《動物的克隆》課件

1、第三節(jié) 動物的克隆機械消化或者胰酶消化一、動物細胞、組織培養(yǎng)1、什么方法取得離體的單個動物細胞？2、離體的動物細胞能否正常的生活、表現(xiàn)出正常的生命活動？（胰蛋白酶）（1）貼壁生長： 懸浮液中分散的細胞緊貼培養(yǎng)瓶內(nèi)壁才能生長。（2）接觸抑制： 當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂。（3）正常的生命活動： 生長、分裂、有規(guī)律的衰老、死亡等現(xiàn)象。2、適宜的環(huán)境條件無菌、無毒環(huán)境：加抗生素，定期更換培養(yǎng)液適宜的溫度和pH值：（如人體細胞培養(yǎng)） 溫度：36.50.5 pH值：7.2-7.4適宜的氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）（一）培養(yǎng)條件 三、動物細胞培養(yǎng)過程成分：無機

2、鹽、葡萄糖、氨基酸、維生素和動物血清等1、含全部營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)液原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)原代培養(yǎng)物細胞系：可連續(xù)傳代的細胞 原代培養(yǎng)物在首次傳代時就成為細胞系。能連續(xù)培養(yǎng)的 連續(xù)細胞系不能連續(xù)培養(yǎng)的 有限細胞系四、細胞系、細胞株 （二倍體細胞） （異倍體核型細胞） （1）惡性細胞系，異體致瘤性 （2）保留接觸抑制，不致癌（遺傳物質(zhì)改變，不死性）2、細胞株： 通過一定的選擇或純化方法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)的細胞系。 如：單抗細胞株 細胞株一般具有恒定的染色體組型、同工酶類型、病毒敏感性和生化特性等。遺傳物質(zhì)未改變。連續(xù)細胞株：可連續(xù)多次傳代的細胞株。有限細胞株：傳代次數(shù)有限的細胞株細

3、胞系：泛指可傳代的細胞。細胞株: 具有特殊性質(zhì)的細胞系。五、克隆培養(yǎng)法（細胞克?。?、概念： 把一個單細胞從群體中分離出來單獨培養(yǎng)，使之繁衍成一個新的細胞群體的技術(shù)。2、特點：遺傳性狀均一、表現(xiàn)的性狀相似，便于研究異質(zhì)性細胞系克隆培養(yǎng)純系（克?。?、最基本要求:保證所建成的克隆來源于單個細胞4、適合于克隆的細胞： 對環(huán)境有較大適應(yīng)范圍和具有較強獨立生存能力的細胞5、提高細胞克隆形成率的措施：選擇適宜的培養(yǎng)基添加血清 （胎牛血清） (能促進細胞的生長、增殖和貼附)以滋養(yǎng)細胞支持生長（經(jīng)射線照射的小鼠成纖維細胞）激素刺激（胰島素等）使用CO2培養(yǎng)箱，調(diào)節(jié)PH 群體細胞 單細胞無限細胞系、轉(zhuǎn)化或腫瘤

4、細胞 原代細胞、有限細胞系6、細胞克隆的主要用途： 從普通細胞系中分離出缺乏特殊基因的突變細胞系。 用于研究細胞的遺傳規(guī)律和生理特性。動物免疫分離B淋巴細胞細胞融合淋巴細胞雜交瘤的制備雜交瘤細胞的篩選雜交瘤細胞的克隆單克隆抗體的提取二、單抗的制備過程單克隆抗體篩選雜交細胞雜交瘤細胞體外或體內(nèi)細胞培養(yǎng)篩選骨髓瘤細胞誘導(dǎo)細胞融合特異性雜交瘤細胞雜交瘤細胞系提取經(jīng)過免疫的B淋巴細胞動物細胞融合技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗體的制備過程：特點：既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁殖特點：特異性強靈敏度高可大量制備注射抗原免疫二、動物難以克隆的根本原因：基因表達的調(diào)控使得細胞中合成了專一的蛋白質(zhì)。一類基因是維持生存

5、的，在各種細胞中都處于活動狀態(tài)（如呼吸氧化酶基因等）；另一類基因隨著組織器官和發(fā)育階段不同而選擇性表達（如胰島素基因、血紅蛋白基因等）。研究表明，各種特化細胞的細胞核中物種基因組完整，具有全能性。但是分化后的動物細胞基因組基因的活動不完全三、核移植和動物的克隆繁殖去 核注 核重組細胞1、核移植： 利用一個細胞的細胞核（供體核）,來取代另一細胞中的細胞核，形成一個重建的“合子”（重組細胞），使發(fā)育成一個新的個體。胚胎細胞核移植成功率遠高于成體細胞核移植。 胚胎細胞克?。菏褂玫墓w核來自胚胎 體細胞克隆：使用的供體核來自體細胞1952年，羅伯特.布里格斯： 豹蛙 囊胚細胞核+去核的卵母細胞 發(fā)育成

6、個體1978年，童第周： 黑斑蛙成體紅細胞核去核的卵細胞中發(fā)育成蝌蚪2、動物克隆繁殖：1.閱讀課本P39-37，找出體細胞羊的克隆成功的證明了什么？克隆羊成功的部分原因克隆動植物的應(yīng)用2.在體細胞核移植過程中選擇卵細胞作為受體細胞的原因：卵細胞大易操作，細胞質(zhì)中缺少阻止核基因表達的調(diào)節(jié)蛋白2.在體細胞核移植過程中選擇卵細胞作為受體細胞的原因：細胞質(zhì)中具有有效調(diào)控細胞核發(fā)育的蛋白因子，卵細胞大易操作，營養(yǎng)豐富體細胞克隆羊的培育成功，證明了什么？ 高度分化細胞經(jīng)一定技術(shù)處理，也可回復(fù)到類似受精卵時期的功能。在胚胎和個體發(fā)育中，細胞質(zhì)具有調(diào)控細胞核（包括異源的細胞核）發(fā)育的作用。 同時也證明了動物的

7、細胞核具有全能性體細胞克隆羊成功的分子細胞生物學(xué)機理：1、核移植前對乳腺細胞的營養(yǎng)限制性培養(yǎng)（調(diào)節(jié)牛血清濃度）和電脈沖細胞融合技術(shù)，有利于核的變化和細胞融合后基因表達分子開關(guān)啟動。2、重組卵細胞最初分裂時，轉(zhuǎn)錄并未開始。3、重組卵細胞的供體核DNA丟失了來源于乳腺細胞的阻止核基因表達的調(diào)節(jié)蛋白。4、開始第三次分裂時，原乳腺細胞的調(diào)節(jié)蛋白全部被卵細胞質(zhì)中的蛋白因子替換了，核DNA被重新編排，胚細胞開始表達自己的基因。動物克隆的應(yīng)用：（1）有利于遺傳疾病的治療，優(yōu)良品種的培育（2）對物種的優(yōu)化、瀕危動物的保護和轉(zhuǎn)基因動物的擴群有重要意義（3）豐富人們的物質(zhì)生活，降低畜牧業(yè)的成本，縮短育種年限，提高

8、生產(chǎn)效率在體細胞核移植過程中選擇卵細胞作為受體細胞的原因：細胞質(zhì)中具有有效調(diào)控細胞核發(fā)育的蛋白因子，卵細胞大易操作，營養(yǎng)豐富體細胞核移植技術(shù)存在的問題： 許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。3、動物克隆成功的條件： （1）具有包含本物種完整基因組的細胞核的活細胞 如：乳腺上皮細胞；（2）能有效調(diào)控細胞核發(fā)育的細胞質(zhì)物質(zhì) 如：去核卵的細胞質(zhì)；（3）完成胚胎發(fā)育的必要的環(huán)境條件 如：誘導(dǎo)重組細胞生長、分化的實驗條件和懷胎母體的子宮環(huán)境1、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞 （ ）

9、A、容易產(chǎn)生各種變異 B、具有更強的全能性 C、取材十分方便 D、分裂增殖的能力強D2、下列為有關(guān)動物細胞培養(yǎng)的敘述，其中不正確的是A用于培養(yǎng)的細胞大都取自胚胎或幼齡動物的器官或組織B將所取的組織先用胰蛋白酶等進行處理使其分散成單個細胞C在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液D動物細胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培養(yǎng)的細胞全部衰老死亡 D2、用動、植物成體的體細胞進行離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是A都需用CO2培養(yǎng)箱 B都須用液體培養(yǎng)基 C都要在無菌條件下進行 D都可體現(xiàn)細胞的全能性3、動物細胞克隆是指 A一個單細胞培養(yǎng)成一個新的細胞群的技術(shù) B一個重組細胞經(jīng)分裂、分化發(fā)育成一個動物

10、個體的技術(shù) C幾個同種動物的細胞培養(yǎng)成一個新的細胞群的技術(shù) D一個卵裂球經(jīng)胚胎分割發(fā)育成四個細胞群的技術(shù)CA4、某研究小組為測定藥物對體外培養(yǎng)細胞的毒性，準備對某種動物的肝腫瘤細胞(甲)和正常肝細胞(乙)進行動物細胞培養(yǎng)。下列說法正確的是 ()A.在利用兩種肝組織塊制備肝細胞懸液時，也可用胃蛋白酶處理B.細胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進行，CO2的作用是刺激細胞的呼吸C.甲、乙細胞在持續(xù)的原代培養(yǎng)過程中，乙會出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象D.僅用該培養(yǎng)液也能用來培養(yǎng)乙肝病毒C5.下列關(guān)于動物細胞培養(yǎng)的敘述，正確的是 ()A.培養(yǎng)中的人效應(yīng)T細胞能產(chǎn)生單克隆抗體B.培養(yǎng)中的人B細胞能夠無限地增殖C.

11、人的成熟紅細胞經(jīng)過培養(yǎng)能形成細胞株D.用胰蛋白酶處理肝組織可獲得單個肝細胞D世界上第一只克隆綿羊“多莉”的培育等程序如圖所示。請仔細看圖后回答問題：b圖中 過程為 。通過過程形成的重組細胞核遺傳物質(zhì)與質(zhì)遺傳物質(zhì)各來自哪里？實施時，所需的受體細胞大多采用動物卵細胞的原因是： 。b過程細胞分裂的方式是 ，此過程是否進行細胞分化？ （答“有”或“無”）圖中c所指過程為 ，圖中d指的是克隆綿羊“多莉”經(jīng)過在母體子宮內(nèi) 后 。 “多莉”面部的毛色和性別與 綿羊相同，請根據(jù)遺傳學(xué)原理說明判斷依據(jù)： 。若不考慮環(huán)境因素影響，多莉的性狀是否全部像以上綿羊？為什么？（7）植物組織培養(yǎng)之后，克隆綿羊培育成功，證明動物 。黑面綿羊去核卵細胞白面綿羊卵腺細胞核重組細胞早期胚胎另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉abcd細胞核移植具有調(diào)控細胞核發(fā)育的細胞質(zhì)物質(zhì) 有絲分裂有胚胎移植妊娠出生白面“多莉”綿羊的核基因和性染色體全部來自白面綿羊細胞核也具有全能性卵細胞細胞質(zhì)的遺傳物質(zhì)也能控制某些性狀6、若不考慮環(huán)境因素影響，克隆羊的性狀全部像白面綿羊嗎？原因是？ 右圖技術(shù)具有多種用途，但是不能（ ）A.有選擇地繁殖某一性別的家畜B.繁殖家畜中的優(yōu)良個體C.用于保存物種D.改變動物的核基因 在現(xiàn)有技術(shù)條件下，還不能將從動物體內(nèi)分離出來的成熟的體細胞直接培養(yǎng)成一個新個體，