動(dòng)物細(xì)胞工程的主要技術(shù)

1、動(dòng)物細(xì)胞工程的主要技術(shù)第1頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)10分，星期一動(dòng)物細(xì)胞工程概念常用技術(shù)應(yīng)用細(xì)胞學(xué)的方法，按照人們的需要和預(yù)定的設(shè)計(jì)，有目的、有計(jì)劃地保存、改變動(dòng)物細(xì)胞和創(chuàng)造新的動(dòng)物細(xì)胞，進(jìn)而培育成新的物種或者品種的一門科學(xué)技術(shù)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（基礎(chǔ)）動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)第2頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)10分，星期一一動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件（1）營(yíng)養(yǎng)成分：培養(yǎng)液的主要成分有葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。（2）氣體環(huán)境O ：細(xì)胞呼吸消耗CO:調(diào)節(jié)pH值（3）溫度和pH：哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境溫度控制在36.537.5，P

2、h7.27.4。 第3頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)10分，星期一動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程 幼齡動(dòng)物取動(dòng)物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理細(xì)胞培養(yǎng)單個(gè)細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)剪碎組織的目的？胰蛋白酶處理的目的？第4頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)10分，星期一動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無(wú)限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液原代培養(yǎng)胰蛋白酶剪碎細(xì)胞株細(xì)胞系遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程第5頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)10分，星期一有關(guān)概念原代培養(yǎng)：經(jīng)過(guò)濾、離心后將動(dòng)物再接種到無(wú)菌的培養(yǎng)液中，在

3、適宜的條件下進(jìn)行靜止或慢速轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)，這個(gè)過(guò)程成為傳代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。第6頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)10分，星期一有關(guān)概念細(xì)胞株：傳代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到4050代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。 細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無(wú)限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。 細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別： 細(xì)胞株傳代在4050代內(nèi)，遺傳物質(zhì)沒(méi)有改變；細(xì)胞系無(wú)限傳代下去，遺傳物質(zhì)改變

4、。第7頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)10分，星期一有關(guān)概念細(xì)胞貼壁： 培養(yǎng)液中分散的動(dòng)物細(xì)胞，置于適宜的條件下，能夠分裂，這些細(xì)胞貼附在培養(yǎng)瓶上，成為細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)。細(xì)胞的接觸抑制： 當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖的現(xiàn)象。第8頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)10分，星期一相關(guān)問(wèn)題1.為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官和組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官分裂、增殖旺盛2.為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？ 分散成單個(gè)細(xì)胞便于物質(zhì)交換，使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)吸收及代謝廢物排出更容易，利于細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖3.為什么用胰蛋白酶處理？在動(dòng)物組

5、織間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，它們將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來(lái)形成具有一定彈性和韌性的組織和器官，而彈性纖維易被胰蛋白酶催化分解，從而使細(xì)胞分離開。第9頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)10分，星期一相關(guān)問(wèn)題4.培養(yǎng)的細(xì)胞為何貼壁生長(zhǎng)？大多數(shù)組織細(xì)胞不適應(yīng)懸浮生長(zhǎng)，它們必須在固定的表面生長(zhǎng)和分裂5.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成生物個(gè)體？不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體第10頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)10分，星期一二 動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)1.概念：是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成為一個(gè)新的

6、胚胎，這個(gè)新的胚胎始終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。第11頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)10分，星期一單克隆抗體制備流程 英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和德國(guó)科學(xué)家選用小鼠體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞和一種營(yíng)養(yǎng)缺陷型的骨髓瘤細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)材料利用聚乙二醇為融合劑，使兩種細(xì)胞發(fā)生融合。然后利用只有雜交瘤細(xì)胞才能生長(zhǎng)的選擇培養(yǎng)液來(lái)篩選處理過(guò)的細(xì)胞群體。骨髓瘤細(xì)胞在選擇培養(yǎng)液中停止生長(zhǎng)，B淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)也只能存活數(shù)天，因此只有雜交瘤細(xì)胞才可以大量生長(zhǎng)、繁殖。利用這種方法培育得到的雜交瘤細(xì)胞不但可以像腫瘤細(xì)胞那樣無(wú)休止、快速地進(jìn)行分裂增殖而且能像B淋巴細(xì)胞一樣分泌大量特異性抗體。通過(guò)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)得到的這些特異性抗體就是所謂的單克隆抗體。第12頁(yè)，共13頁(yè)，2022年，5月20日，21點(diǎn)10分，星期一問(wèn)題1 為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合？細(xì)胞的同源性越近，融合形成的雜種細(xì)胞越易成活問(wèn)題2 骨髓瘤細(xì)胞是癌細(xì)胞嗎？有無(wú)限增殖能力的細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞，而且具有轉(zhuǎn)移能力的腫瘤細(xì)胞，稱為癌細(xì)胞，所以說(shuō)瘤細(xì)胞不等于癌細(xì)胞。問(wèn)題3 整個(gè)制備過(guò)程為何要經(jīng)過(guò)兩次篩