賽默飛液相色譜l2培訓(xùn)教程-應(yīng)用及配置二旁白字?jǐn)?shù)

1、應(yīng)用及配置（二）賽默飛液相色譜L2培訓(xùn)教程主要內(nèi)容1 白酒中塑化劑液相色譜分析（食品）2 白酒中氨基甲酸乙酯液相色譜分析（食品）3 雙三元液相在線固相萃取測定果汁中的多菌靈（食品）4喹諾酮獸藥殘留測定（藥物分析）5黃曲霉毒素測定方案（農(nóng)業(yè)） 眾所周知，白酒過量飲用對身體必然有害。但日常適量飲用白酒，也不一定安全。應(yīng)用1/2 白酒中塑化劑及氨基甲酸乙酯液相色譜分析 應(yīng)用背景影響白酒品質(zhì)的安全隱患外源性隱患來自白酒儲運(yùn)過程中的包材遷移物或非法添加物(如塑化劑) 內(nèi)源性隱患來自白酒釀造過程中的副產(chǎn)物(如氨基甲酸乙酯) 長期接觸塑化劑可能引起致癌；影響生殖系統(tǒng)功能，引起兒童性早熟 DEHP，DBP，B

2、BP (2類致癌物質(zhì)，4類有毒化學(xué)物質(zhì)）2011年5月，臺灣昱伸香料有限公司引發(fā)食品添加劑中塑化劑超標(biāo)事件案例一 臺灣昱伸香料公司2012年11月19日，湖南質(zhì)檢總局稱酒鬼酒中檢測塑化劑（DEHP, DIBP, DBP）超標(biāo)2.6倍。案例二 白酒塑化劑事件應(yīng)用1 白酒中塑化劑液相色譜分析應(yīng)用背景玩具GB/T 24613-2009（玩具用涂層中有害物質(zhì)限量）：DEHP，DBP，BBP總量不得超過0.1%，DIDP，DINP，DIOP總量不得超過0.1%。食品GB/T 21911-2008（食品中鄰苯二甲酸酯的測定）：食品中禁止添加16種增塑劑食品容器與包裝材料GB/T 21928-2008（食品

3、塑料包裝材料中鄰苯二甲酸酯測定）：管控16種增塑劑GB 9685-2008（食品容器、包裝材料用添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)）：限制DEHP，DBP，BBP等10種增塑劑的使用中國法規(guī)要求應(yīng)用1 白酒中塑化劑液相色譜分析應(yīng)用背景采用常規(guī)液相色譜+UV檢測器即可對白酒中塑化劑進(jìn)行檢測。16種鄰苯二甲酸酯分析結(jié)果應(yīng)用1 白酒中塑化劑液相色譜分析解決方案 2012年6月15日，香港媒體根據(jù)香港消費(fèi)者委員會的檢測結(jié)果披露出，16款黃酒飲品中含有氨基甲酸乙酯(EC)。 氨基甲酸乙酯又名尿烷，是發(fā)酵食物和酒精飲品在發(fā)酵或貯存過程中天然產(chǎn)生的物質(zhì)，雖不是劇毒化合物，但具有致癌性。 調(diào)查顯示，如果飲用氨基甲酸乙酯含量

4、3010-6 g/L 的酒，人飲用后患癌的機(jī)率大大增加。氨基甲酸乙酯結(jié)構(gòu)式應(yīng)用2 白酒中氨基甲酸乙酯液相色譜分析應(yīng)用背景 通過柱前衍生，采用HPLC結(jié)合熒光檢測解決了樣品處理過程復(fù)雜、效率低等弊端，提供了HPLC-FLD 法在國內(nèi)實(shí)際應(yīng)用的可能。現(xiàn)有的出入境檢驗(yàn)檢疫標(biāo)準(zhǔn)GC-MS法Thermo HPLC方案（HPLC-FLD檢測）9-羥基噸和EC在酸性條件下生成可產(chǎn)生熒光的Xanthylurethane物質(zhì)應(yīng)用2 白酒中氨基甲酸乙酯液相色譜分析解決方案應(yīng)用2 白酒中氨基甲酸乙酯液相色譜分析檢測結(jié)果樣品色譜圖 （黃酒，紅酒，白酒）黃酒白酒紅酒方法線性范圍方法檢出限方法回收率 2-1000 ng/

5、mL0.5 ng/mL95%-105%之間應(yīng)用1/2 白酒中塑化劑及氨基甲酸乙酯液相色譜分析 儀器配置 UltiMate 3000液相色譜系統(tǒng)檢測器紫外檢測器（用戶塑化劑檢測）熒光檢測器（用于氨基甲酸乙酯檢測 ）色譜柱Accucore C18, 4.6150mm, 2.6m 應(yīng)用1/2 白酒中塑化劑及氨基甲酸乙酯液相色譜分析 儀器配置P/NHardware5035.9200 SR-3000 Solvent Rack without degasser5040.0031 LPG-3400SD Pump5822.0020 WPS-3000TSL Analytical Autosampler5730.

6、0010 TCC-3000SD Column Thermostat 5074.0005VWD 3100Detector6074.0250 VWD-3x00 flow cell Analytical 11L, SST5078.0015 FLD-3100 Dual-PMT Detector6078.4330 FLD-3x00 flow cell micro 2L, SST17126-154630 Accucore C18, 4.6150mm, 2.6m 競爭優(yōu)勢在現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)（GC-MS）基礎(chǔ)上提供了常規(guī)HPLC的檢測方案；與白酒發(fā)酵單位進(jìn)行了長期合作，有一定市場基礎(chǔ)。賽默飛同時(shí)可提供白酒安全檢測的全

7、套解決方案?，F(xiàn)有用戶北京工業(yè)技師學(xué)院 潛在客戶酒廠出入境檢驗(yàn)檢疫局藥檢所應(yīng)用1/2 白酒中塑化劑及氨基甲酸乙酯液相色譜分析 競爭優(yōu)勢 2014年6月合作舉辦第三屆白酒食品安全檢測標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)培訓(xùn)會及3C 計(jì)劃氨基甲酸乙酯高級研修班（中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院及北京工業(yè)技師學(xué)院）多菌靈是一種廣泛用于保護(hù)蔬菜和水果的抗真菌劑。2010年，由于多菌靈可對實(shí)驗(yàn)室動物造成生育缺陷，并能導(dǎo)致母體不孕，澳大利亞禁止這種常見的殺菌劑使用于梨果類水果（蘋果和梨）、草坪及包括橘樹在內(nèi)的其他園藝作物。2012年初，在美國環(huán)保署（EPA）澄清并未批準(zhǔn)多菌靈用于橘樹之后，橘汁市場受到更大的壓力。應(yīng)用3 雙三元液相在線固相萃取

8、測定果汁中的多菌靈 應(yīng)用背景現(xiàn)有解決方案美國FDA要求檢出限達(dá)到10ppb，采用液液萃取，液相色譜UV檢測和FLD檢測；近期的一些方法多采用離線SPE和LC-MS進(jìn)行檢測，其中GB/T23380-2009采用液相色譜進(jìn)行分析，處理10mL樣品，經(jīng)過MCX凈化，前處理過程繁瑣。賽默飛解決方案在線固相萃取方案，快速測定橙汁中多菌靈殘留量。應(yīng)用3 雙三元液相在線固相萃取測定果汁中的多菌靈 解決方案應(yīng)用3 雙三元液相在線固相萃取測定果汁中的多菌靈 儀器配置P/NHardware5035.9230SRD-3600 Solvent Rack, 6 Degass. Lines5040.0061DGP-360

9、0SD Pump5822.0010WPS-3000SL Analytical Autosampler5730.0010TCC-3000SD Column Thermostat5082.0010 DAD-3000DiodeArrayDetector,withoutflowcell6082.0100 AnalyticalflowcellforDAD-3000(RS)6822.2450Conversion kit semiprep for WPS-3000 SL Analytical063191Acclaim PA2 C18，4.6*150mm，3mCH-953456Turboflow HTLC C

10、yclone-MCX-2 (1.050mm)競爭優(yōu)勢采用公司獨(dú)有的雙三元液相色譜技術(shù)，在線SPE進(jìn)行除雜富集。較液液萃取和離線SPE前處理更簡單。現(xiàn)有用戶熙可食品潛在客戶食品飲料廠出入境檢驗(yàn)檢疫局藥檢所應(yīng)用3 雙三元液相在線固相萃取測定果汁中的多菌靈 競爭優(yōu)勢方法建立的主要難點(diǎn)在于樣品前處理。GB 29692-2013食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)牛奶中喹諾酮類藥物多殘留的測定，前處理非常復(fù)雜。氟喹諾酮（Fluoroquinolone，F(xiàn)Qs）類藥物是近20年來哇諾酮類藥物迅速發(fā)展起來的一類十分重要的廣譜抗生素。氟哇諾酮類藥物在治療和預(yù)防動物疾病、促進(jìn)動物生長、提高飼料轉(zhuǎn)化率上應(yīng)用相當(dāng)廣泛。這類藥物的原形及

11、其代謝產(chǎn)物可蓄積或貯存于動物的細(xì)胞、組織、器官或可食性產(chǎn)品(如蛋、奶)中，形成藥物殘留。喹諾酮應(yīng)用4 喹諾酮獸藥殘留測定應(yīng)用背景提取甲醇洗脫物HPLC-FLD分析加乙腈-0.2%三氯乙酸，渦旋振蕩，超聲提取5min；離心，取上清液N2氣吹干，濃縮，500微升流動相溶解，進(jìn)樣20微升凈化采用聚合物基質(zhì)的SPE柱，甲醇活化，水平衡，上樣，10%甲醇除雜，甲醇洗脫提取加乙腈-0.2%三氯乙酸，渦旋振蕩，超聲提取5min；離心，取上清液HPLC-FLD分析500 L20 L5mL濃縮10bv稀釋25bv相當(dāng)于稀釋25倍5mL2mL全部進(jìn)樣稀釋2.5bv離線和在線前處理對比應(yīng)用4 喹諾酮獸藥殘留測定解決

12、方案采用一個(gè)三通加一個(gè)六通閥的方式實(shí)現(xiàn)了在線稀釋功能，達(dá)到了“峰聚焦”（Peak Focusing）作用，改善了目標(biāo)物峰形和分離度。采用Cyclone HTLC柱作為SPE柱，增加了方法耐用性Loop環(huán)預(yù)先填充80：20（甲醇：水相）作為洗脫溶劑，減少了系統(tǒng)延遲體積（GDV）的影響，可達(dá)到快速轉(zhuǎn)移目標(biāo)分析物至分析柱中的目的應(yīng)用4 喹諾酮獸藥殘留測定解決方案0.05.010.015.020.025.030.035.0Time min-1.0e60.0e02.0e64.0e66.0e67.0e6Response counts CIPRO DANO ENRO SARA DIFmincounts樣品加

13、標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)品空白樣品應(yīng)用4 喹諾酮獸藥殘留測定測定結(jié)果物質(zhì)檢出限環(huán)丙沙星0.13g/L達(dá)氟沙星0.01g/L恩諾沙星0.04g/L沙拉沙星0.12g/L二氟沙星0.05g/L應(yīng)用4 喹諾酮獸藥殘留測定儀器配置TurboFlow HTLC Cyclone , 0.550mm檢測器 FLD檢測器色譜柱分析柱Accucore C18, 2.6m 4.6150mm 富集柱TurboFlow HTLC Cyclone , 0.550mm（渦流技術(shù)，去除大部分基質(zhì)，有硅膠、聚合物材質(zhì)）應(yīng)用4 喹諾酮獸藥殘留測定儀器配置P/NHardware5035.9230SRD-3600 Solvent Rack, 6

14、 Degass. Lines5040.0061DGP-3600SD Pump5822.0020WPS-3000TSL Analytical Autosampler5730.0010TCC-3000SD Column Thermostat5078.0015FLD-3100 Dual-PMT Detector6078.4330FLD-3x00 flow cell micro 2L, SST6822.2450Conversion kit semiprep for WPS-3000 SL Analytical6730.0001Valve actuation HT right side 125 MPa/

15、18130psi, TCC-RS/SD6730.0002Valve actuation HT left side 125 MPa/18130psi, TCC-RS/SD6730.0006Pod 2pos-6port HT valve SST 1034bar/15000psi TCC-RS（2套）100l Loop環(huán) 17126-154630Accucore C18, 4.6150mm, 2.6m CH-953288TurboFlow HTLC Cyclone ，0.550mm競爭優(yōu)勢采用公司獨(dú)有的雙三元液相色譜技術(shù)，簡化前處理操作，提高檢測靈敏度；SPE柱可連續(xù)進(jìn)樣5001000次，降低樣品分

16、析成本約70-80%?，F(xiàn)有用戶上海獸藥所 潛在客戶疾病預(yù)防控制中心藥檢所省市區(qū)獸藥所乳制品廠應(yīng)用4 喹諾酮獸藥殘留測定競爭優(yōu)勢黃曲霉毒素B1/B2/G1/G2 方法1柱后碘衍生方法2柱后光衍生方法3 TFA柱前衍生 濕熱地區(qū)的糧食最容易被黃曲霉污染的，其毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氰化物、砷化物和有機(jī)農(nóng)藥的毒性，其中以B1毒性最大，是目前已知最強(qiáng)致癌物之一應(yīng)用5 黃曲霉毒素測定方案（柱后碘衍生法）應(yīng)用背景應(yīng)用5 黃曲霉毒素測定方案（柱后碘衍生法）解決方案 雙三元液相+FLD+衍生管色譜柱Thermo Syncronis C18, 5m，4.6*150 mm ，P/N 97105-254630柱溫室溫衍生管Re

17、action Coil 750 L (PN:42631)+ Reaction Coil 375 L (PN:43700)配件024313 4mm三通1個(gè)039056兩通接頭1個(gè)042806兩通轉(zhuǎn)接頭3個(gè)052230Bolt接頭8個(gè)052231Ferrule8個(gè)052306 黑色Peek管 0.01in 5ft衍生化溫度（柱溫箱提供）70 淋洗條件左泵（衍生泵）：0.05%碘溶液右泵（分析泵）：22%乙腈+22%甲醇+56%水流速左泵：0.2 ml/min；右泵：0.8 ml/minFLD激發(fā)波長365nm 發(fā)射波長435nm柱后衍生：用第二個(gè)泵作柱后衍生泵應(yīng)用5 黃曲霉毒素測定方案（柱后碘衍生

18、法）解決方案LOD測定色譜圖應(yīng)用5 黃曲霉毒素測定方案（柱后碘衍生法）測定結(jié)果時(shí)間min相關(guān)系數(shù)C0(Offset)C1(Slope)線性范圍（g /L）LOD（S/N=3）（g/L)黃曲霉毒素M17.5890.99946.43975005.30580.5-150.075黃曲霉毒素G28.7090.99971345.690118171.89370.15-4.50.02黃曲霉毒素G110.2130.99971290.998913835.00400.15-4.50.025黃曲霉毒素B211.4180.999968.772546151.07300.15-4.50.013黃曲霉毒素B113.6260.

19、999995.762936853.76960.15-4.50.016物質(zhì)濃度M10.075 g /LG1、G2B1、B20.0225 g /L應(yīng)用5 黃曲霉毒素測定方案（柱后光衍生法）儀器配置常規(guī)液相+FLD+泰樂琪紫外光照衍生儀推薦配置依據(jù)GB/T 5009.22-2003 食品中黃曲霉毒素B1的測定檢測項(xiàng)目黃曲霉毒素M1、G1、G2、B1和B2儀器型號Dionex Ultimate 3000系列：泵：LPG-3400SD自動進(jìn)樣器：WPS-3000TRS柱溫箱：TCC-3000RS檢測器：FLD-3100泰樂琪PriboFast 柱后光化學(xué)衍生反應(yīng)器色譜柱Thermo Syncronis

20、C18, 5m, 4.6*150 mm , P/N 97105-254630淋洗條件22%乙腈+22%甲醇+56%水流速0.8 ml/min分析時(shí)間20 minFLD激發(fā)波長365nm 發(fā)射波長435nm進(jìn)樣量100 L黃曲霉毒素的檢出限測定色譜圖應(yīng)用5 黃曲霉毒素測定方案（柱后光衍生法）測定結(jié)果Peak NameRet.TimeminCoeff.ofDeterminationC0(Offset)線性范圍g /LLOD(g /L)RSD%n=3M17.90.99995-131.5290.1258.30.050.5G29.180.99996-95.970.03-20.0123.0G110.80.99999-174.8530.075-50.033.5B212.10.99996-205.2370.0225-1.50.0093.8B114.41-132.7890.075-50.034.5物質(zhì)濃度M10.05g /LG20.012g /LG10.03g /LB20.009g /LB10.03g /L應(yīng)用5 黃曲霉毒素測定方案（柱前TFA衍生法）儀器配置推薦配置：常規(guī)液相HPLC+FLD檢測項(xiàng)目黃曲霉毒素M1、G1、G2、B1和B2儀器型號Dionex Ultimate 3000系列：泵：LPG-3400SD自動進(jìn)樣器：WPS-3000TRS柱溫箱：TCC-3000RS檢測