自身抗體檢測及應(yīng)用

1、自身抗體的檢測及意義自身免疫(autoimmunity) 免疫系統(tǒng)針對自身成分發(fā)生免疫應(yīng)答反應(yīng) 出現(xiàn)自身抗體或致敏淋巴細胞的現(xiàn)象自身抗體(autoantibody) 針對自身組織、器官、細胞及其成分的抗體。自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID) 自身免疫反應(yīng) 導致組織器官損傷或功能障礙所致疾病。免疫系統(tǒng)紊亂 幾個概念 自身抗體自身免疫性疾病的重要標志高滴度存在于自身免疫性疾病患者與疾病的活動性相關(guān)性參與免疫病理性改變損傷常用的檢測方法間接免疫熒光法（IIF）ELISA免疫印跡法（Western-blot）酶免疫斑點法常檢測的自身抗體類風濕因子（RF）抗核抗體（ANA）抗

2、可提取性核抗原抗體（ENA）抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）抗環(huán)瓜氨酸抗體（CCP）抗心磷脂抗體（ACA） 類風濕因子 （RHEUMATOID FACTOR, RF） 抗變性IgG Fc的自身抗體，主要類型是IgM型 檢測方法： 1. 膠乳顆粒凝集實驗 定性、半定量，敏感性和特異性不高，測定IgM-RF 2. 速率散射比濁法（ARRAY、IMAGE） 定量、準確、快速，測定IgM-RF 3. ELISA 定量、準確，可測定不同類型的RF 臨床應(yīng)用： （1）RF在多種自身免疫性疾病患者中均可被檢出。疾病陽性率%RA79SLE30SS95Sclerosis80PM80MCTD25（2）RF滴度與R

3、A患者臨床表現(xiàn)呈正相關(guān)，IgM-RF效價80IU/ml并伴有嚴重關(guān)節(jié)功能障礙時通常提示患者預后不良?？购丝贵w（ANTINUCLEAR ANTIBODY，ANA）真核細胞（如HEp-2細胞、肝細胞）的各種細胞核成分為靶抗原檢測的自身抗體的總稱。ANA概念指抗細胞核成分（DNA，RNA，蛋白質(zhì)和酶）的抗體。廣義：抗核酸（Nucleic acid）和核蛋白（Nucleoprotein）抗體的總稱某些核抗原成分在核仁和胞漿內(nèi)比核質(zhì)內(nèi)更豐富ANA中性粒細胞DNP(DNA-Histone)+抗DNP+補體均質(zhì)體LE細胞LE細胞：并非SLE特有，PM、SD、RA、SS等結(jié)締組織病，藥物過敏，慢活肝等亦可陽性

4、?？笵NP取代LE細胞的檢測+間接免疫熒光法+抗原HEp-2細胞肝組織切片待檢抗體（血清）抗原抗體第二抗體間接免疫熒光法HEp-2細胞肝組織切片熒光標記抗體病人血清（待檢抗體）分類和命名以首先檢出該抗體的患者名字命名，如抗Sm、 抗Sa 抗體等；以相關(guān)疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B 抗體等；以抗原的部位命名，如抗核仁抗體、抗線粒體抗體、抗核膜抗體、抗細胞漿抗體等；以抗原的化學性質(zhì)進行分類命名，如抗DNA、抗RNP、抗組蛋白抗體等?？购丝贵w檢測方法間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence, IIF）酶免疫斑點法 ELISA 免疫印跡法 （West

5、ern-blot） ANA譜條法ENA斑點法 細胞核 細胞漿 細胞骨架 細胞周期 均質(zhì)型 核糖體型 肌蛋白型 中心體型 斑點型 線粒體型 波形纖維蛋白型 紡綞體型 核仁型 高爾基體型 細胞角蛋白型 紡綞絲型 著絲點型 溶酶體型 原肌球蛋白型 中間體型 周邊型 顆粒型 紐帶蛋白型 PCNA型 核點型(dots) 結(jié)蛋白(橋粒)型 IIF檢測ANA熒光染色模型斑點型（nRNP/Sm） 高滴度的抗U1-nRNP為MCTD的特征?？筍m抗體對SLE具有高度特異性。斑點型（SSA/SSB） 抗SSA最常出現(xiàn)于SS及新生兒紅斑狼瘡 （100%）?？筍SB抗體幾乎僅見于女性，可出現(xiàn)于SS和SLE。均質(zhì)型 抗

6、dsDNA抗體 抗組蛋白抗體(histone)抗ssDNA抗體 抗核小體抗體(nucleosome)抗dsDNA抗體SLE特異性抗體，與病情活動度相關(guān)。周邊型 可見于膠原病、PBC、CAH等患者 核點型（DOTS） 見于SLE、SS、PBC、風濕病。 抗著絲點型 PSS局限型標志抗體。抗PM-Scl（PM-1）抗體 見于重疊綜合征（多發(fā)性肌炎PM /皮肌炎 DM / 彌漫性PSS ） 抗核糖體P蛋白（rib-P）抗體抗線粒體抗體（AMA）SLE標志抗體原發(fā)性膽汁性肝硬化標志抗體抗Jo-1抗體抗高爾基體抗體多發(fā)性肌炎（PM）標志抗體偶見于SLE和SS抗肌動蛋白抗體見于自身免疫性慢性活動型肝炎 抗

7、ENA抗體譜ENA (extractable nuclear antigen)： 可提取核抗原的總稱臨床常檢測的抗ENA抗體譜主要包括： 抗Sm 抗U1-RNP 抗SSA 抗SSB 抗Jo-1 抗Scl-70 抗rib-P蛋白 檢測方法 雙向免疫擴散（ID） 對流免疫電泳（CIE） 免疫印跡法（Western-blot） ELISA 酶免疫斑點法 免疫印跡法 SDS電泳轉(zhuǎn)移電泳酶免疫檢測 是一組以人中性粒細胞胞漿成分為靶抗原，與臨床多種小血管炎性疾病密切相關(guān)的自身抗體，對系統(tǒng)性血管炎、炎癥性腸病等疾病的診斷與鑒別診斷具有重要意義。 抗中性粒細胞胞漿抗體（anti-neutrophil cyto

8、plasmic autoantibodies, ANCA） 熒光染色型 靶抗原 胞漿型(cANCA) 蛋白酶3（PR3） 殺菌/通透性增高蛋白（BPI） 核周型(pANCA) 髓過氧化物酶（MPO）組織蛋白酶G（Cath-G）乳鐵蛋白（LF）白細胞彈性蛋白酶（HLE） 非典型型(aANCA)兼有兩種特性 ANCA熒光染色型與靶抗原周邊型抗中性粒細胞胞漿抗體（pANCA）主要見于炎癥性腸病（潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩?。┌麧{型抗中性粒細胞胞漿抗體(cANCA)主要見于Wegeners肉芽腫及微小多動脈炎 ANCA臨床應(yīng)用 髓過氧化物酶（MPO）與顯微鏡下多血管炎、壞死性新 月體型腎小球腎炎、過敏性肉芽

9、腫性血管炎相關(guān)、殺菌/通透性增高蛋白（BPI）主要見于肺部炎癥性疾病 并與長 期慢性綠膿桿菌感染有一定關(guān)系 蛋白酶3（PR3）與Wegeners肉芽腫（WG）密切相關(guān)。 僅cANCA診斷WG的特異性大于90%，聯(lián)合PR3 可超過95%， 活動期幾乎100%陽性。 組織蛋白酶G (Cath-G) 白細胞彈性蛋白酶(HLE)乳鐵蛋白(LF)可見于SLE、IBD、PBC、PSC等 AKA主要見于RA，陽性率36%59%，特異性95%99%，其出現(xiàn)可以先于臨床表現(xiàn)；高滴度可預示較嚴重的RA類型?？菇堑鞍卓贵w（AKA） 一組針對含有磷脂結(jié)構(gòu)抗原物質(zhì)的自身抗體，主要包括抗心磷脂抗體、抗磷脂酸抗體和抗磷脂酰

10、絲氨酸抗體。類型：IgG、A、M型，IgG型最常見，其次是IgM型，IgA型與自身免疫性疾病的關(guān)系較小?？沽字贵w（anti-phospholipid antibody, APLA）檢測方法： 常用ELISA臨床應(yīng)用：在SLE中總陽性檢出率達70%80%，與病情活動顯著相關(guān)；ACA陽性者發(fā)生血管炎、溶血性貧血、心臟及中樞神經(jīng)精神系統(tǒng)損傷的幾率明顯。 在RA患者陽性率為33%49%。 ACA陽性是腦出血及腦梗塞的危險因素。 與反復自然流產(chǎn)和胎兒發(fā)育遲緩有一定的相關(guān)性 部分自身免疫性疾病中 自身抗體的檢出率自身免疫性疾病ANA陽性率（%）SLE80100MCTD95100RA2040PSS8595

11、PM/DM3050SS7080潰瘍性結(jié)腸炎26慢性活動性肝炎3040其它風濕病2050ANA在自身免疫性疾病中的檢出率 疾病類型 抗原類型陽性率%SLE dsDNA 3090 U1-nRNP1540 Sm530 SSA2060 SSB1020 PCNA3 核糖體（rib）520 心磷脂2040 新生兒LE SSA 100藥物誘導LE 組蛋白 95 單鏈DNA80系統(tǒng)性紅斑狼瘡 (SLE) 抗原類型陽性率（%) U1-nRNP 95100 單鏈DNA 2050混合性結(jié)締組織?。∕CTD） 抗原類型 陽性率（%） IgM-RF 6590抗角蛋白抗體（AKA） 3659 單鏈DNA 8 組蛋白 少見

12、類風濕性關(guān)節(jié)炎（RA）抗原類型陽性率（%） SSA 4095 SSB 4095 ssDNA 3060 唾液腺流出道 4060 RF 6080原發(fā)性干燥綜合征（SS）PSS類型相對應(yīng)的抗原 陽性率（%）彌漫型 原纖維蛋白 510PM-Scl（PM-1）3Scl-702575RNA多聚酶4局限型 著絲點 8095進行性系統(tǒng)性硬化癥（PSS） 抗原類型陽性率（%） PM-Scl（PM-1） 8 Jo-1 2535 Mi-1 10 Mi-2 5 Ku（重疊綜合征） 3055 單鏈DNA 4050 PL-7 4 PL-12 3多發(fā)性肌炎/皮肌炎(PM/DM)自身免疫性慢性活動性肝炎(AIH)抗原類型陽性

13、率（%） 肌動蛋白（Actin）4090 ANA(板層素，SSA等) 3040 肝腎微粒體（LKM-1） 7可溶性肝抗原（SLA） 100 線粒體2型（AMA-M2） 510 線粒體9型（AMA-M9） 10原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)抗原類型陽性率（%）線粒體2型（M2） 95線粒體4型（M4） 55線粒體8型（M8） 55線粒體9型（M9） 3585核點 30板層素 2 懷疑SLE，怎么辦？問題常規(guī)檢測程序ANA篩選 ENA抗體譜抗胞漿型抗體鑒定其它自身抗體免疫球蛋白、補體等檢測+（） 95%99%可排除SLE SLE治療緩解 病情特重（大量IC沉積消耗抗體）（）低滴度 常見于RA等其它自身免疫性疾病高滴度可