臨床本科-第九章-常用病原體檢測(cè)

1、第九章常用病原體檢測(cè)第一節(jié) 標(biāo)本采集運(yùn)送原則：無(wú)菌操作、防止污染。不接觸消毒劑和抗菌藥、立即送檢。 1、血液標(biāo)本在病人發(fā)熱初期、高峰期間采集，且在應(yīng)用抗菌藥前。懷疑敗血癥、毒血癥、膿毒血癥，在發(fā)熱期間24小時(shí)內(nèi)多部位多量采血雙部位采血培養(yǎng)兩瓶陰性兩瓶均陽(yáng)性單瓶陽(yáng)性陰性報(bào)告細(xì)菌鑒定/藥敏實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性報(bào)告重新雙部位采血培養(yǎng)兩瓶陰性單瓶陽(yáng)性兩瓶均陽(yáng)性兩次培養(yǎng)為不同細(xì)菌污染兩次培養(yǎng)為相同細(xì)菌細(xì)菌鑒定/藥敏實(shí)驗(yàn)重新雙部位采血培養(yǎng)陽(yáng)性報(bào)告2、尿液標(biāo)本 雜菌多，要求晨起中段尿或?qū)蚬軣o(wú)菌操作。 3、呼吸道標(biāo)本 痰液和鼻咽拭子均要求晨起清水漱口后采集4、糞便標(biāo)本 取粘液膿血部位送檢，懷疑2號(hào)病用堿性蛋白胨保養(yǎng)送檢

2、。5、腦脊液應(yīng)及時(shí)送檢或床邊接種，同時(shí)做血培養(yǎng)。體腔積液，采量多，做血培養(yǎng)。6、泌尿生殖系標(biāo)本 在無(wú)菌操作下采樣7、創(chuàng)傷、組織、膿腫標(biāo)本 注意防止皮膚表面污染菌混入，膿腫可穿刺采樣。二、常用檢查方法1、直接顯微鏡檢查 標(biāo)本直接或離心濃縮沉淀后涂片染色用顯微鏡觀察形態(tài) 2、抗原抗體檢測(cè) 見免疫學(xué)檢查3、核酸檢查（PCR、基因芯片）4、細(xì)菌分離培養(yǎng) 依據(jù)可疑細(xì)菌培養(yǎng)特性，在一定的溫度、濕度、PH、需氧或厭氧等環(huán)境下用合適的培養(yǎng)基進(jìn)行 培養(yǎng)或分離培養(yǎng)，根據(jù)菌落形態(tài)、生化反應(yīng)、染色作出鑒定，有時(shí)進(jìn)一步做藥物敏感試驗(yàn)第二節(jié) 病原體耐藥性檢測(cè)耐藥機(jī)制（略）藥敏試驗(yàn) 藥敏試驗(yàn)是測(cè)定抗生素在體外抑制細(xì)菌生長(zhǎng)能

3、力的試驗(yàn)，目的是選擇最佳抗生素便于治療 將含有定量藥物的幾張紙片貼在接種測(cè)試菌的瓊脂平板上孵育，根據(jù)抑菌圈大小判定是否敏感或耐藥。1、KB紙片瓊脂擴(kuò)散法 注意事項(xiàng) ：藥敏結(jié)果為臨床提供參考意見， “敏感”或“中度敏感” 、“耐藥” 選擇？藥敏試驗(yàn)須先進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)、分離純化，時(shí)間長(zhǎng)。醫(yī)生可先試用一些藥，二、耐藥菌監(jiān)測(cè)試驗(yàn) 耐甲氧西林金葡菌MRSA、耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌MRSCoN是目前院內(nèi)感染的重要病原菌。早期進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。PCR檢測(cè)耐藥基因 第四節(jié) 病毒性肝炎血清學(xué)標(biāo)志檢測(cè) 病毒性肝炎有7型：HAV HBV HCV HDV HEV HGV TTV甲、丙、丁、戊四型肝炎均會(huì)產(chǎn)生特異抗體，

4、IgM型抗體陽(yáng)性示急性感染或病毒在復(fù)制；IgG型抗體陽(yáng)性示繼往感染，傳染性降低。抗HAVIgG屬保護(hù)性抗體，可終生陽(yáng)性。抗HCV：輸血后肝炎抗HDV檢測(cè)須依賴乙肝病毒存在戊肝抗體檢查乙肝血清學(xué)標(biāo)志 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb HBcAb即“二對(duì)半” HBsAg（+）示急慢性乙肝或攜帶者，具有傳染性（但僅為病毒衣殼引起則無(wú)傳染性）。HBsAb（+）示繼往感染，現(xiàn)已恢復(fù)。HBsAb屬保護(hù)性抗體 有中和作用。HBeAg（+）示病毒在復(fù)制，有強(qiáng)傳染性。且可胎傳。HBeAb（+）示病毒復(fù)制減少，傳染性降低。一般認(rèn)為HBeAb無(wú)保護(hù)性。HBcAb（+）示病毒感染且復(fù)制，具有傳染性（特別

5、是IgM陽(yáng)性）。HBcAb無(wú)保護(hù)性。 “大三陽(yáng)”即HBsAg（+）HBeAg（+）HBcAb（+），“小三陽(yáng)”即HBsAg（+）HBeAb（+）HBcAb（+）。乙肝標(biāo)志在不同病程中呈現(xiàn)不同的變化?？乖庌D(zhuǎn)、表面抗體陽(yáng)性示為好現(xiàn)象。 HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-Hbe 抗-HBc 臨床意義 過(guò)去和現(xiàn)在均未感染HBV + 曾感染HBV，急性感染恢復(fù)期 + + 同上 + HBV感染已康復(fù) + + + 既往感染，急性HBV感染恢復(fù)期 + 同上 + + 急性HBV感染，慢性攜帶者 + + + 急性HBV感染，趨向恢復(fù) + + + 急性或慢性乙肝，傳染性強(qiáng) + 急性HBV感染早期 + 急性H

6、BV感染早期 + + 同上 + + + 急性感染中期 + + + + 急性感染趨向恢復(fù) + + 同上 + 同上 + + HBV感染已恢復(fù)第五節(jié) STD病原體檢測(cè) P437/458病原體：衣原體、支原體、梅毒螺旋體、 淋球菌、HIV、HPV、真菌、原蟲WHO列入20余種（含病毒性肝炎）我國(guó)列入的STD有8種：梅毒、淋病、艾滋病、生殖器皰疹、非淋菌性尿道炎、尖銳濕疣、軟下疳、性病性肉芽腫、1、艾滋病 AIDS定義：病死率高目前無(wú)特效藥，無(wú)預(yù)防疫苗 25HIV檢測(cè)：病毒標(biāo)志檢測(cè)：分離病毒組分免疫標(biāo)志檢測(cè)：抗HIV-1.2、P24非特異性檢測(cè)：CD4、T細(xì)胞亞群2627初篩（ELISA、IFA、RIA

7、） 確證：免疫印跡試驗(yàn),至少同時(shí)測(cè)兩種抗體(P24、gp120)陽(yáng)性,方可判斷HIV感染HIV抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 強(qiáng)陽(yáng) 弱陽(yáng) 陰性gp160gp120 p66 p55 p51 gp41p39 p31P24p17 血清對(duì)照HIV-2特異帶典型的HIV-2血清陽(yáng)性反應(yīng) 初篩檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本兩種初篩試劑陰性報(bào)告陰性報(bào)告陰性反應(yīng)一陰一陽(yáng)陽(yáng)性反應(yīng)免疫印跡法WB-1/2混合型復(fù)核報(bào)告HIV-2血清學(xué)陽(yáng)性反應(yīng),必要時(shí)測(cè)核酸陰性反應(yīng)可疑反應(yīng)HIV-2 陽(yáng)性反應(yīng)免疫印跡法WB-2陰性報(bào)告出現(xiàn)gp36陰性反應(yīng)可疑反應(yīng)HIV-1 陽(yáng)性報(bào)告HIV-1 陽(yáng)性反應(yīng)每三個(gè)月隨訪一次，共兩次，仍屬可疑，判為陰性HIV抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)流程圖2、梅毒 病原體為螺旋體，傳播途徑也是性接觸、血液、母嬰。血清學(xué)檢查 有RPR、USR、TRUST、TPPA等。陽(yáng)性為梅毒感染，須用TPPA或暗視野螺旋體檢查進(jìn)行確定 3、淋病 病原體為G-雙球菌，傳播途徑為性接觸和胎傳。直接涂片或厭氧分離培養(yǎng)找到G- 雙球菌可確診為淋病PCR快速特異 第十章 其它檢測(cè)包括基因診斷、流式細(xì)胞術(shù)、染色體檢查基因診斷定義 以DNA、RNA為原料，檢查目標(biāo)基因的存在、缺陷或表達(dá)異常，對(duì)人體狀態(tài)和疾病作出診斷 常用技術(shù)有： 核酸分子雜交、PCR、限制性片段長(zhǎng)度多肽性分析、DNA測(cè)序等 應(yīng)用范