胃癌中Cks1、p27Kip1和Skp2蛋白的表達(dá)

1、胃癌中Cks1、p27Kip1和Skp2卵白的表達(dá)趙勇，高建飛，饒智國，歐武陵，朱宇澤，杜光祖【摘要】目的探究ks1在胃癌產(chǎn)生及其在Skp2調(diào)治p27Kip1落解歷程中的作用。要領(lǐng)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)測定正常胃粘膜和胃癌構(gòu)造中ks1、p27Kip1、Skp2卵白表達(dá)。效果胃癌構(gòu)造中ks1、Skp2表達(dá)顯著高于正常胃粘膜2=22.69，0.05；2=13.42,P0.05，而p27Kip1表達(dá)那么低于正常胃粘膜2=14.83,P0.05。胃癌中ks1、Skp2表達(dá)與p27Kip1表達(dá)呈負(fù)相干r=-0.649，P0.05；r=-0.732，P0.05；而ks1卵白表達(dá)與Skp2卵白缺乏相干性P0.05)

2、。胃癌中ks1的表達(dá)與腫瘤分化程度相干2=5.05,P0.05，而與腫瘤浸潤深度、淋逢迎轉(zhuǎn)移及臨床分期不相干P0.05。結(jié)論ks1大概到場了胃癌的產(chǎn)生；胃癌中ks1大概到場了Skp2調(diào)治p27Kip1泛素化落解歷程。【關(guān)鍵詞】胃腫瘤；ks1卵白；Skp2卵白；p27Kip1卵白1質(zhì)料與要領(lǐng)1.1質(zhì)料與試劑獵取手術(shù)切除、經(jīng)臨床、病理證明的64例胃癌標(biāo)本及20例正常胃粘膜構(gòu)造。全部標(biāo)本術(shù)前均未行放療、化療或免疫治療。胃癌患者中，男34例，女30例；年事2278歲，均勻年事54.7歲。TN分期：期12例，期23例，期19例，期10例。分化程度：高分化17例，中分化19例，低分化18例，未分化10例。

3、癌轉(zhuǎn)移環(huán)境：淋逢迎轉(zhuǎn)移31例，無淋逢迎轉(zhuǎn)移33例；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移10例，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移54例。胃壁浸潤深度：浸潤未凌駕漿膜層T1T232例，浸潤凌駕漿膜層T3T432例。ks1兔抗人單克隆抗體及Skp2鼠抗人單克隆抗體購自美國ZYED公司，p27Kip1鼠抗人單克隆抗體購自丹麥DAK公司。1.2要領(lǐng)手術(shù)切除的奇怪構(gòu)造，取無出血區(qū)部門構(gòu)造塊，PBS洗凈血跡，機(jī)器破裂法制成單細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液0.5l參加兩只小試管，PBS液洗滌一次，離心，棄上清，試管內(nèi)參加兔抗人ks1或p27Kip1、Skp2熒光多克隆抗體10l，比較試管參加PBS，混勻，4孵育30in，PBS洗滌一次，離心，掃除多余未結(jié)合抗體后上機(jī)檢

4、測。每1標(biāo)本檢測10000個細(xì)胞。ks1或p27Kip1、Skp2陽性率=試管中ks1或p27Kip1、Skp2陽性細(xì)胞數(shù)陰性比較陽性細(xì)胞數(shù)/10000100%。設(shè)陽性率10%為陽性表達(dá)，陽性率30%為高表達(dá)1。2效果2.1ks1、p27Kip1、Skp2的表達(dá)胃癌構(gòu)造中ks1、Skp2陽性率顯著高于正常胃粘膜構(gòu)造(2=22.69,P0.05；2=13.42,P0.05)，而p27Kip1陽性率那么低于正常胃粘膜構(gòu)造(2=14.83,P0.05),見表1。表1ks1、p27Kip1、Skp2在差異胃構(gòu)造標(biāo)本中的表達(dá)注：組間比力P0.05胃癌構(gòu)造中ks1表達(dá)與癌構(gòu)造分化程度相干，低、未分化組ks

5、1表達(dá)陽性率顯著高于高、中分化組(2=5.05,P0.05)，而與胃癌患者年事、性別、腫瘤浸潤深度、淋逢迎轉(zhuǎn)移和臨床分期不相干(P0.05,見表2。2.2胃癌中ks1表達(dá)與Skp2、p27Kip1的關(guān)聯(lián)性64例胃癌構(gòu)造按照ks1、Skp2卵白表達(dá)環(huán)境分為三組：ks1、Skp2同時高表達(dá)21例；ks1、Skp2同時低表達(dá)27例；ks1高表達(dá)、Skp2低表達(dá)或ks1低表達(dá)、Skp2高表達(dá)16例。21例ks1、Skp2同時高表達(dá)者18例p27Kip1低表達(dá)；27例ks1、Skp2同時低表達(dá)者23例p27Kip1高表達(dá)。胃癌構(gòu)造中ks1、Skp2表達(dá)均與p27Kip1卵白表達(dá)負(fù)相干r=-0.649,r

6、=-0.732，P0.05，但有6例Skp2卵白與p27Kip1卵白同時高表達(dá)，4例Skp2卵白與p27Kip1卵白同時低表達(dá)；而ks1卵白表達(dá)與Skp2卵白缺乏相干性(P0.05)。3討論本研究表現(xiàn)胃癌構(gòu)造中Skp2表達(dá)顯著高于正表2胃癌中ks1表達(dá)與臨床病理因素的干系(%)種別例數(shù)ks1P年事歲603574.3(26/35)602972.4(21/29)P0.05性別男3473.5(25/34)女3073.3(22/30)P0.05分化程度高中分化3661.1(22/36)低未分化2889.3(25/28)P0.05侵襲深度T1T23271.2(23/32)T3T43275.0(24/32

7、)P0.05淋逢迎轉(zhuǎn)移有3177.4(24/31)無3369.7(23/33)P0.05臨床分期+3568.6(24/35)+2979.3(24/35)P0.05組間比力P0.05,2=5.05,P0.05常胃粘膜，而p27Kip1表達(dá)那么低于正常胃粘膜；胃癌構(gòu)造中Skp2卵白與p27Kip1卵白負(fù)相干。這一效果支持p27Kip1、Skp2到場了胃癌的產(chǎn)生及Skp2到場了p27Kip1泛素化落解歷程的推論。但本實(shí)行還創(chuàng)造10例Skp2，p27Kip1同時高表達(dá)或Skp2，p27Kip1同時低表達(dá)。Den等2創(chuàng)造50%的宮頸癌構(gòu)造中p27Kip1，Skp2同時高表達(dá)或低表達(dá)。HaraT3等創(chuàng)造在

8、缺乏Skp2的胞漿內(nèi)，仍可檢測到p27Kip1的泛素化運(yùn)動，說明細(xì)胞漿內(nèi)大概存在p27Kip1其他泛素化歷程。Sitry等4研究表白，無論在體內(nèi)或體外，Skp2只有結(jié)合ks1后才氣識別p27Kip1舉行泛素化卵白落解。本研究創(chuàng)造ks1、Skp2同時高表達(dá)者p27Kip1低表達(dá)；ks1、Skp2同時低表達(dá)者p27Kip1高表達(dá)，ks1、Skp2表達(dá)均與p27Kip1卵白表達(dá)負(fù)相干，這說明ks1、Skp2大概配合到場了p27Kip1的泛素化落解歷程。Kitajia等5創(chuàng)造將ks1、Skp2單獨(dú)轉(zhuǎn)染細(xì)胞時ks1并不克不及使p27Kip1的程度落落，而ks1、Skp2同時轉(zhuǎn)染細(xì)胞可致p27Kip1落解，通過siRNA按捺ks1的表達(dá)可使p27Kip1表達(dá)增長，并可按捺腫瘤細(xì)胞生長。而asuda等6研究創(chuàng)造ks1、Skp2同時轉(zhuǎn)染細(xì)胞并不使p27Kip1RNA程度低落，而是低落了p27Kip1卵白程度，這再次證明白ks1、Skp2大概配合到場了p27Kip1卵白的泛素化落解歷程。本研究創(chuàng)造胃癌構(gòu)造中ks1表達(dá)顯著高于正常胃粘膜，ks1的表達(dá)與腫瘤分化程度相干，這說明ks1大概到場了胃癌的產(chǎn)生，ks1卵白表達(dá)增多，使得胃癌細(xì)胞分開了原有的正常生長周期調(diào)控，呈無控制生長狀態(tài)，ks1表達(dá)越多，細(xì)胞分化程度