥進(jìn)行離體培養(yǎng),對獲得的植株進(jìn)行鑒定,發(fā)現(xiàn)有一些為二倍體。推測這些二倍體植株的基因型有種。4)在進(jìn)行月季花藥組織培養(yǎng)時,選擇期的花藥接種,培養(yǎng)

9、成功率最高。確定花粉發(fā)育時期最常用的方法有法。對于某些不易著色的花粉細(xì)胞核,需要使用法將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。產(chǎn)生花粉植株的兩種1途徑通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株(即單倍體植株)一般有兩種途徑,一種是花粉通過階段發(fā)育為植物,另一種是花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成,再將其誘導(dǎo)分化成植株。這兩種途徑之間并沒有絕對的界限,主要取決于培養(yǎng)基中及其。注意:無論哪種產(chǎn)生方式,都要先誘導(dǎo),再誘導(dǎo)胚狀體:植物體細(xì)胞組織培養(yǎng)過程中,誘導(dǎo)產(chǎn)生的形態(tài)與受精卵發(fā)育成的胚非常類似的結(jié)構(gòu),其發(fā)育也與受精卵發(fā)育成的胚類似,有、等完整結(jié)構(gòu),就像一粒種子,又稱為細(xì)胞胚。影響花藥培養(yǎng)的因素誘導(dǎo)花粉能否成功及誘導(dǎo)成功率的高低,受多種因素影響

10、,其中與是主要的影響因素親本的生理狀況:花粉早期是的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株,選擇。合適的花粉發(fā)育時期:一般來說,在,細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時期,花藥培養(yǎng)成功率最高花蕾:選擇的花蕾親本植株的生長條件、材料的低溫預(yù)處理以及接種密度等對誘導(dǎo)成功率都有一定影響材料的選取:選擇花藥時,一般要通過來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。確定花粉發(fā)育時期的最常用的方法是。但是,某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色,需采用,這種方法能將染成材料的消毒花蕾用浸泡大約30秒,無菌水沖洗,然后放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為溶液中2-4min.接種和培養(yǎng):滅菌后的花蕾,要在無菌條件下除去和,并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。在剝離花藥時

11、,要(否則接種后容易從受傷部位長生愈傷組織),同時還要,因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成,通常每瓶接種花藥710個,培養(yǎng)溫度控制在25C左右,不需要.幼小植株形成后才需要.一般經(jīng)過2030天培養(yǎng)后,會發(fā)現(xiàn)花藥開裂,長出愈傷組織或形成胚狀體。將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上,以便進(jìn)一步分化出再生植株。如果花藥開裂釋放出胚狀體,則一個花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株,必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開,分別移植到新的培養(yǎng)基上,否則這些植株將很難分開。還需要對培養(yǎng)出來的植株做進(jìn)一步的鑒定和篩選。植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的相同之處是:培養(yǎng)基配制方法、無菌技術(shù)及接種操作等基本相同。兩者的

12、不同之處在于:花藥培養(yǎng)的選材非常重要,需事先摸索時期適宜的花蕾;花藥裂開后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時更換培養(yǎng)基;花藥培養(yǎng)對培養(yǎng)基配方的要求更為嚴(yán)格。這些都使花藥培養(yǎng)的難度大為增加。試題:2、下圖所示胡蘿卜的韌皮部細(xì)胞通過無菌操作,接入試管后,在一定的條件下,形成試管苗的培育過程,請據(jù)圖回答下列問題:韌皮部韌皮部/細(xì)胞 上一培養(yǎng)基(1)要促進(jìn)細(xì)胞分裂生長,培養(yǎng)基中應(yīng)有營養(yǎng)物質(zhì)和激素。營養(yǎng)物質(zhì)包括和小分子有機(jī)物,激素包括細(xì)胞分裂素和兩類植物激素。(2)此過程依據(jù)的原理是。A和B階段主要進(jìn)行的分裂方式是,B階段除了細(xì)胞分裂外,還進(jìn)行細(xì)胞等。(3)此過程要無菌操作,主要是指對進(jìn)行滅菌消毒,B階段

13、需要光照,原因是。(4)試管苗的根細(xì)胞沒有葉綠素,而葉的葉肉細(xì)胞具有葉綠素,這是基因的結(jié)果。3、科學(xué)家將分離得到的成熟的胡蘿卜韌皮部細(xì)胞進(jìn)行如下處理,最終由單個細(xì)胞發(fā)育成了完整的新植株。請回答胡蘿卜植物根的韌皮部細(xì)胞傷產(chǎn)E試管幼苗一DJ(i)科學(xué)家所用的這種生物技術(shù)叫做。該技物細(xì)胞處于離體狀態(tài)時,在一定的營養(yǎng)物質(zhì)、和其他外界條件的作用下,可能表現(xiàn)出,發(fā)育成完整植株。(2)圖中B過程稱為。通過B過程產(chǎn)生的愈傷組織細(xì)胞與根韌皮部細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)(相同/不同),其本原因是。(3)某課外小組同學(xué)用愈傷組織同時進(jìn)行了兩組實(shí)驗(yàn):甲組培養(yǎng)基中含3%勺蔗糖,乙組培養(yǎng)基中不含蔗糖,經(jīng)滅菌后接種,每組實(shí)驗(yàn)再分成兩個小

14、組,分別在光下和暗處培養(yǎng)。1個月后,觀察植物體生長、分化情況,結(jié)果如下表:培養(yǎng)條件甲組乙組光下正常生長,分化不生長,死亡暗處正常生長,不分化不生長,死亡由此得出的結(jié)論是:,4、(2008年海南高考)某二倍體植物是雜合體,下圖為其花藥中未成熟花粉在適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng)產(chǎn)生完整植株的過程。請據(jù)圖回答:(1)圖中表示的是該花粉培養(yǎng)過程中的過程,表示的是過程,X代表的是,表示的是過程,表示的是誘導(dǎo)過程。(2)圖中從愈傷組織形成完整植株的途徑有兩條,具體通過哪一條途徑主要取決于培養(yǎng)基成分中的種類及其濃度配比,最后獲得的來源于未成熟花粉的完整植株都稱為植株(甲)。未成熟花粉經(jīng)培養(yǎng)能形成完整植株,說明未成熟花

15、粉具有。(3)對植株甲進(jìn)行,才能使其結(jié)實(shí)產(chǎn)生后代(乙),否則植株甲只有通過的方式才能產(chǎn)生后代(丙)。乙、丙兩種植株中,能產(chǎn)生可育花粉的是植株,該植株群體中每一植株產(chǎn)生可育花粉的基因組成種類數(shù)為種,該群體植株產(chǎn)生可育花粉白基因組成種類數(shù)為種。花藥培養(yǎng)在育種上的特殊意義是,從而開辟育種新途徑。5、(2010課標(biāo)全國卷,38)請回答:(1)植物微型繁殖技術(shù)屬于植物組織培養(yǎng)的范疇。該技術(shù)可以保持品種的,繁殖種苗的速度。離體的葉肉細(xì)胞在適宜的條件下培養(yǎng),最終能夠形成完整的植株,說明該葉肉細(xì)胞具有該植物的全部。(2)把試管苗轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)基上時,需要在超凈工作臺上進(jìn)行,其原因是避免的污染。(3)微型繁殖過

16、程中,適宜濃度的生長素單獨(dú)使用可誘導(dǎo)試管苗,而與配比適宜時可促進(jìn)芽的增單株鮮重Ymg光合作用強(qiáng)度殖。若要抑制試管苗的生長,促進(jìn)愈傷組織產(chǎn)生和生長,需要使用的生長調(diào)節(jié)劑是(脫落酸、2,4D)。單株鮮重Ymg光合作用強(qiáng)度(4)將某植物試管苗培養(yǎng)在含不同濃度蔗糖的培養(yǎng)基上一段時間后,單株鮮重和光合作用強(qiáng)度的變化如圖。據(jù)圖分析,隨著培養(yǎng)基中蔗糖濃度的增加,光合作用強(qiáng)度的變化趨勢是,單株鮮重的變化趨勢是。據(jù)圖判斷,培養(yǎng)基中不含蔗糖時,試管苗光合作用產(chǎn)生的有機(jī)物的量(能、不能)滿足自身最佳生長的需要。據(jù)圖推測,若要在誘導(dǎo)試管苗生根的過程中提高其光合作用能力,應(yīng)(降低,增加)培養(yǎng)基中蔗糖濃度,以便提高試管苗

17、的自養(yǎng)能力。6.去年我國某地由于柑橘大實(shí)蠅的危害,使橘農(nóng)遭受到了很大的損失,當(dāng)?shù)卣氡M一切辦法幫助橘農(nóng)盡量減少損失。(1)有人想提取橘皮精油獲取利潤,一般提取橘皮精油的方法是法,之所以不采取水蒸氣蒸儲法,是因?yàn)樗姓魞?dǎo)致原料和有效成分等問題。(2)某橘農(nóng)發(fā)現(xiàn)自家有一株橘樹具有抗蟲性狀,欲利用組織培養(yǎng)技術(shù)大量繁殖,該技術(shù)應(yīng)先將離體的柑橘組織或細(xì)胞培養(yǎng)一段時間,會通過分裂方式形成愈傷組織,此過程稱之為,然后繼續(xù)培養(yǎng),又可以重新長成根或芽等器官,這一過程稱之為。(3)組織培養(yǎng)的選材非常關(guān)鍵,植物材料的選擇直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。若用花藥進(jìn)行離體培養(yǎng),則應(yīng)選擇花粉發(fā)育至期的花藥培養(yǎng)成功率最高。確定

18、花粉發(fā)育時期最常用的方法有法,某些植物的花粉不易著色,需采用法。產(chǎn)生花粉植株一般有兩種途徑;一種是花粉通過階段發(fā)育為植株;另一種是花粉在培養(yǎng)基上先形成愈傷組織,再分化成植株。(4)影響植物組織培養(yǎng)的因素很多,其中最關(guān)鍵的激素有和。請解釋橘樹上的細(xì)胞若不離體便不能長成完整植株的根本原因:。7.(2010東莞質(zhì)檢)下圖是月季花藥離體培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑,請據(jù)圖回答有關(guān)問題:誘逆生,移根 栽花藥店南花粉卜脫純胚狀本|陰礪一花藥得花粉I遜獨(dú)|誘逆生,移根 栽(1)選用的材料合適與否是成功誘導(dǎo)出花粉植株的重要因素,一般來說選用期的花粉可提高成功率。選擇花粉時,一般要通過來確定花粉是否處于合適的發(fā)育

19、期,這時需要對花粉的細(xì)胞核進(jìn)行染色,常用的染色劑是。(2)上圖中花藥經(jīng)脫分化產(chǎn)生胚狀體還是愈傷組織主要取決于培養(yǎng)基中。(3)胚狀體與愈傷組織在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別在于愈傷組織的細(xì)胞排列疏松無規(guī)則,是一種高度的薄壁細(xì)胞,胚狀體與發(fā)育形成的胚有類似的結(jié)構(gòu),即具有胚芽、胚軸和胚根。(4)無菌技術(shù)也是成功誘導(dǎo)出花粉植株的重要因素,請說明下列各項(xiàng)需要消毒,還是需要滅菌。培養(yǎng)基,培養(yǎng)皿,接種環(huán),花蕾,實(shí)驗(yàn)操作者的雙手,三角錐形瓶。(填編號)需要滅菌,(填編號)需要消毒。(5)試管苗移栽到土壤前,通常要進(jìn)行壯苗處理,應(yīng)如何壯苗?試題答案:1(1)AaBbAbAbaBaB(或者ABABabab”)(2)花粉管細(xì)胞

20、核生殖細(xì)胞核相同(3)5(4)單核靠邊(2分)醋酸洋紅(2分)焙花青-銘磯【解析】略2(1)無機(jī)物生長素(2)細(xì)胞的全能性有絲分裂分化(3)培養(yǎng)基芽發(fā)育成葉,葉肉細(xì)胞中葉綠素的合成需要光照條件(3)培養(yǎng)基芽發(fā)育成葉,葉肉細(xì)胞中葉綠素的合成需要光照條件(4)選擇性表達(dá)3(1)(植物)組織培養(yǎng) 長、分化過程需要蔗糖(植物)激素 全能性 (2)脫分化光能夠促進(jìn)細(xì)胞分化不同基因的選擇性表達(dá)(3)愈傷組織生4(1)脫分化再分化胚狀體分化(或發(fā)育)生根(2)植物激素單倍體細(xì)胞的全能性染色體加倍無性繁殖乙(或經(jīng)過染色體加倍的)一多縮短育種年限5(1)遺傳特性快遺傳信息(2)微生物(3)生根細(xì)胞分裂素2,4-D(4)逐漸下降先增加后下降不

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