液相色譜-基礎(chǔ)課件

1、液相色譜基礎(chǔ)知識(shí)色譜的發(fā)明人俄國(guó)科學(xué)家：M. S. Tswett正式命名“色譜”的文獻(xiàn)一、色譜起源石油醚碳酸鈣顆粒色素玻璃柱經(jīng)典液相色譜色譜法簡(jiǎn)介色譜法（Chromatography）溯源俄國(guó)科學(xué)家1903年發(fā)現(xiàn)色譜的吸附原理，開創(chuàng)了應(yīng)用吸附原理分離植物色素的新方法并見諸于俄文的文獻(xiàn)1906年正式命名（見諸文獻(xiàn)）色譜法；Chromatography50年代開始廣泛研究和應(yīng)用主要是氣相色譜及薄層色譜高效液相色譜法的廣泛應(yīng)用始于70年代色譜分離的機(jī)理色譜是一種分離技術(shù)色譜分離是一個(gè)物理過程流動(dòng)相（Mobile Phase）固定相（Stationary Phase）樣品（溶解于流動(dòng)相中的溶質(zhì)）液相色

2、譜分離機(jī)理 高效液相色譜是一種以液體作流動(dòng)相和固體微粒作固定相，待測(cè)組分在柱內(nèi)的兩相之間進(jìn)行高速分配和高效分離的柱液體色譜方法。 樣品溶液中的各組分，因其物理化學(xué)性質(zhì)的微小差異，當(dāng)其隨流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱后，便在柱的兩相之間產(chǎn)生不同的相互作用力，從而導(dǎo)致柱上遷移速率的微小差異。 隨著流動(dòng)相的連續(xù)推移，這種微小的差異被不斷擴(kuò)大，直至柱內(nèi)出現(xiàn)明顯不同的遷移距離，使最終達(dá)到組分完全分離。什么是液相色譜氣相色譜：流動(dòng)相是氣相液相色譜：流動(dòng)相是液相HPLC的儀器配置色譜泵（主機(jī)）自動(dòng)進(jìn)樣器色譜柱及柱溫箱檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)溶劑 流動(dòng)相高效液相色譜基本概念 色譜峰或色譜譜帶 基線噪音 基線漂移 檢測(cè)限（敏感度）

3、 色譜峰對(duì)稱性 色譜定性參數(shù) 色譜柱效能參數(shù)液相色譜圖相關(guān)術(shù)語色譜峰 Peak色譜柱流出組分通過檢測(cè)器時(shí)產(chǎn)生的響應(yīng)信號(hào)的微分曲線峰底 Peak Base峰的起點(diǎn)與終點(diǎn)之間連接的直線峰高 Peak Height峰最大值到峰底的距離峰寬 Peak Width在峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作切線與峰底相交兩點(diǎn)之間的距離半（高）峰寬 Peak Width at Half Height通過峰高的中點(diǎn)作平行于峰底的直線，其與峰兩側(cè)相交兩點(diǎn)之間的距離液相色譜實(shí)驗(yàn)所需的基本參數(shù)液相色譜實(shí)驗(yàn)所需的基本參數(shù)流動(dòng)相：種類及配比，等度或梯度固定相：色譜柱類型及內(nèi)徑、粒徑、長(zhǎng)短流動(dòng)相流速檢測(cè)器參數(shù)：紫外檢測(cè)波長(zhǎng)或其他檢測(cè)器相應(yīng)參數(shù)柱

4、溫度進(jìn)樣量以上參數(shù)即構(gòu)成一個(gè)具體的HPLC方法， 亦稱色譜條件色譜圖：HPLC圖形結(jié)果（Chromatogram）色譜圖即色譜柱流出物通過檢測(cè)器時(shí)所產(chǎn)生的響應(yīng)信號(hào)對(duì)時(shí)間的曲線圖，其縱坐標(biāo)為信號(hào)強(qiáng)度，橫坐標(biāo)為保留時(shí)間。 色譜峰保留時(shí)間（分）基線峰高峰寬響應(yīng)值色譜峰或色譜譜帶流出曲線上的突起部分稱為色譜峰正常色譜峰為對(duì)稱形正態(tài)分布曲線不對(duì)稱色譜峰有兩種：前延峰和拖尾峰色譜流出曲線圖及相關(guān)參數(shù) 樣品進(jìn)入色譜柱，經(jīng)流動(dòng)相沖洗，由檢測(cè)器測(cè)得的信號(hào)-洗脫時(shí)間曲線，即色譜圖。對(duì)稱因子計(jì)算示意圖 色譜峰的對(duì)稱性對(duì)稱因子： a. 拖尾因子 b. 不對(duì)稱因子峰對(duì)稱因子計(jì)算公式對(duì)稱因子(fs)：式中： fs=0.951.05為正常峰 fs0.95為前延峰 fs1.05為拖尾峰色譜柱效能參數(shù)計(jì)算示意圖色譜柱的柱效 N理論塔板數(shù)計(jì)算公式：Ws 方法Wtan16切線法Wh5.54半峰高W3s9 3sW4s16 4sW5s25 5s理論板數(shù)(n)計(jì)算公式或（通常用）： 若應(yīng)用調(diào)整保留時(shí)間 tR計(jì)算理論塔板數(shù)，所得值稱為有效理論塔板數(shù)( n有效或 neff )分離度(R）計(jì)算方法示意圖高效液相譜分離的基本方程式 影響