液體活檢在NSCLC診療中的應(yīng)用課件

1、液體活檢在NSCLC診療中的應(yīng)用周燕斌中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院 呼吸內(nèi)科精準(zhǔn)醫(yī)療時(shí)代NSCLC診療面對的困境精準(zhǔn)醫(yī)療時(shí)代下NSCLC診療面對的困境約1/3晚期NSCLC患者無法獲得足夠用于檢測的組織樣本腫瘤的異質(zhì)性N Engl J Med. 2012 Mar 8;366(10):883-92精準(zhǔn)醫(yī)療時(shí)代下NSCLC診療的臨床問題約1/3晚期NSCLC患者無法獲得用于檢測的組織樣本組織異質(zhì)性，活檢樣本無法反映腫瘤突變的全貌時(shí)空異質(zhì)性，無法實(shí)時(shí)監(jiān)測患者的病情血液標(biāo)本是首選的實(shí)時(shí)樣本！什么是液體活檢Schwarzenbach H, et al.Nat. Rev. Cancer. 2011, 11, 42

2、6循環(huán)腫瘤DNA（Circulating Tumor DNA）循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA)攜帶有實(shí)體瘤細(xì)胞基因突變/變異、甲基化、微衛(wèi)星序列改變等信息游離DNA（cfDNA）Cell free DNA，外周血中一種無細(xì)胞狀態(tài)的胞外DNAKrebs et al., Nat Rev Clin Oncol. 2014 ;11(3):129-44.保留完整的細(xì)胞形態(tài)，可以提供數(shù)量、遺傳、細(xì)胞生物學(xué)特性等信息，指導(dǎo)預(yù)后循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulating Tumor cells， CTC）ctDNA與CTC在臨床應(yīng)用中的比較類別臨床應(yīng)用優(yōu)勢臨床應(yīng)用劣勢CTCs有完整的細(xì)胞形態(tài)疾病轉(zhuǎn)移或進(jìn)展的預(yù)后判斷下游

3、基因檢測或免疫研究可體外培養(yǎng)低豐度和易破碎CTC分離，步驟繁瑣假陽性和假陰性，表面抗原CTC的異質(zhì)性ctDNA數(shù)量多，容易檢測多可克服異質(zhì)性檢測到疾病進(jìn)展更加敏感基因檢測指導(dǎo)用藥可能影響治療方案假陽性和假陰性無法分離ctDNActDNA的特點(diǎn)片段化 Heitzer et. al., Clinical Chemistry 2015, 61(1)：112123提示其來源為壞死和凋亡細(xì)胞ctDNA的特點(diǎn)個(gè)體差異大腫瘤患者體內(nèi)ctDNA濃度0.01-90%不等，與臨床分期、分化程度密切相關(guān)Guo et al., Onco Targets Ther. 2015 Nov 6;8:3289-3296.Bet

4、tegowda et al., Sci Transl Med. 2014 February 19; 6(224): 224ra24ctDNA的特點(diǎn)代謝快半衰期約2h，可以實(shí)時(shí)反映腫瘤的變化情況 Crowley et. al, Nat. Rev. Clin. Oncol.，2013 Aug;10(8):472-84ab現(xiàn)有檢測技術(shù)比較技術(shù)檢出限檢測區(qū)域技術(shù)特點(diǎn)Sanger 10%全基因序列雙脫氧鏈終止法qPCR 1%已知位點(diǎn)熒光素標(biāo)記ARMS PCR0.1%已知位點(diǎn)擴(kuò)增阻滯突變NGS0.1-1%全基因序列SBS/半導(dǎo)體測序數(shù)字PCR0.01% 或更低已知位點(diǎn)微滴反應(yīng)數(shù)字PCR：超靈敏的精確定量方

5、法“Divide and Conquer” Digital PCR 是一種基于單分子模板PCR擴(kuò)增，進(jìn)行核算拷貝數(shù)精確定量的分析方法數(shù)字PCR平臺結(jié)果判讀可檢測低至0.04%的EGFR 790M突變更高靈敏度更適合ctDNA的檢測精確定量更適合做動(dòng)態(tài)監(jiān)測操作簡便，周期短適合臨床應(yīng)用數(shù)字PCR與其他方法的比較Thress et al., Lung Cancer, 2015,90(3): 509-515驅(qū)動(dòng)基因并行檢測與NSCLC治療Shames et al., J Pathol. 2014 Jan;232(2):121-33二代測序已成為NCCN推薦技術(shù)ctDNA在NSCLC診療中的應(yīng)用臨床用藥

6、重大進(jìn)展易瑞沙（Iressa）血液ctDNA伴隨診斷獲歐盟批準(zhǔn)2014年9月，歐洲藥品管理局（EMA）批準(zhǔn)易瑞沙（Iressa）標(biāo)簽II型變化更新，使ctDNA檢測方法成為醫(yī)生評估EGFR突變狀態(tài)的重要方法之一2015年2月，CFDA也批準(zhǔn)了其中文說明書的變動(dòng)：當(dāng)考慮本品用于晚期或轉(zhuǎn)移性NSCLC患者的一線治療時(shí)，推薦對所有患者的腫瘤組織進(jìn)行EGFR突變檢測。如果腫瘤標(biāo)本不可評估，則可使用從血液（血漿）標(biāo)本中獲得的循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)。ctDNA作為一種新型的腫瘤標(biāo)志物，通過檢測其與腫瘤發(fā)生和用藥相關(guān)的基因突變信息，實(shí)現(xiàn)指導(dǎo)用藥。ctDNA用于伴隨診斷指導(dǎo)臨床用藥NSCLC患者腫瘤組織

7、和ctDNA EGFR突變一致性癌種分期例數(shù)技術(shù)檢測基因檢出限靈敏度特異性一致性非小細(xì)胞肺癌I-IV3110多種EGFR-62%96%81%Circulating tumor DNA is effective for the detection of EGFR mutation in non-small cell lung cancer: a meta-analysisCancer Epidemiol Biomarkers Prev. 2015 Jan;24(1):206-12.諾禾致源NSCLC一致性研究結(jié)果IIIB-IV肺腺癌患者組織與血液檢測一致性研究階段性結(jié)果（40基因panel）陽性

8、陰性陽性一致性陰性 一致性總體一致性組織血漿組織血漿總體23179974%100%81%EGFRL858R97232378%100%94%19del54272780%100%97%EML4-ALK43282875%100%97%基因融合53272760%100%94%血液檢測逐漸得到中國專家的認(rèn)可2015年12月8日發(fā)布非小細(xì)胞肺癌血液EGFR基因突變檢測中國專家共識中華醫(yī)學(xué)雜志，2015，95卷，46期：3721-3726ctDNA的應(yīng)用動(dòng)態(tài)監(jiān)測Oxnard et. al., Clin Cancer Res, 2014, 20(6): 1698-170565歲有吸煙史的男性NSCLC患者,追蹤 其在接受靶向藥物治療過程中,血液ctDNA中突變基因型含量的變化。在取樣 的四個(gè)時(shí)間階段中,第四個(gè)階段病情有進(jìn)展,出現(xiàn)了耐藥的情況。同時(shí)ctDNA中 TP53(splicing)和EGFR(T790M)突變頻率