多指標(biāo)綜合評(píng)分法優(yōu)化更年康顆粒醇提工藝

1、多指標(biāo)綜合評(píng)分法優(yōu)化更年康顆粒醇提工藝【摘要】：目的優(yōu)化更年康顆粒的醇提工藝。方法采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),以芍藥苷、黃芪甲苷含量為評(píng)定指標(biāo),用多指標(biāo)綜合評(píng)分法進(jìn)展數(shù)據(jù)處理,優(yōu)化提取條件。結(jié)果更年康顆粒優(yōu)化醇提工藝為18倍量70%乙醇,分3次回流提取,每次1.5h。結(jié)論該提取工藝合理,有效成分提取效率高。【關(guān)鍵詞】更年康顆粒芍藥苷黃芪甲苷正交實(shí)驗(yàn)綜合評(píng)分法abstrat：bjetivetptiizetheextratintehnlgyfrgengniankanggranules.ethdsanrthgnaltestasadptedinthestudy.thententsfpaeniflrinandas

2、tragalsideereusedasindiesfappraisal.datapressingasarriedutiththeultipleguidelinesgradingethdfrptiizingtheextratinnditin.resultstheptiizedextratintehnlgyfrgengniankanggranulesasshntbe：eighteenfldvluef70%alhlshuldbeaddedt1vluefthegranulesfr3suessiverefluxextratinsith1.5hfeah.nlusintheptiizedextratinte

3、hnlgyasratinalandtheextratinrateftheativepnentsashigh.keyrds：gengniankanggranules；paeniflrin；astragalside；rthgnaltest；gradingethds更年康顆粒是在?景岳全書(shū)?歸腎丸的根底上,根據(jù)辨證施治原理并結(jié)合臨床理論挑選出來(lái)的,由白芍、枸杞子、熟地黃、黃芪、合歡皮、淫羊藿、鉤藤等9味中藥組成,具有滋腎養(yǎng)陰、平肝寧心的成效。主要用于治療婦女更年期潮熱汗出、心煩失眠等病癥。為減少藥物用量及更好地發(fā)揮其成效,通過(guò)查閱文獻(xiàn),將方中的白芍、黃芪、合歡皮、鉤藤4味藥物進(jìn)展乙醇提取,其余藥物進(jìn)

4、展水煎煮提齲本試驗(yàn)就上述4味藥物的醇提工藝,應(yīng)用正交試驗(yàn)法,以芍藥苷、黃芪甲苷含量為指標(biāo),采用綜合評(píng)分法進(jìn)展優(yōu)眩1儀器與試藥l-10advp型高效液相色譜儀(日本島津公司)；spd-6av紫外檢測(cè)器(日本島津公司)；美國(guó)allteh公司500型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；h-2000色譜工作站；電子天平(ettlertledag285)；kq-500e型醫(yī)用超聲清洗器(昆山超聲儀器)。芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)110736-202226)；黃芪甲苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,供含量測(cè)定用,批號(hào)110781-202212)；中藥材購(gòu)自南京市藥材公司,經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室鑒定

5、為符合2022版?中華人民共和國(guó)藥典?規(guī)定藥材。甲醇為色譜純,其余所用試劑均為分析純,均購(gòu)自上?；瘜W(xué)試劑；水為重蒸水(自制)。2方法與結(jié)果2.1正交設(shè)計(jì)方中白芍為君藥,其活性成分為芍藥苷,可溶于醇類；黃芪、合歡皮主要成分為皂苷和多糖類物質(zhì),且這兩局部均為活性成分,工藝中采用醇提取,可兼顧兩局部成分；鉤藤主要活性成分為各種吲哚類生物堿,主要有鉤藤堿、異鉤藤堿、柯諾辛因堿等,其在乙醇中有較好的溶解性,為充分進(jìn)步生物堿的利用率,采用醇回流提齲故根據(jù)方中這4味藥的主要化學(xué)成分的理化性質(zhì),以乙醇為提取溶媒,采用l9(34)正交表進(jìn)展正交設(shè)計(jì),對(duì)乙醇的濃度(b)、用量(a)、提取次數(shù)()、提取時(shí)間(d),

6、用4因素3程度進(jìn)展考察,以芍藥苷、黃芪甲苷含量為考察指標(biāo),進(jìn)展提取工藝最正確參數(shù)確實(shí)定。其提取工藝因素程度設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。按處方配比取處方藥材9份,每份45g,按照因素程度表操作,參加乙醇,加熱回流,過(guò)濾后將所得的濾液減壓濃縮成稠膏。表1因素程度表略2.2考察指標(biāo)的測(cè)定2.2.1hpl法測(cè)定芍藥苷含量色譜條件：采用依利特hypersilds色譜柱(2504.6,5)；流動(dòng)相：甲醇-水(2575)；流速：1l/in；檢測(cè)波長(zhǎng)：230n；柱溫：30。線性關(guān)系考察：精細(xì)汲取0.601g/l芍藥苷對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5l,分別置于5l量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,使?jié)舛确謩e為0

7、.0601、0.1202、0.1803、0.2404、0.3005g/l。分別汲取上述各對(duì)照品溶液20l,進(jìn)樣,按上述色譜條件測(cè)定峰面積值,以峰面積均值(y)為縱坐標(biāo),進(jìn)樣濃度(x)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程：y6223541.78x38695.056,r0.9998(n5)。結(jié)果說(shuō)明,芍藥苷在0.06010.3005g/l范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。含量測(cè)定：取按各提取工藝制備的稠膏約0.2g,精細(xì)稱定,置離心管中,精細(xì)參加稀乙醇20l,稱定重量,超聲處理1h,再稱定重量,用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得芍藥苷供試品溶液。汲取20l,注入液相色譜儀,每個(gè)樣品平行進(jìn)樣2次

8、,以外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算,測(cè)定各樣品中的芍藥苷含量。結(jié)果見(jiàn)表2。2.2.2hpl-elsd測(cè)定黃芪甲苷含量色譜條件：采用依利特hypersilds色譜柱(2504.6,5)；流動(dòng)相：甲醇-水(7921)；流速：1l/in；elsd漂移管溫度：90；霧化氣流速：2.20l/in。線性關(guān)系考察：精細(xì)汲取1.306g/l黃芪甲苷對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5l,分別置于5l量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,使?jié)舛确謩e為0.1306、0.2612、0.3918、0.5224、0.6530g/l。分別汲取上述各對(duì)照品溶液20l,進(jìn)樣,按上述色譜條件測(cè)定峰面積值,以峰面積均值的對(duì)數(shù)值(y)為縱坐

9、標(biāo),進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)值(x)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程：y0.9416x5.7208,r0.9996(n5)。結(jié)果說(shuō)明,黃芪甲苷在2.61213.06g范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。含量測(cè)定：取按各提取工藝制備的稠膏約4g,精細(xì)稱定,加水10l,超聲溶解30in,用水飽和正丁醇振搖提取4次,每次40l,合并正丁醇液,用氨試液充分洗滌2次,每次40l,棄去氨試液,正丁醇液蒸干。殘?jiān)诱麴s水5l使溶解,放冷,通過(guò)d101型大孔樹(shù)脂柱(內(nèi)徑1.5,長(zhǎng)12),以水50l洗脫,棄去水液,再用40%乙醇30l洗脫,棄去40%乙醇洗脫液,繼用70%乙醇50l洗脫,搜集洗脫液,蒸干,用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5l量瓶中

10、,甲醇至刻度,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,注入液相色譜儀,每個(gè)樣品平行進(jìn)樣2次,以外標(biāo)兩點(diǎn)對(duì)數(shù)方程法計(jì)算,測(cè)定各樣品中的黃芪甲苷含量。結(jié)果見(jiàn)表2。2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照l(shuí)9(34)正交設(shè)計(jì)表的條件進(jìn)展實(shí)驗(yàn),分別測(cè)得芍藥苷、黃芪甲苷的含量。將結(jié)果用多指標(biāo)試驗(yàn)全概率方法進(jìn)展數(shù)據(jù)處理,詳細(xì)運(yùn)算及公式相關(guān)符號(hào)的意義可參考文獻(xiàn)1。根據(jù)各指標(biāo)影響作用的大小,本試驗(yàn)按其重要程度之比為12芍藥苷權(quán)重黃芪甲苷權(quán)重0.60.4,計(jì)算p(aj)及各指標(biāo)的p(b?/aj)xij/sj,那么綜合評(píng)分()p(bi)2p(a1)p(b?/a1)p(a2)p(b?/a2)0.6xi1/s10.4xi2/s2。在上述各式中bi為第i號(hào)試

11、驗(yàn),aj為第j個(gè)指標(biāo)。xij表示第j個(gè)指標(biāo)下的第i個(gè)測(cè)定值,以sj表示第j個(gè)指標(biāo)下各次(n次)試驗(yàn)結(jié)果的和。i1,2n；j1,2k。數(shù)據(jù)處理和方差分析見(jiàn)表2、表3。表2正交試驗(yàn)結(jié)果略表3方差分析略注：f0.05(2,2)=19.00,f0.01(2,2)=99.00結(jié)果說(shuō)明,a、b、d對(duì)試驗(yàn)結(jié)果均無(wú)顯著影響。經(jīng)直觀比擬分析,同時(shí)結(jié)合消費(fèi)實(shí)際,綜合比擬,確定最優(yōu)工藝條件為a2b33d2,即18倍量70%乙醇,分3次回流提取,每次1.5h。2.4最正確工藝驗(yàn)證取處方藥材3份,根據(jù)挑選得到的提取工藝a2b33d2,進(jìn)展正交驗(yàn)證試驗(yàn),得芍藥苷含量為1.51%,rsd1.51%(n3)；黃芪甲苷含量為0

12、.061%,rsd1.97%(n3)。可見(jiàn),按優(yōu)化工藝進(jìn)展提取,芍藥苷、黃芪甲苷均獲得較理想的結(jié)果。說(shuō)明該工藝穩(wěn)定可行。3討論當(dāng)處方中有多味藥材時(shí),其制劑工藝的評(píng)價(jià)如采用單一指標(biāo)那么代表性較差,用不同種類的成分作為評(píng)判指標(biāo)其結(jié)果才有較廣泛的代表性。但由于不同藥材中的成分含量有時(shí)不在同一數(shù)量級(jí),直接累加那么使數(shù)量級(jí)大的對(duì)結(jié)果的奉獻(xiàn)大,而小的奉獻(xiàn)小,常不符合組方原那么及治那么。用多指標(biāo)正交試驗(yàn)進(jìn)展工藝優(yōu)選時(shí),首先需解決指標(biāo)間量綱不一致和指標(biāo)間的相容與否的問(wèn)題,然后需針對(duì)指標(biāo)間的重要性差異給出各指標(biāo)權(quán)重,綜合評(píng)分后再進(jìn)展統(tǒng)計(jì)分析。在應(yīng)用此法時(shí),如何設(shè)置指標(biāo)的權(quán)重,需根據(jù)詳細(xì)情況詳細(xì)分析。本方劑需進(jìn)展醇提的各味藥物中因白芍為本方君藥,同時(shí)黃芪的皂苷類成分在療效上都將發(fā)揮重要作用,故將二者的權(quán)重定為0.60.4。在進(jìn)展芍藥苷含量測(cè)定時(shí),由于本處方醇提局部含有4味藥,樣品中含有一些極性小的物質(zhì)在樣品測(cè)定時(shí)不易從色譜柱上洗脫,連續(xù)進(jìn)樣易造成芍藥苷位置附近有雜質(zhì)干擾,甚至?xí)霈F(xiàn)肩峰,影響其別離效果,因此,提取時(shí)需對(duì)樣品進(jìn)展凈化處理,如可以采用乙醚進(jìn)展脫脂處理,還可以在樣品測(cè)定時(shí)經(jīng)常用乙腈或純甲醇對(duì)色譜柱進(jìn)展沖洗,以除去弱極性物質(zhì),保證樣品的重現(xiàn)