食品中氨基甲酸乙酯的測(cè)定（食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)）

1、 GB 5009.272011中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中氨基甲酸乙酯的測(cè)定范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了啤酒、葡萄酒、黃酒、白酒等酒類以及醬油中氨基甲酸乙酯的氣相色譜質(zhì)譜法測(cè)定。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于啤酒、葡萄酒、黃酒、白酒等酒類以及醬油中氨基甲酸乙酯的測(cè)定。原理 試樣加D5-氨基甲酸乙酯內(nèi)標(biāo)后，經(jīng)過堿性硅藻土固相萃取柱凈化、洗脫，洗脫液濃縮后，用氣相色譜質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。試劑和材料注：除非另有說明，所有試劑均為分析純。試劑無水硫酸鈉。 氯化鈉。 正己烷：色譜純。 乙酸乙酯：色譜純。 乙醚：色譜純。 甲醇：色譜純。3.1.7 堿性硅藻土固相萃取柱：4000 mg、12mL。試劑配制3

2、.2.1無水硫酸鈉：450烘烤4 h，冷卻后貯于干燥器中備用。3.2.2 5%乙酸乙酯/乙醚溶液:取5 mL乙酸乙酯，用乙醚定容到100 mL，混勻待用。標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品（C3H7O2N）：純度大于99.0。3.3.2 D5-氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 D5-氨基甲酸乙酯貯備液（1.0 mg/mL）：準(zhǔn)確稱取0.01g （精確到0.0001 g）D5-氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇定容至10 mL，4保存。3.4.2 2.0 g/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液：準(zhǔn)確吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.1 mL，用甲醇定容至50 mL，4保存。

3、3.4.3 1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯貯備液：準(zhǔn)確稱取0.05 g（精確到0.0001 g）氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇定容至50 mL， 4保存。 3.4.4 10.0 g/mL氨基甲酸乙酯中間液：準(zhǔn)確吸取1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.0 mL，用甲醇定容至100 mL，4保存。3.4.5 0.5 g/mL氨基甲酸乙酯中間液：準(zhǔn)確吸取10.0 g/mL氨基甲酸乙酯中間液5.0 mL，用甲醇定容至100 mL，4保存。3.4.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取0.5 g/mL氨基甲酸乙酯中間液20 L、50 L、100 L、200 L、400 L 和10.0 g/mL氨基甲酸乙

4、酯標(biāo)準(zhǔn)中間液40 L、100 L于7個(gè)1 mL容量瓶中，各加100 L 2.0 g/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液，用甲醇定容至刻度，得到10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100.0 ng/mL、200.0 ng/mL、400.0 ng/mL、1000.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用。儀器和設(shè)備氣相色譜質(zhì)譜儀，帶EI源。漩渦混勻器。氮吹儀。固相萃取裝置，配真空泵。超聲波清洗機(jī)。天平：感量為0.1 mg和0.01g。分析步驟試樣制備稱取2 g（準(zhǔn)確到0.01g）試樣（啤酒超聲5min 脫氣后稱量），加100 L 2.0 g/mL D5-氨基甲酸乙酯內(nèi)標(biāo)使用

5、液、氯化鈉0.3 g（醬油不加氯化鈉），超聲溶解、混勻，然后加樣到堿性硅藻土固相萃取柱上，抽真空讓試樣慢慢滲入到固相萃取柱中，然后靜置約10 min。先用10 mL正己烷淋洗，然后用10 mL5%乙酸乙酯/乙醚溶液以約1 mL/min流速洗脫，并收集于10 mL具塞刻度試管中，洗脫液經(jīng)過2.0g無水硫酸鈉脫水后，在室溫下用氮?dú)饩従彺抵?.5 mL左右，最后用甲醇定容至1.0 mL制成測(cè)定液供GC/MS分析。 儀器參考條件氣相色譜質(zhì)譜儀分析參考條件：DB-INNOWAX毛細(xì)管色譜柱：30 m0.25 mm（內(nèi)徑）0.25 m（膜厚）或相當(dāng)色譜柱；進(jìn)樣口溫度：220 ；柱溫：初溫50 ，保持1 m

6、in，然后以8 /min升至180 ，程序運(yùn)行完成后，240 后運(yùn)行5min；載氣：氦氣，純度99.999，流速1 mL/min；電離模式：電子轟擊源（EI），能量為70 eV；四級(jí)桿溫度:150；離子源溫度：230 ；傳輸線溫度：250 ；溶劑延遲：11min； 進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1-2 L；檢測(cè)方式：選擇離子掃描（SIM）采集；氨基甲酸乙酯選擇監(jiān)測(cè)離子（m/z）：44、 62、74、89；定量離子62；D5-氨基甲酸乙酯選擇監(jiān)測(cè)離子（m/z）64、76；定量離子64。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將氨基甲酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)使用液10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100

7、.0 ng/mL、200.0 ng/mL、400.0 ng/mL、1000.0 ng/mL（內(nèi)含200.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯）進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜儀測(cè)定，以氨基甲酸乙酯濃度為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液中氨基甲酸乙酯峰面積與內(nèi)標(biāo)D5-氨基甲酸乙酯的峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試樣測(cè)定將試樣溶液同標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)測(cè)定液中氨基甲酸乙酯的含量計(jì)算試樣中氨基甲酸乙酯的含量。試樣含低濃度的氨基甲酸乙酯宜采用10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100.0 ng/mL、200.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；試樣含高濃度氨基甲酸乙酯宜采用50.0 ng/mL、1

8、00.0 ng/mL、200.0 ng/mL、400.0 ng/mL、1000.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線。 分析結(jié)果的表述試樣中氨基甲酸乙酯含量按式（1）計(jì)算 （1）式中：X樣品中氨基甲酸乙酯含量，單位為微克每千克（g/kg）；C測(cè)定液中氨基甲酸乙酯的含量，單位為納克每毫升（ng/mL）；M樣品質(zhì)量，單位為克（g）；V樣品的定容體積，單位為毫升（mL）。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)XX果的算術(shù)平均值表示，保留3位有效數(shù)字（或小數(shù)點(diǎn)后1位）。精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)XX果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的20%。其他當(dāng)試樣取2.00g時(shí)，本方法氨基甲酸乙酯檢出限為2.0 g/k

9、g，定量限為5.0 g/kg。附錄A為標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)譜圖，其中圖A.1為氨基甲酸乙酯及內(nèi)標(biāo)總離子圖；圖A.2為氨基甲酸乙酯質(zhì)譜圖；圖A.3 D5-氨基甲酸乙酯質(zhì)譜圖。附錄A標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)譜圖圖A.1給出了氨基甲酸乙酯及內(nèi)標(biāo)總離子圖12.3012.4012.5012.6012.7012.8012.9013.0013.1013.2013.3013.4013.5013.601000002000003000004000005000006000007000008000009000001000000Time-Abundance 13.09 13.16氨基甲酸乙酯D5-氨基甲酸乙酯圖A.1 氨基甲酸乙酯及內(nèi)標(biāo)總離子圖圖A.2給出了氨基甲酸乙酯質(zhì)譜圖3035404550556065707580859095020000040000060000080000010000001200000140000016000001800000200000022000002400000m/z-Abundance624474897141555947958185679977519238圖A.2 氨基甲酸乙酯質(zhì)譜圖圖A.3給出了D5-氨基甲酸乙酯質(zhì)譜圖40506070809010011012013014005