癲癇清顆粒改善AD模型小鼠血腦屏障損傷的作用研究

1、PAGE 18 -癲癇清顆粒改善AD模型小鼠血腦屏障損傷的作用研究齊越李昭侯俠黃培池賈冬楊彩瑜董笑博房小楠明彩榮中圖分類號R965文獻標志碼A文章編號1001-0408（2022）09-1062-06DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2022.09.07摘要目的研究癲癇清顆粒通過調(diào)控核苷酸結合域樣受體蛋白3（NLRP3）炎癥小體信號通路對阿爾茨海默?。ˋD）模型小鼠血腦屏障（BBB）損傷的改善作用。方法將125只小鼠按體質(zhì)量隨機分為假手術組（n=25）和造模組（n=100）。造模組小鼠采用側(cè)腦室注射-淀粉樣蛋白2535的方法復制AD模型;假手術組小鼠同法注射生理鹽水。選取

2、造模成功的100只小鼠，按體質(zhì)量隨機分為模型組、鹽酸多奈哌齊片組（陽性對照1，1.3mg/kg，灌胃給藥）、MCC950組陽性對照2（選擇性NLRP3抑制劑），10mg/kg，腹腔注射給藥和癲癇清顆粒組（以生藥總量計12.48g/kg，灌胃給藥），每組25只。造模后第2天，各給藥組小鼠給予相應藥物，每天1次，連續(xù)21d;假手術組和模型組小鼠灌胃水并腹腔注射生理鹽水。末次給藥后，采用Y迷宮實驗檢測小鼠的學習記憶能力，采用伊文思藍滲漏實驗測定小鼠BBB通透性;檢測小鼠腦組織中NLRP3、離子鈣接頭蛋白（IBA-1）、核轉(zhuǎn)錄因子B（NF-B）p65、p53上調(diào)凋亡調(diào)控因子（PUMA）、咬合蛋白（oc

3、ln）、閉鎖小帶蛋白1（ZO-1）、緊密連接蛋白5（cldn5）的表達水平。結果與模型組比較，各給藥組小鼠的自發(fā)交替反應率和腦組織中ocln、cldn5、ZO-1蛋白表達水平均顯著升高（P0.05或P0.01），腦組織內(nèi)的伊文思藍含量及NLRP3、IBA-1、PUMA、NF-Bp65蛋白表達水平均顯著降低（P0.05或P0.01）。結論癲癇清顆粒可通過抑制NLRP3炎癥小體信號通路起到改善AD模型小鼠BBB損傷的作用。關鍵詞癲癇清顆粒;阿爾茨海默病;血腦屏障;核苷酸結合域樣受體蛋白3炎癥小體;緊密連接蛋白ImprovementeffectsofDianxianqinggranuleonbloo

4、d-brainbarrierinjuryinAlzheimersdiseasemodelmiceQIYue1，LIZhao2，HOUXia1，HUANGPeichi1，JIADong3，YANGCaiyu3，DONGXiaobo3，F(xiàn)ANGXiaonan2，MINGCairong3（1.Dept.ofPharmaceuticalTechnology，JiangsuProvincialXuzhouPharmaceuticalVocationalCollege，JiangsuXuzhou221116，China;2.Dept.ofPharmacology，CollegeofPharmacy，She

5、nyangMedicalCollege，Shenyang110031，China;3.Dept.ofPharmacology，theSecondAffiliatedHospitalofLiaoningUniversityofTCM，Shenyang110034，China）ABSTRACTOBJECTIVETostudytheimprovementeffectsofDianxianqinggranuleonblood-brainbarrier（BBB）injuryinAlzheimersdisease（AD）modelmicebyregulatingNLRfamilypyrindomainco

6、ntaining3（NLRP3）inflammasomesignalingpathway.METHODSTotally125micewererandomlydividedintoshamoperationgroup（n=25）andmodelinggroup（n=100）bybodyweight.ADmodelwasinducedbyintracerebroventricularinjectionof-amyloid25-35inmodelgroup.Shamoperationgroupwasgivennormalsalinewithsamemethod.The100modelmicewere

7、randomlydividedintomodelgroup，Donepezilhydrochloridetabletsgroup（positivecontrol1，1.3mg/kg，i.g.），MCC950grouppositivecontrol2（selectiveNLRP3inhibitor），10mg/kg，i.p.andDianxianqinggranulegroup（12.48g/kgbycrudedrug，i.g.）bybodyweight，with25miceineachgroup.Seconddayaftermodeling，administrationgroupsweregi

8、venrelevantmedicine，onceaday，forconsecutive21d.Shamoperationgroupandmodelgroupweregivenintragastricadministrationofwaterandintraperitonealinjectionofnormalsaline.Atlastadministration，thelearningandmemoryabilitywasdeterminedbyYmazetest，andblood-brainbarrierpermeabilitywasmeasuredbyEvansblueleakageass

9、ay.TheexpressionsofNLRP3，anti-ionizedcalcium-bindingadaptermolecule1（IBA-1），nuclearfactorkappaB（NF-B）p65，p53upregulatedmodulatorofapoptosis（PUMA），occludin（ocln），zonulaoccluden-1（ZO-1）andclaudin-5（cldn5）incerebraltissueweredetermined.RESULTSComparedwithmodelgroup，spontaneousalternateresponserate，prot

10、einexpressionsofocln，cldn5andZO-1incerebraltissuewereincreasedsignificantlyinadministrationgroups（P0.05orP0.01）;EvansbluecontentandproteinexpressionsofNLRP3，IBA-1，PUMAandNF-Bp65incerebraltissueweredecreasedsignificantly（P0.05orP0.01）.CONCLUSIONSDianxianqinggranulecanimproveBBBinjuryofADmodelmicebyin

11、hibitingNLRP3inflammasomesignalingpathway.KEYWORDSDianxianqinggranule;Alzheimersdisese;blood-brainbarrier;NLRP3inflammasome;tightjunctionproteins阿爾茨海默?。ˋlzheimersdisease，AD）是一種常見的與年齡相關的神經(jīng)退行性疾病1，主要病理特征為淀粉樣蛋白沉積、Tau蛋白磷酸化以及神經(jīng)元死亡等2。近年來，越來越多的證據(jù)表明，血腦屏障（bloodbrainbarrier，BBB）功能障礙可能是導致AD發(fā)生的病理機制之一3。BBB由腦微血管內(nèi)皮

12、細胞、周細胞、細胞外基質(zhì)和血管周圍的小膠質(zhì)細胞足突組成，對于維持腦穩(wěn)態(tài)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)微環(huán)境有重要作用4。研究發(fā)現(xiàn)，AD患者BBB通透性增加，而炎癥反應是促進BBB損傷的關鍵機制之一5。炎癥小體是機體固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分，主要存在于小膠質(zhì)細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞中，其中核苷酸結合域樣受體蛋白3（NLRfamilypyrindomaincontaining3，NLRP3）是較為常見的炎癥小體，已被認為是潛在的AD炎癥標志物之一6。當腦中小膠質(zhì)細胞被激活后，NLRP3炎癥小體的表達會增加，繼而誘導炎癥因子的產(chǎn)生，導致BBB通透性增強7-8。核轉(zhuǎn)錄因子B（nuclearfactor-kappa

13、B，NF-B）可通過調(diào)節(jié)炎癥因子的轉(zhuǎn)錄，在保持BBB完整性中發(fā)揮著重要作用9。p53上調(diào)凋亡調(diào)控因子（p53upregulatedmodulatorofapoptosis，PUMA）是一種凋亡調(diào)控因子，其可通過增加下游NF-B、NLRP3蛋白的表達，參與腦微血管內(nèi)皮細胞的凋亡過程，誘導BBB損傷10。因此，阻斷或抑制NLRP3表達已成為保持BBB完整性的關鍵11。癲癇清顆粒為專利藥（專利號ZL202210069494），由熟地黃、制何首烏、芍藥（白芍）、石菖蒲、柴胡、郁金、知母等10味中藥組成，主要含芒果苷、芍藥苷和-細辛醚等成分12-14，具有填精益智、開竅豁痰、活血祛瘀的功效，臨床主要用于

14、神情淡漠、寡言少語、反應遲鈍、善忘、終日不語、言辭顛倒、忽笑忽哭、不欲食及舉動異常等的治療。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)癲癇清顆粒干預后，AD模型小鼠的學習記憶能力和腦組織病理改變均有明顯改善，其具體機制與維持BBB完整性有關15。因阻斷或抑制NLRP3炎癥小體對維持BBB完整性有重要作用，故本課題組推測癲癇清顆粒改善BBB功能障礙的作用可能與抑制NLRP3炎癥小體信號通路活化密切相關。鑒于此，本研究在前期研究的基礎上，采用癲癇清顆粒干預AD模型小鼠，觀察其對BBB損傷的改善作用與抑制NLRP3炎癥小體信號通路活化的關聯(lián)性，旨在進一步探討癲癇清顆粒改善AD的潛在作用機制。1材料1.1主要儀器本研究所用

15、的主要儀器有DW-200型腦立體定位儀（成都泰盟科技有限公司），Neofuge13R型酶標儀（美國BioTek公司），ImageQuant350型凝膠成像系統(tǒng)（美國GEHealthcare公司），DMI3000B型光學顯微鏡（德國Leica公司）。1.2主要藥品與試劑本研究所用的主要藥品與試劑有癲癇清顆粒（由遼寧中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院提供，批號20220310，每1g顆粒相當于生藥5.31g），鹽酸多奈哌齊片衛(wèi)材（中國）藥業(yè)有限公司，批號140606A，規(guī)格5mg/片，選擇性NLRP3炎癥小體抑制劑MCC950（美國Selleck公司，批號S780907，純度99.4%），-淀粉樣蛋白2535

16、（-amyloid2535，A2535，美國Sigma公司，批號038M4822V），兔抗咬合蛋白（occludin，ocln）多克隆抗體、兔抗閉鎖小帶蛋白1（zonulaoccluden-1，ZO-1）多克隆抗體、兔抗緊密連接蛋白5（claudin-5，cldn5）多克隆抗體（沈陽萬類生物科技有限公司，批號分別為WL01996、WL03419、WL03731），兔抗NF-Bp65多克隆抗體、兔抗-肌動蛋白（-actin）多克隆抗體（北京博奧森生物技術有限公司，批號分別為bs-0465R、bs-10966R），兔抗PUMA多克隆抗體（英國Abcam公司，批號ab9643），兔抗NLRP3多克隆

17、抗體（美國Proteintech公司，批號1977-1-1-AP），二喹啉甲酸（BCA）蛋白濃度測定試劑盒（上海碧云天生物技術有限公司，批號120229202221），辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二抗（北京中杉金橋生物技術有限公司，批號141987），小鼠離子鈣接頭蛋白1（anti-ionizedcalcium-bindingadaptermolecule1，IBA-1）酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號Ac02061708）;其余試劑均為分析純，水為純凈水。1.3動物本研究所用動物為SPF級ICR雄性小鼠，共125只，體質(zhì)量為2024g

18、，來源于遼寧長生生物技術有限公司，實驗動物生產(chǎn)合格證號為SCXY（遼）2022-0001。小鼠在沈陽醫(yī)學院實驗動物中心進行飼養(yǎng)，環(huán)境溫度控制在2023、空氣相對濕度控制在50%60%。本實驗得到了沈陽醫(yī)學院動物倫理委員會的批準（批準號SYYXY2022082702），實驗操作符合中華人民共和國實驗動物管理條例要求。小鼠于實驗動物中心適應性飼養(yǎng)7d后進行實驗。2方法2.1AD小鼠模型制備小鼠用戊巴比妥鈉（50mg/kg）麻醉后，將其頭部固定在腦立體定位儀上，沿正中線切開頭部皮膚約2cm，尋找囟門位置。以囟門為原點，移動微量進樣器（將微量進樣器向右移動1mm，再向后移動0.5mm），然后垂直進入腦

19、組織（深約3mm），緩慢注射老化的A2535（用無菌生理鹽水稀釋A2535至1mg/mL，37孵育7d老化）3L，彌散5min，縫合消毒16。假手術組小鼠同法注射等體積無菌生理鹽水。術后第2天，采用Y迷宮實驗進行自發(fā)交替反應率的測定。若與假手術組相比，造模組小鼠的自發(fā)交替反應率明顯降低，則視為造模成功17。2.2分組與給藥將125只小鼠按體質(zhì)量隨機分為假手術組（n=25）和造模組（n=100）。造模組小鼠按“2.1”項下操作復制AD模型;假手術組小鼠在相同部位注射等體積無菌生理鹽水，其余步驟與造模組相同。造模組小鼠在手術過程中無死亡，且均造模成功。將造模成功的100只小鼠按體質(zhì)量隨機分為模型組

20、、鹽酸多奈哌齊片組（陽性對照1，1.3mg/kg，灌胃給藥）、MCC950組（陽性對照2，10mg/kg，腹腔注射給藥）和癲癇清顆粒組（以生藥總量計12.48g/kg，灌胃給藥），每組25只。造模后第2天，各給藥組小鼠給予相應藥物（灌胃給藥體積均為20mL/kg，腹腔注射體積為10mL/kg），每日給藥1次，連續(xù)給藥21d。為避免給藥途徑對小鼠精神狀態(tài)的影響，假手術組、模型組小鼠灌胃水20mL/kg，并腹腔注射生理鹽水10mL/kg。癲癇清顆粒組和鹽酸多奈哌齊片組的給藥劑量參考文獻18設置;MCC950組的給藥劑量參考文獻19設置。2.3Y迷宮實驗各組小鼠在第21天灌胃/腹腔注射結束后進行Y迷

21、宮實驗。實驗裝置為自制器材，由3個木質(zhì)支臂組成。實驗時，把小鼠放在支臂的交叉點處，記錄8min內(nèi)小鼠進入支臂的總次數(shù)（N）。連續(xù)進入3個不同支臂記錄為1次正確交替反應，計算自發(fā)交替反應率：自發(fā)交替反應率=正確交替反應次數(shù)/（N-2）100%。2.4伊文思藍滲漏實驗在Y迷宮實驗結束后，各組隨機選取7只小鼠尾靜脈注射伊文思藍溶液（4mL/kg）;3h后，以戊巴比妥鈉（50mg/kg）麻醉小鼠，剪開胸腔，暴露心臟，將輸液器針頭插入左心室，用生理鹽水進行心臟灌流，直至流出液體澄清、透明為止。斷頭取腦，用濾紙拭去腦組織表面液體，稱質(zhì)量，然后放置于3mL甲酰胺內(nèi)，剪碎，45避光水浴72h，離心（4，350

22、0r/min）20min，取上清液。根據(jù)文獻15方法制作標準曲線，并根據(jù)標準曲線計算每克小鼠腦組織內(nèi)伊文思藍的含量（g/g）。2.5腦組織中NLRP3蛋白表達水平測定采用免疫組化法進行測定。在Y迷宮實驗結束后，每組隨機選取6只小鼠，采用戊巴比妥鈉（50mg/kg）麻醉后，以生理鹽水進行心臟灌流。將小鼠處死，取出其腦組織，以4%多聚甲醛固定24h。將組織常規(guī)脫蠟、脫水后，制備5m厚的石蠟切片，脫蠟至水;以3%過氧化氫滅活內(nèi)源性過氧化物酶10min，切片浸入0.01mol/L枸櫞酸鹽溶液（pH6.0）中，以高壓方式加熱至沸騰，然后冷卻至室溫;以5%胎牛血清封閉，37孵育30min;加入NLRP3一

23、抗（稀釋比例1100），4孵育過夜;滴加二抗（稀釋比例13000），37孵育30min;二氨基聯(lián)苯胺顯色后以蘇木素復染;脫水，透明，封片，然后在光學顯微鏡下進行觀察（細胞內(nèi)棕黃色顆粒為NLRP3蛋白陽性表達）。采用JEOA801D形態(tài)學圖像分析系統(tǒng)計算各組小鼠腦組織中陽性細胞的平均光密度值，平均光密度值越大表示NLRP3蛋白表達水平越高。2.6腦組織中IBA-1蛋白表達水平測定采用ELISA法進行測定。在Y迷宮實驗結束后，將每組剩余的12只小鼠用戊巴比妥鈉（50mg/kg）麻醉，處死后分離其腦組織，置于-80下冷凍保存。每組隨機選取7只小鼠的腦組織，按照110（mg/mL）的比例加入磷酸鹽緩沖

24、液，勻漿，以3500r/min離心15min，取上清液，按照試劑盒說明書方法測定腦組織中IBA-1蛋白表達水平。2.7腦組織中PUMA、NF-Bp65、ocln、cldn5、ZO-1蛋白表達水平測定采用Westernblot法進行測定。每組選取“2.6”項下冷凍保存的5只小鼠腦組織，以RIPA裂解液提取組織中總蛋白，以BCA法測定總蛋白濃度。取60g總蛋白進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（電壓180V，電泳時間40min），電轉(zhuǎn)（轉(zhuǎn)膜電流100mA，轉(zhuǎn)膜時間2h）至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上;以含5%TBST緩沖液的脫脂奶粉室溫封閉2h，加入NF-Bp65一抗（稀釋比例1500）、oc

25、ln一抗（稀釋比例1300）、cldn5一抗（稀釋比例1300）、ZO-1一抗（稀釋比例1200）和-actin一抗（稀釋比例11000），4孵育過夜;TBST洗膜，加入二抗（稀釋比例均為15000），室溫孵育2h;加入發(fā)光液進行曝光，在凝膠成像系統(tǒng)中成像。以ImageJV12圖像分析軟件進行灰度值分析，以目標蛋白條帶與內(nèi)參-actin條帶的灰度值比值表示目標蛋白的表達水平。2.8統(tǒng)計學方法采用SPSS21.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以xs表示。多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。檢驗水準=0.05。3結果3.1Y迷宮實驗結果各組小鼠進入支臂的總

26、次數(shù)差異均無統(tǒng)計學意義（P0.05），說明鹽酸多奈哌齊片、MCC950及癲癇清顆粒不影響小鼠的自發(fā)活動。與假手術組比較，模型組小鼠自發(fā)交替反應率顯著降低（P0.01）;與模型組比較，鹽酸多奈哌齊片組、MCC950組和癲癇清顆粒組小鼠的自發(fā)交替反應率均顯著升高（P0.05）。各組小鼠Y迷宮實驗結果見表1。3.2伊文思藍滲漏實驗結果與假手術組比較，模型組小鼠腦組織內(nèi)的伊文思藍含量顯著增加（P0.01）。與模型組比較，鹽酸多奈哌齊片組、MCC950組和癲癇清顆粒組小鼠腦組織內(nèi)的伊文思藍含量均顯著減少（P0.01）。各組小鼠腦組織內(nèi)的伊文思藍含量測定結果見表2。3.3小鼠腦組織中NLRP3蛋白表達水平

27、測定結果與假手術組比較，模型組小鼠腦組織中NLRP3蛋白表達水平顯著升高（P0.01）。與模型組比較，鹽酸多奈哌齊片組、MCC950組和癲癇清顆粒組小鼠腦組織中NLRP3蛋白表達水平均顯著降低（P0.05或P0.01）。各組小鼠腦組織中NLRP3蛋白表達測定結果見圖1、表2。3.4小鼠腦組織中IBA-1蛋白表達水平測定結果與假手術組比較，模型組小鼠腦組織中IBA-1蛋白表達水平顯著升高（P0.01）。與模型組比較，鹽酸多奈哌齊片組、MCC950組和癲癇清顆粒組小鼠腦組織中IBA-1蛋白表達水平均顯著降低（P0.05或P0.01）。各組小鼠腦組織中IBA-1蛋白表達水平測定結果見表2。3.5小鼠

28、腦組織中PUMA、NF-Bp65、ocln、cldn5、ZO-1蛋白表達水平測定結果與假手術組比較，模型組小鼠腦組織中PUMA、NF-Bp65蛋白表達水平均顯著升高（P0.05或P0.01），ocln、cldn5、ZO-1蛋白表達水平均顯著降低（P0.05或P0.01）。與模型組比較，鹽酸多奈哌齊片組、MCC950組和癲癇清顆粒組小鼠腦組織中PUMA、NF-Bp65蛋白表達水平均顯著降低（P0.05或P0.01），ocln、cldn5、ZO-1蛋白表達水平均顯著升高（P0.05或P0.01）。各組小鼠腦組織中PUMA、NF-Bp65、ocln、cldn5、ZO-1蛋白表達的測定結果見圖2、表3

29、。4討論NLRP3炎癥小體是目前AD藥物研發(fā)的新靶點20。NLRP3炎癥小體與AD患者的BBB通透性密切相關抑制NLRP3炎癥小體表達，可降低BBB通透性21。MCC950是目前最為有效的選擇性NLRP3炎癥小體小分子抑制劑，其通過抑制NLRP3炎癥小體的形成和激活，改善AD患者的BBB功能22-23。鹽酸多奈哌齊片作為膽堿酯酶抑制劑，多用于AD的治療，可改善AD患者的行為學變化15。因此，本研究選擇MCC950和鹽酸多奈哌齊片同時作為陽性對照藥。小膠質(zhì)細胞是神經(jīng)膠質(zhì)細胞的一種類型，活化的小膠質(zhì)細胞可促進AD患者的炎癥進程。NLRP3廣泛表達于小膠質(zhì)細胞中，在啟動炎癥反應中扮演重要角色24。緊

30、密連接蛋白是構成BBB基本結構并維持其功能的主要部分，在保持BBB通透性方面起到了較為重要的作用25。小膠質(zhì)細胞活化后，NLRP3的表達量增加，緊密連接蛋白（ocln、cldn5和ZO-1）表達降低26，BBB通透性增強，導致學習記憶功能障礙27。IBA-1參與小膠質(zhì)細胞骨架形成，是小膠質(zhì)細胞的特異性標志物，其表達量的多少與小膠質(zhì)細胞活性密切相關28。在伊文思藍滲漏實驗中，可以通過測定小鼠腦組織內(nèi)的伊文思藍含量來評估BBB的完整性29。本研究結果顯示，與假手術組比較，模型組小鼠腦組織內(nèi)的伊文思藍含量明顯增加，小鼠自發(fā)交替反應率明顯降低;且腦組織中的IBA-1、NLRP3蛋白表達明顯上調(diào)，ocl

31、n、cldn5、ZO-1蛋白表達明顯下調(diào)。以上結果提示，AD模型小鼠腦組織中NLRP3表達上調(diào)可促使BBB通透性增強，導致其學習記憶功能受損。癲癇清顆粒干預后可以顯著提高AD模型小鼠的自發(fā)交替反應率，減少其腦組織內(nèi)的伊文思藍含量，并可顯著下調(diào)腦組織中IBA-1、NLRP3蛋白表達，上調(diào)其腦組織中ocln、cldn5、ZO-1蛋白表達。以往研究表明，PUMA作為一種凋亡調(diào)控因子，具有強大的促凋亡作用30。近期研究發(fā)現(xiàn)，PUMA與BBB完整性密切相關31，敲除PUMA基因能夠顯著抑制腦血管內(nèi)皮細胞凋亡，起到保護BBB完整性的作用32;而沉默NF-B基因可抑制PUMA過表達引起的緊密連接蛋白（ocl

32、n、cldn5、ZO-1）表達量的降低，說明PUMA是NF-B的上游調(diào)控因子，可調(diào)節(jié)BBB通透性33。NF-B作為一條經(jīng)典的炎癥信號轉(zhuǎn)導通路，當外源性刺激存在時，可促使NF-Bp65進入細胞核內(nèi)，使NLRP3表達增加，而抑制NF-Bp65的核轉(zhuǎn)錄可以減少AD模型小鼠腦組織中NLRP3的表達，降低BBB通透性，從而改善AD模型小鼠的學習記憶障礙32。本研究結果顯示，與假手術組比較，模型組小鼠腦組織中PUMA、NF-Bp65蛋白表達均明顯上調(diào);癲癇清顆粒干預后可以顯著下調(diào)AD模型小鼠腦組織中PUMA、NF-Bp65蛋白表達。綜上所述，癲癇清顆?？赡芡ㄟ^抑制NLRP3炎癥小體信號通路，有效改善AD模

33、型小鼠的BBB損傷，有望為臨床治療AD提供新的思路和靶點。本課題組后續(xù)將進一步探討癲癇清顆粒是否能通過抑制A沉積和Tau蛋白磷酸化來降低NLRP3炎性小體的激活，從而發(fā)揮其維持BBB完整性的作用。參考文獻1NAJMR，JONESEA，HUANGYD.ApolipoproteinE4，inhibitorynetworkdysfunction，andAlzheimersdiseaseJ.MolNeurodegener，2022，14（1）：24.2KRAUSEDL，MLLERN.Neuroinflammation，microgliaandimplicationsforanti-inflammato

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39、方法研究J.中國中醫(yī)藥信息雜志，2022，21（10）：83-85.15李熒，楊彩瑜，賈冬，等.癲癇清顆粒對阿爾茨海默病模型小鼠血腦屏障的影響J.中成藥，2022，43（2）：497-502.16QIY，JIXF，CHITY，etal.Xanthocerasideattenuatesamyloidpeptide1-42-inducedmemoryimpairmentsbyreducingneuroinflammatoryresponsesinmiceJ.EurJPharmacol，2022，820：18-30.17李曉暉，王艷霞，董依依，等.姜黃素衍生物Cur20通過抑制乙酰膽堿酯酶改善阿爾茨

40、海默病小鼠的記憶和認知能力實驗研究J.藥物評價研究，2022，45（3）：449-454.18齊越，李熒，賈冬，等.癲癇清顆粒對阿爾茨海默病小鼠學習記憶能力的影響和作用機制研究J.中國現(xiàn)代醫(yī)生，2022，59（32）：34-39，193.19尚立芝，毛夢迪，許二平，等.柴胡加龍骨牡蠣湯對抑郁大鼠海馬組織PI3K/Akt/GSK3/-catenin信號通路的影響J.中國實驗方劑學雜志，2022，26（23）：12-19.20YANGY，WANGHN，KOUADIRM，etal.RecentadvancesinthemechanismsofNLRP3inflammasomeactivationan

41、ditsinhibitorsJ.CellDeathDis，2022，10（2）：128.21BAKHSHIS，SHAMSIS.MCC950inthetreatmentofNLRP3-mediatedinflammatorydiseases：latestevidenceandtherapeuticoutcomesJ.IntImmunopharmacol，2022，106：108595.22COLLRC，HILLJR，DAYCJ，etal.MCC950directlytargetstheNLRP3ATP-hydrolysismotifforinflammasomeinhibitionJ.NatCh

42、emBiol，2022，15（6）：556-559.23FEKETEC，VASTAGHC，DNES，etal.ChronicamyloidoligomerinfusionevokessustainedinflammationandmicroglialchangesintherathippocampusviaNLRP3J.Neuroscience，2022，405：35-46.24GUSTINA，KIRCHMEYERM，KONCINAE，etal.NLRP3inflammasomeisexpressedandfunctionalinmousebrainmicrogliabutnotinastrocytesJ.PLoSOne，2022，10（6）：e0130624.25THUBRONEB，ROSAHS，HODGESA，etal.Regionalmitoch