酒精性肝損傷造模

1、酒后飲綠茶對(duì)小鼠腎功能影響的實(shí)驗(yàn)性研究李佳陳路軍陳潔徐立思齊慧娟陸妙君指導(dǎo)老師：黃品賢（上海中醫(yī)藥大學(xué)03中西（七）上海201203）摘要目的觀察給最佳酒醉狀態(tài)的小白鼠灌茶對(duì)腎功能的影響。方法檢測(cè)給小白鼠0.15山1/108白酒后20山皿灌入低、中、高濃度茶、解酒陽(yáng)性對(duì)照藥枳棋子3O.20ml/10g,連續(xù)7天后血肌酐、血尿素蛋及尿蛋白含量。結(jié)果1.高中濃度茶組、模型組的尿蛋白與正常組相比有顯著差異，P0.0502.各組生存曲線比較的Log-rank檢驗(yàn)結(jié)果：x法20.39,P熊率亡死1002結(jié)果2.1.各組小鼠實(shí)驗(yàn)中的死亡情況和各組生存曲線比較的Log-rank檢驗(yàn)。見(jiàn)表2。表2各組小鼠實(shí)驗(yàn)

2、中的死亡情況組別實(shí)驗(yàn)第1第2天第3天第4天第5天第6天第7天死亡率(%).、乙刖天正常7模型3陽(yáng)性對(duì)照5高濃度茶2中濃度茶2低濃度茶2合計(jì)10523109434656.2注:各組間有顯著差異:P0.05.表3各組生存曲線比較的Log-rank檢驗(yàn)結(jié)果組別n平均生存時(shí)間(天)95%可信區(qū)間生存率(%)正常17696.057.1388.24組模型175.474.196.7564.71組陽(yáng)性對(duì)照174.223.015.4333.33組高濃度茶18

3、4.393.075.7127.78組中濃度茶183.442.224.6127.78組低濃度茶184.112.965.2727.78組合計(jì)10544.34-Log-rank檢驗(yàn)結(jié)果：x2=20.39，df=5，P=0.0011。圖2各組動(dòng)物生存曲線的比較正常模型組枳棋子組高濃度茶組中濃度茶組低濃度茶組圖2各組動(dòng)物生存曲線的比較正常模型組枳棋子組高濃度茶組中濃度茶組低濃度茶組組另n尿蛋白X組另n尿蛋白XS正常組51.320.51#模型組50.730.17*枳棋子組51.010.39高濃度茶組50.720.27*中濃度茶組50.640.13*低濃度茶組51.320.65#合計(jì)300.950.392.

4、2各組小鼠尿液中尿蛋白含量比較見(jiàn)表4。表4各組小鼠尿液中尿蛋白含量比較（umol/l）注：*表示與正常組比較P0.05；#表示與模型組比較p0.052.3各組小鼠血肌酐（Cr）含量比較見(jiàn)表5表5各組血肌酐的比較（umol/L）組另nCrXS正常組434.2527.96模型組217.500.71枳棋子組00.000.00高濃度茶組427.7512.84中濃度茶組00.000.00低濃度茶組220.500.71合計(jì)1227.0017.37注：n為0，說(shuō)明該組小鼠血肌酐值不在測(cè)定范圍，沒(méi)有測(cè)出來(lái)。根據(jù)專(zhuān)業(yè)知識(shí)得到血肌酐應(yīng)該是服從正態(tài)分布的資料，但是，本次試驗(yàn)有的組別因未能測(cè)到血肌酐，同時(shí)，各組樣本量

5、比較少，而且個(gè)體差異也比較大，經(jīng)方差分析得出各組間無(wú)顯著差異。僅作參考。2.4腎臟病理切片結(jié)果：正常小鼠腎組織（10X10）正常小鼠腎組織（10X40）高倍鏡下腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)基本正常，間低倍鏡下腎組織結(jié)構(gòu)完整，腎小球、腎小管未見(jiàn)異常，間質(zhì)血管可見(jiàn).1一低濃度茶組小鼠腎組織圖（10X10）質(zhì)未見(jiàn)炎性充血低倍鏡下腎小球、腎小管未見(jiàn)明顯病變、但間質(zhì)血管擴(kuò)張充血明顯低濃度茶組小鼠腎組織圖（10X40）中濃度茶組小鼠腎組織圖（10X10）低倍鏡下腎組織結(jié)構(gòu)完整，腎小球、腎小管未見(jiàn)明顯病理變化，間質(zhì)未見(jiàn)明顯充中濃度茶組小鼠腎組織圖（10X40）高濃度茶組小鼠腎組織圖（10X10）與中濃度茶組類(lèi)似，未見(jiàn)

6、明顯差異高倍鏡下見(jiàn)腎小球有較多量紅細(xì)胞漏出，腎小管上皮未見(jiàn)水腫、間質(zhì)血管擴(kuò)張充血較明顯，可見(jiàn)有炎癥反應(yīng)，但間質(zhì)未見(jiàn)纖維化高倍鏡下見(jiàn)腎小球有少量紅細(xì)胞漏出，腎小管未見(jiàn)明顯病變、間質(zhì)血管少量充血，未見(jiàn)纖維化。高濃度茶組小鼠腎組織圖（10X40）與中濃度茶組類(lèi)似，未見(jiàn)明顯差異枳棋子組小鼠腎組織圖（10X10）低倍鏡下腎組織結(jié)構(gòu)基本完整，腎小球、腎小管未見(jiàn)明顯病理變化，間質(zhì)少量充血枳棋子組小鼠腎組織圖（10X40）高倍鏡下見(jiàn)腎小球有少量紅細(xì)胞漏出、間質(zhì)血管未見(jiàn)明顯充血，間質(zhì)未見(jiàn)纖維化模型組小鼠腎組織圖（10X10）高倍鏡下見(jiàn)腎小球有較多量紅細(xì)胞漏出，間低倍鏡下腎小球、腎小管未見(jiàn)明顯病變、但間質(zhì)血管擴(kuò)張

7、充血較明顯模型組小鼠腎組織圖（10X40）質(zhì)血管擴(kuò)張充血較明顯，可見(jiàn)有炎癥反應(yīng)，間質(zhì)未見(jiàn)纖維化（7）2.5飲酒人群流行病學(xué)問(wèn)卷調(diào)查結(jié)果：調(diào)查總?cè)藬?shù)138人，喝酒人135人。喝酒人群中用茶來(lái)解酒的有52人，占38.52%。知道茶能解酒的有46人，占喝酒人群的34.07%，其他解酒方式有催吐、吃水果、解酒藥、吃飯、睡覺(jué)、喝飲料、休息，其中，催吐13.04%；吃水果解酒18.12%；解酒藥5.80%；其他28.99%。真正了解飲酒后用茶解酒是否對(duì)腎臟有損傷的人為0%。3討論從各組小鼠實(shí)驗(yàn)中的死亡情況來(lái)分析：實(shí)驗(yàn)的前4天，小白鼠死亡率較高，可能與其體質(zhì)有關(guān)，個(gè)體差異較大，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇小鼠，生命力較脆弱

8、，對(duì)高度酒精的耐受能力較差?？瞻捉M的死亡率又明顯低于其他各組，也與所給藥物對(duì)小鼠的作用有關(guān)。通過(guò)各組生存曲線比較的Log-rank檢驗(yàn)結(jié)果可說(shuō)明各組的生存曲線有顯著的差異，飲酒后無(wú)論飲高、中、低濃度的茶，都可導(dǎo)致小鼠的死亡，尤其是中濃度組的平均生存時(shí)間低于其他任何組別，其次是低濃度組。這說(shuō)明酒后飲中、低濃度的茶對(duì)小鼠的健康很不利，而高濃度茶組的生存時(shí)間相對(duì)于中、低濃度組較長(zhǎng)一些，這一結(jié)果與病理切片所得結(jié)果的判斷是一致的。在造模方面，我們查到的文獻(xiàn)中，小鼠多用于做酒精中毒的急性實(shí)驗(yàn)，其實(shí)驗(yàn)周期多為1-3天，大鼠多用于做慢性酒精毒理實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)周期多為1-4個(gè)月。我們的實(shí)驗(yàn)周期為八天，介于兩者之間，

9、由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間及經(jīng)費(fèi)的限制條件，我們選擇小鼠造模，而小鼠耐受酒精的能力較差是本實(shí)驗(yàn)中死亡率高的重要原因。由尿蛋白按檢測(cè)結(jié)果得出：正常組與陽(yáng)性組、低濃度組無(wú)差別；中、高濃度組，造模組低于正常組。根據(jù)這一結(jié)果，可推測(cè)：1.適量飲酒有助于降低蛋白在腎臟的濾過(guò)率，酒后飲用濃茶，此效應(yīng)更顯著；2.低濃度茶與枳棋子一樣，具解酒的功效，中、高濃度茶無(wú);3.飲酒及酒后飲中、高濃度茶有利尿作用，但小便清長(zhǎng)，排出的雜質(zhì)減少（由尿蛋白及尿量推測(cè)，尚需實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明）。3.3按病理切片結(jié)果得出：飲低濃度茶和解酒的枳棋子水煎劑對(duì)腎臟有害無(wú)益，我們推測(cè)其損傷機(jī)制如下：酒精首先在肝臟內(nèi)進(jìn)行代謝，在氧化酶的作用下先是被氧化為乙

10、醛，進(jìn)而被氧化為乙酸，乙酸又可進(jìn)一步被氧化為二氧化碳和水，再分別經(jīng)腎和肺排出。茶的主要成分茶堿有利尿作用，大量茶堿更能迅速發(fā)揮利尿作用，促使尚未分解的乙醛過(guò)早地進(jìn)入腎臟，而乙醛對(duì)泌尿系統(tǒng)有很大的損害作用。有關(guān)報(bào)道指出，茶中的有效成分茶多酚確實(shí)可以用于治療慢性腎臟的疾病。8-9我們推測(cè)：中高濃度茶中的茶多酚含量較多，能有效的保護(hù)腎臟使其受到損傷的程度降低，但沒(méi)有很好地解酒功效。但由于實(shí)驗(yàn)周期短，各組小鼠腎臟均未出現(xiàn)纖維化。結(jié)論根據(jù)尿蛋白、實(shí)驗(yàn)小鼠的生存曲線分析、腎臟的病理結(jié)果的一致性得出：1.酒后飲茶均可導(dǎo)致小鼠的死亡，但是酒后高濃茶可降低蛋白在腎小球的濾過(guò)率，對(duì)腎臟的損害作用最小。2酒后飲淡茶

11、及陽(yáng)性解酒藥枳棋子能起到一定解酒作用，但對(duì)腎臟有明顯的損害。但本次實(shí)驗(yàn)由于死亡率高致樣本含量不夠，確切的結(jié)論有待繼續(xù)研究。建議過(guò)量飲酒后,不宜使用茶及能加速酒精不完全代謝產(chǎn)物排出的解酒藥，會(huì)對(duì)腎臟造成損傷。但本次試驗(yàn)由于死亡率高致樣本含量不夠，確切的結(jié)論有待繼續(xù)研究。存在問(wèn)題和改進(jìn)措施實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇小鼠，生命力較脆弱，對(duì)高度酒精的耐受能力較差。在實(shí)驗(yàn)中的死亡率較高。建議以后用大鼠進(jìn)行此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)中一些可能影響結(jié)果、引起死亡的因素，如：學(xué)生灌胃技術(shù)不熟練引起死亡、群養(yǎng)的老鼠生活環(huán)境溫暖，而代謝籠中的老鼠可能由于孤單、環(huán)境寒冷、酒精的作用，導(dǎo)致代謝籠中有老鼠死亡。實(shí)驗(yàn)第一天灌胃后，見(jiàn)死亡率高，我們

12、考慮到可能是酒量太大，后面幾天的酒量按0.10ml/10g灌胃。預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)間過(guò)短，只測(cè)出酒精的最佳致醉量，未考慮到造模是否穩(wěn)定，小鼠是否能長(zhǎng)時(shí)間（實(shí)驗(yàn)周期為八天）耐受酒精，以至于出現(xiàn)較高的死亡率。陽(yáng)性對(duì)照組的死亡率也很高，這與藥物的來(lái)源、藥物的制備是否科學(xué)有關(guān)。各個(gè)濃度的茶的濃度界定不是很精確，每天制備的環(huán)境、條件有差異，也可能造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偏差。應(yīng)該選用倍比稀釋的方法更為科學(xué)。實(shí)驗(yàn)中代謝籠的數(shù)量有限，只有三十個(gè)，導(dǎo)致最終的實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)的指標(biāo)的樣本含量相對(duì)較少，使結(jié)果的可信度降低。代謝籠的網(wǎng)眼過(guò)大，使第一天和第二天搜集到的尿樣中混有食物殘?jiān)瑢?dǎo)致搜集的尿液無(wú)法用于檢測(cè)。在最后一天搜集尿樣時(shí)，我們采取

13、了給小鼠禁食的方法，收集到了較純凈的尿液，符合檢驗(yàn)樣本的標(biāo)準(zhǔn)。此外，有老鼠從代謝籠中逃跑的現(xiàn)象。建議實(shí)驗(yàn)前對(duì)代謝籠的結(jié)構(gòu)進(jìn)行調(diào)整。小鼠的血量小，加上經(jīng)過(guò)8天的酒精試驗(yàn)，小鼠本身的狀態(tài)不穩(wěn)定，取血時(shí)遇到一定的困難，腹主動(dòng)脈較細(xì)小，取血量少，之后采用斷頭處死取頸動(dòng)脈血，采集到的血量也少，在1ml左右。送檢時(shí)離心血漿量只有幾百微升，以至于血肌酐和血尿素氮這兩項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)數(shù)據(jù)很不理想。此外，曙光醫(yī)院檢驗(yàn)設(shè)備的測(cè)定范圍是以人的指標(biāo)范圍為標(biāo)準(zhǔn)的，小鼠的血肌酐和尿素氮的測(cè)定，部分不在此范圍，對(duì)我們最終結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析有影響。標(biāo)記小鼠不夠清楚，用苦味酸做的黃色標(biāo)記最后模糊掉了，具體代表號(hào)碼全然不知，之后我們改用

14、膠布貼在老鼠身上作標(biāo)記，但老鼠在代謝籠中活動(dòng)時(shí)，會(huì)將膠布蹭掉。我們選取的酒精灌胃劑量可能正好是健康飲酒的范圍，不僅對(duì)腎臟沒(méi)有損傷，反而還起到一定的保護(hù)作用。參考文獻(xiàn)：1孫法光，王宏.枳棋飲水提取物對(duì)小鼠急性酒精中毒的保護(hù)作用.承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，23（1）：81-82梁賅，詹莉，汪暉，等人參和枳棋子對(duì)小鼠乙醇急性中毒保護(hù)作用及其機(jī)制研究醫(yī)學(xué)新知雜志2006，16（2）于斌如，湯銀紅枳棋子的研究進(jìn)展時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥2004，15（9）時(shí)濤，王曉玲，陳振德，等枳棋子化學(xué)成分及其藥理活性研究進(jìn)展中藥材2006，29（5）5張健，張惟廣，謝非飲酒、醉酒及解酒釀酒2001，28（9）5史紅霞，張國(guó)慶，

15、丁書(shū)文解酒中藥緩解長(zhǎng)期白酒灌胃致大鼠生殖系統(tǒng)影響的作用研究浙江中醫(yī)雜志2006，41（9）9：529-531王會(huì)玲，張金元，等馬兜鈴酸對(duì)大鼠腎功能和腎臟組織病理的影響中藥新藥與臨床藥理2006，17（9）5：331-335Shao-huaSHI,Shu-senZHENG,Chang-kuJIA,ectInhibitoryeffectofteapolyphenalsontransforminggrowthfactor-B1expressioninratwithcyclosporineA-inducedchronicnephrotoxicityShiSHetal/ActaPharmacalSin2003Jan;25（1）:98-103楊鈞，張藝芳解酒茶長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)研究醫(yī)學(xué)信息2003，9（16）9：525-527致