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文檔簡介
1、一、差速離心法與密度梯度離心法1差速離心法(1)概念:差速離心主要是采取逐漸提高離心速率分離不同大小顆粒的方法。(2)原理:在分離細(xì)胞中的細(xì)胞器時,將細(xì)胞膜破壞后,形成由各種細(xì)胞器和細(xì)胞中其他物質(zhì)組成的勻漿,將勻漿放入離心管中,采取逐漸提高離心速率的方法分離不同大小的細(xì)胞器。(3)具體操作:起始的離心速率較低,讓較大的顆粒沉降到管底,小的顆粒仍然懸浮在上清液中。收集沉淀,改用較高的離心速率離心上清液,將較小的顆粒沉降,以此類推,達(dá)到分離不同大小顆粒的目的。2密度梯度離心法(1)概念:密度梯度離心法又稱為區(qū)帶離心法,可以同時使樣品中幾個或全部組分分離,具有良好的分辨率。(2)原理:不同顆粒之間存
2、在沉降系數(shù)差時,在一定離心力作用下,顆粒各自以一定速度沉降,在密度梯度不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法。(3)操作:離心時先將樣品溶液置于一個由梯度材料形成的密度梯度液體柱中,離心后被分離組分以區(qū)帶層分布于梯度柱中。3密度梯度離心法和差速離心法的區(qū)別(1)差速離心法是用不同強(qiáng)度的離心力使具有不同質(zhì)量的物質(zhì)分級分離,密度梯度離心中單一樣品組分的分離是借助于混合樣品穿過密度梯度層的沉降或上浮來達(dá)到的。(2)差速離心用兩個甚至更多的轉(zhuǎn)速,而密度梯度離心只用一個離心轉(zhuǎn)速。(3)差速離心是適用于混合樣品中各沉降系數(shù)差別較大組分,而密度梯度離心的物質(zhì)是密度有一定差異的。二、熒光標(biāo)記法與同位素標(biāo)記法1同位素標(biāo)記法(
3、1)同位素的概念:在同一元素中,質(zhì)子數(shù)相同、中子數(shù)不同的原子為同位素,如16O與18O,12C與14(2)同位素的性質(zhì):同位素的物理性質(zhì)可能有差異,但組成的化合物化學(xué)性質(zhì)相同。(3)同位素標(biāo)記法:用物理性質(zhì)特殊的同位素來標(biāo)記化學(xué)反應(yīng)中原子的去向,就是同位素標(biāo)記法。(4)同位素標(biāo)記法的應(yīng)用:同位素標(biāo)記可用于示蹤物質(zhì)的運(yùn)行和變化規(guī)律。通過追蹤同位素標(biāo)記的化合物,可以弄清楚化學(xué)反應(yīng)的詳細(xì)過程。(5)常用的同位素的類型:生物學(xué)研究中常用的同位素有的具有放射性,如14C、32P、3H、35S等;有的不具有放射性,是穩(wěn)定同位素,如15N、18O2熒光標(biāo)記法 生物材料熒光標(biāo)記,就是一種生物材料可以發(fā)出熒光,
4、那么就可以用它與另外一種物質(zhì)結(jié)合在一起,因?yàn)樗梢园l(fā)出熒光,可以根據(jù)熒光出現(xiàn)的位置和亮度看另外一種物質(zhì)所在的位置或者那種物質(zhì)有多少。3同位素標(biāo)記技術(shù)與熒光標(biāo)記技術(shù)的區(qū)別同位素標(biāo)記技術(shù),標(biāo)記的是元素,可出現(xiàn)在不同化合物中,不會消失;熒光標(biāo)記技術(shù)一般標(biāo)記的是某種特定生物大分子,該分子分解則無熒光顯現(xiàn);兩者均可用相關(guān)儀器檢測追蹤。1觀察細(xì)胞器的亞顯微結(jié)構(gòu)使用的工具和分離細(xì)胞器常用的方法分別是()A光學(xué)顯微鏡、同位素示蹤法B電子顯微鏡、同位素示蹤法C放大鏡、差速離心法D電子顯微鏡、差速離心法解析:選D。光學(xué)顯微鏡下觀察到的為顯微結(jié)構(gòu),同位素示蹤法用于標(biāo)記化學(xué)元素的來源去向,亞顯微結(jié)構(gòu)使用的工具是電子顯
5、微鏡,分離細(xì)胞器常用的方法為差速離心法,D正確。2下列經(jīng)典實(shí)驗(yàn)與所用方法的對應(yīng)關(guān)系,錯誤的是()A小鼠細(xì)胞和人細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)熒光標(biāo)記法B探究光合作用釋放的O2的物質(zhì)來源同位素標(biāo)記法C研究種群數(shù)量的變化趨勢模型建構(gòu)法DDNA復(fù)制方式的證實(shí)差速離心法解析:選D。小鼠細(xì)胞和人細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用了熒光標(biāo)記法,A正確;魯賓和卡門用18O標(biāo)記水,證明光合作用所釋放的O2全部來自水,B正確;研究種群數(shù)量的變化趨勢應(yīng)用了模型建構(gòu)法,C正確;DNA的復(fù)制為半保留復(fù)制,該結(jié)論是通過密度梯度離心的方法得出的,D錯誤。3檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因采用的方法是()A抗原抗體雜交法B蛋白質(zhì)鑒定法CmR
6、NA雜交法D放射性同位素標(biāo)記的探針解析:選D。檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因采用的方法是DNA分子雜交技術(shù)。即將轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA提取出來,在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作標(biāo)記,以此作為探針,使探針與基因組DNA雜交,如果顯現(xiàn)出雜交帶,就表明目的基因已插入染色體DNA中,故D項(xiàng)正確,A、B、C項(xiàng)錯誤。4如圖是動植物細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu)模式圖。請據(jù)圖分析:(1)比較該圖A、B兩部分,在A、B細(xì)胞中都存在,且含有核酸的細(xì)胞器有 (填標(biāo)號);若在高倍顯微鏡下,用B作實(shí)驗(yàn)材料觀察是否適合? ,原因是 。(2)若B是低等植物細(xì)胞,其細(xì)胞質(zhì)中的細(xì)胞器除圖中所示外,還應(yīng)有 (
7、填名稱);若B是藍(lán)細(xì)菌細(xì)胞,其細(xì)胞質(zhì)中的細(xì)胞器則只有 。(3)在B細(xì)胞內(nèi)可以同時進(jìn)行光合作用和細(xì)胞呼吸而互不干擾,這種現(xiàn)象反映了生物膜系統(tǒng)的 功能。(4)科學(xué)家設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn):將一個變形蟲的核取出移植到正常的去核變形蟲中,經(jīng)過一個細(xì)胞分裂周期,觀察到分裂為兩個子代變形蟲,若想探究新形成的核膜中有沒有來自舊核膜的成分,可用什么方法追蹤? 。解析:(1)在A、B細(xì)胞中都存在,且含有核酸的細(xì)胞器是核糖體和線粒體,即;由于葉綠體的綠色會影響到對線粒體的觀察,因此B不適合在高倍顯微鏡下用于觀察線粒體。(2)若B是低等植物細(xì)胞,其細(xì)胞中還應(yīng)該含有中心體;藍(lán)細(xì)菌是原核細(xì)胞,只有核糖體一種細(xì)胞器。(3)在B細(xì)胞內(nèi)可以同時進(jìn)行光合作用和細(xì)胞呼吸而互不干擾,這種現(xiàn)象反映了生物膜系統(tǒng)的將各種細(xì)胞器分隔開、區(qū)域化,保證生命活動高效有序進(jìn)行功能。(4)科學(xué)家設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn):將一個變形蟲的核取出移植到正常的去核變形蟲中,經(jīng)過一個細(xì)胞分裂周期,觀察到分裂為兩個子
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