食品中EDTA鹽的測(cè)定（食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)）

1、 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中乙二胺四乙酸鹽的測(cè)定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了固相萃取柱凈化、液相色譜法測(cè)定食品中乙二胺四乙酸鹽含量。本標(biāo)準(zhǔn)適用于果醬、果脯、腌漬的蔬菜罐頭、除番茄沙司外的蔬菜泥（醬）、堅(jiān)果與籽類罐頭、八寶粥罐頭、復(fù)合調(diào)味料、飲料中乙二胺四乙酸二鈉和復(fù)合調(diào)味料中乙二胺四乙酸二鈉鈣的測(cè)定。2 原理試樣用水提取，提取液加入三氯化鐵衍生，經(jīng)混合型陰離子（PXA）固相萃取柱凈化，液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法定量。復(fù)合調(diào)味料測(cè)出乙二胺四乙酸鹽的三氯化鐵衍生物總量后，不加三氯化鐵測(cè)定乙二胺四乙酸二鈉鈣含量，根據(jù)兩者結(jié)果確定乙二胺四乙酸二鈉的含量。3 試劑和材料注：除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純，水為G

2、B/T 6682-2008規(guī)定的三級(jí)水。3.1 試劑3.1.1 甲醇：色譜純。3.1.2 鹽酸：純度 36%38%。3.1.3 磷酸：純度不小于85%。3.1.4 甲酸：純度不小于98%。3.1.5 四丁基溴化銨：純度不小于99%。3.1.6 乙酸鈉：純度不小于99%。3.1.7 三氯化鐵：純度不小于99%。3.2 試劑配制3.2.1 三氯化鐵溶液：稱取0.54 g三氯化鐵（3.1.7），溶于90 mL水中，加入0.10 mL鹽酸（3.1.2），轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻。 3.2.2 5%甲酸甲醇水溶液溶液：取5mL甲酸、20mL甲醇用水定容至100mL。3.2.3 四

3、丁基溴化銨-乙酸鈉混合溶液：稱取6.45 g四丁基溴化銨（3.1.5）、2.46 g乙酸鈉（3.1.6），加1000 mL水超聲溶解，加入磷酸調(diào)節(jié)pH至4.0。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 乙二胺四乙酸二鈉（C10H14N2O8Na22H2O）標(biāo)準(zhǔn)品：CAS登錄號(hào)6381-92-6，純度不小于99%。3.3.2 乙二胺四乙酸二鈉鈣（C10H14N2O8Na2Ca）標(biāo)準(zhǔn)品：CAS登錄號(hào)62-33-9，純度不小于99%。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取適量的乙二胺四乙酸二鈉（3.3.1）標(biāo)準(zhǔn)品，用水溶解并定容至100 mL棕色容量瓶中，得濃度為10 mg/ mL的標(biāo)準(zhǔn)

4、儲(chǔ)備溶液，此溶液轉(zhuǎn)移至儲(chǔ)液瓶中4 下儲(chǔ)存。3.4.2 乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：吸取100 L乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.4.1）加水稀釋成濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。再用水將標(biāo)準(zhǔn)中間溶液稀釋為0.5g/mL、2.0 g/mL、5.0 g/mL、10.0 g/mL、50.0 g/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。3.4.3 乙二胺四乙酸二鈉鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取適量的乙二胺四乙酸二鈉鈣（3.3.2）標(biāo)準(zhǔn)品，用水溶解并定容至100 mL棕色容量瓶中，得濃度為10 mg/ mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，此溶液轉(zhuǎn)移至儲(chǔ)液瓶中4 下儲(chǔ)存。3.4.4 乙二胺四乙酸二鈉鈣標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：吸取100L乙二胺四乙酸二鈉鈣標(biāo)

5、準(zhǔn)溶液（3.4.3）加入900L水稀釋成濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。再用水將乙二胺四乙酸二鈉鈣標(biāo)準(zhǔn)中間溶液稀釋為1.0g/mL、10.0 g/mL、20.0 g/mL、50.0 g/mL、100.0 g/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。4 儀器和設(shè)備4.1 液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器。4.2 電子天平：感量 0.1 mg、0.01 g。4.3 離心機(jī): 不低于7500 rpm。4.4 旋渦混合器。4.5 超聲波清洗機(jī)。4.6 pH計(jì)：精度為0.01。4.7 螺旋蓋聚丙烯離心管：15 mL、50 mL。4.8 玻璃具塞比色管： 50 mL。4.9 24孔固相萃取裝置。4.10 微孔濾膜：0.22m，有

6、機(jī)系。4.11 混合陰離子（PXA）固相萃取柱：150mg/6mL或相當(dāng)者。5 試樣制備與保存5.1 試樣制備5.1.1 固體樣品樣品用組織搗碎機(jī)粉勻漿，混合均勻后裝入潔凈容器內(nèi)密封并做好標(biāo)識(shí)。5.1.2 液體樣品含果粒樣品需榨汁機(jī)勻漿混合均勻后，裝入潔凈容器內(nèi)密封并做好標(biāo)識(shí)。碳酸飲料取500g于1000mL燒杯中，在70水浴中邊加熱邊攪拌，去除部分二氧化碳，冷卻至室溫后，裝入潔凈容器內(nèi)密封并做好標(biāo)識(shí)。5.2 試樣保存試樣于-18冰箱內(nèi)保存。注：制樣和樣品保存過程中，應(yīng)防止樣品受到污染和待測(cè)物損失。6 分析步驟6.1 乙二胺四乙酸鹽總量測(cè)定6.1.1 提取稱取試樣5.0 g，置于50mL離心管

7、中，加入25 mL水，渦旋混勻，超聲20min，7500rpm離心5min，取上清液置于50mL玻璃比色管中。剩余殘?jiān)貜?fù)提取一次，離心后合并上清液，加水定容至50mL。吸取5mL上清液于15mL離心管中，待衍生化。6.1.2 衍生向上述提取溶液中加入0.5 mL三氯化鐵溶液，渦旋混勻1min，超聲20 mim，7500 rpm離心5min，待凈化。6.1.3 凈化依次用5mL甲醇、5mL水活化PXA柱，將待凈化液（6.1.2）全部上樣過柱，依次用5mL水、5mL甲醇淋洗，抽干，用5mL 5%甲酸甲醇水溶液（3.2.2）洗脫，抽干，收集洗脫液定容至5mL，過濾，供液相色譜儀測(cè)定。6.2 乙二胺

8、四乙酸二鈉鈣測(cè)定6.2.1 提取稱取試樣5.0 g，置于50mL離心管中，加入25 mL水，渦旋混勻，超聲20min，7500rpm離心5min，取上清液置于50mL玻璃比色管中。剩余殘?jiān)貜?fù)提取一次，離心后合并上清液，加水定容至50mL。吸取5mL上清液于15mL離心管中，待凈化。6.2.2 凈化依次用5 mL甲醇、5 mL水活化PXA柱，將待凈化液（6.2.1）全部上樣過柱，依次用5 mL水、5 mL甲醇淋洗，抽干，用5 mL 5%甲酸甲醇水溶液洗脫，抽干，收集洗脫液定容至5mL，過濾，供液相色譜儀測(cè)定。6.3 儀器參考條件6.3.1 色譜柱：Diamond Plus C18柱，250 m

9、m（長(zhǎng)度）4.6 mm（內(nèi)徑），粒度5.0m，或相當(dāng)者；6.3.2 流動(dòng)相: 甲醇:四丁基溴化銨-乙酸鈉混合溶液（3.2.3）=15 : 85；6.3.3 流速：0.8 mL/min；6.3.4 柱溫：35；6.3.5 波長(zhǎng)：254 nm；6.3.6 進(jìn)樣量：10 L。6.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作6.4.1乙二胺四乙酸鹽總量測(cè)定取150 L乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.4.2）于50 mL玻璃具塞比色皿中，加入25 mL水和1.0 mL三氯化鐵溶液，渦旋混勻1min，超聲20 mim，冷卻至室溫后，用水定容至刻度。將衍生所得標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為

10、橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，乙二胺四乙酸二鈉衍生物的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見附錄A中圖A.1。6.4.2乙二胺四乙酸二鈉鈣含量測(cè)定將乙二胺四乙酸二鈉鈣系列標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.4.4）分別注入液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，乙二胺四乙酸二鈉鈣的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見附錄A中圖A.2。6.5 試樣溶液的測(cè)定 將試樣溶液注入液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，同時(shí)記錄峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中乙二胺四乙酸二鈉衍生物或乙二胺四乙酸二鈉鈣的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。6 分析結(jié)果的表述6.1 除復(fù)合調(diào)味料外其它試樣試樣中乙二胺四乙酸鹽含量按式（1）計(jì)算：

11、（1）式中：X1試樣中乙二胺四乙酸二鈉的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；c試樣溶液中乙二胺四乙酸二鈉的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升（g/mL）；V被測(cè)試樣總體積，單位為毫升（mL）；m稱取試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；1000換算系數(shù)。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)XX果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。6.2 復(fù)合調(diào)味料試樣中乙二胺四乙酸鹽的含量應(yīng)分為乙二胺四乙酸二鈉和乙二胺四乙酸二鈉鈣分別表述。其中乙二胺四乙酸二鈉鈣含量按式（2）計(jì)算： （2）式中：X2試樣中乙二胺四乙酸二鈉鈣的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；c試樣溶液中乙二胺四乙酸二鈉鈣的

12、質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升（g/mL）；V被測(cè)試樣總體積，單位為毫升（mL）；m稱取試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；1000換算系數(shù)。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。乙二胺四乙酸二鈉含量按式（3）計(jì)算： （3）式中：X3試樣中乙二胺四乙酸二鈉的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；X1試樣中乙二胺四乙酸鹽衍生物計(jì)算所得乙二胺四乙酸二鈉的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；X2試樣中乙二胺四乙酸二鈉鈣的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；292.24乙二胺四乙酸的分子量；336.21乙二胺四乙酸二鈉的分子量；376.21乙二胺四乙酸二鈉鈣的分子量。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)XX果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)XX果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的5%。8 檢出限和定量限本方法的檢出限為0.01 g/kg，定量限為0.03 g/kg。 附 錄A色譜圖A.1 圖A.1為乙二胺四乙酸二鈉衍生物標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖 DAD1 A， Sig=254，4 Ref=off （std10.0ug/mL）min12345