藥物分析：維生素類藥物的分析課件

1、維生素類藥物的分析維生素類藥物的分析2022/9/262本章要求掌握不同維生素的結(jié)構(gòu)特點和主要性質(zhì)掌握維生素A、B、C、E的主要分析方法了解維生素類藥物分析方法的操作要點2022/9/242本章要求掌握不同維生素的結(jié)構(gòu)特點和主要性 VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12、泛酸、葉酸) VitC、煙酸、煙酰胺維生素： 是維持人體正常代謝機能所必需的微量營養(yǎng)物質(zhì) 人體不能合成維生素 VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 V-H 維生素A醇-COCH3 維生素A醋酸酯-COC15H31 維生素A棕櫚酸酯R : 維生素A（維生素A1、視黃

2、醇）-H 維生素A醇R :環(huán)己烯共軛多烯側(cè)鏈UV多異構(gòu)體易被氧化結(jié)構(gòu)分析環(huán)己烯共軛多UV結(jié)構(gòu)分析維生素A 325.5 100% 新維生素Aa 328 75%新維生素Ab 320.5 24%新維生素Ac 310.5 15%異維生素Aa 323 21%異維生素Ab 324 24% 相對生物效價維生素A 325.5 環(huán)氧化物VitA醛VitA酸環(huán)氧化物VitA醛VitA酸三氯化銻反應(yīng)UVTLC 鑒別試驗三氯化銻反應(yīng) 鑒別試驗1. 三氯化銻反應(yīng)條件 無水（使得三氯化銻水解） 無醇（使得碳正離子電荷消失）CHCl3紫紅藍色3SbClVitA不穩(wěn)定碳正離子1. 三氯化銻反應(yīng)條件 無水（使得三氯化銻水解）C

3、HC5個共軛雙鍵max為326nm一個吸收峰2. UV法6個共軛雙鍵max為350390nm三個吸收峰溶劑：無水乙醇-鹽酸（100:1）5個共軛雙鍵2. UV法6個共軛雙鍵溶劑：無水乙醇-鹽酸（1藥物分析：維生素類藥物的分析課件紫外分光光度法三氯化銻比色法 HPLC法 含量測定紫外分光光度法 含量測定“三點校正法”由來 UV法（三點校正法）測定依據(jù)：分子結(jié)構(gòu)中共軛多烯體系，具有紫外吸 收特性，在325-328nm呈現(xiàn)選擇性吸收 但是混有多種雜質(zhì)（異構(gòu)體、氧化產(chǎn)物等雜質(zhì)）在310340nm波長范圍內(nèi)有吸收干擾紫外測定故采用“三點校正法”消除干擾“三點校正法”由來 1、雜質(zhì)的吸收在310340nm

4、范圍內(nèi)呈一條直線 隨波長的增大而吸收度變小 2、物質(zhì)對光的吸收具有加和性 即樣品各波長的吸收度是維生素A與雜質(zhì) 吸收度的代數(shù)和 測定原理選擇在三個波長處測定吸光度，結(jié)合校正公式計算A校正，再計算含量 1、雜質(zhì)的吸收在310340nm范圍內(nèi)呈一條 波長（三點）選擇（1） 1 VitA的max（328nm）（2） 2 3 分別在1的兩側(cè)各選一點 第一法 第二法 波長（三點）選擇測定對象: VitA醋酸酯 第一法 等波長差法1 = 328nm2 = 316nm3 = 340nm測定對象: 第一法 等波長差法1 = 328nm測定波長 300、316、328、340、360等波長差法 校正公式 測定波

5、長 300、316、328、340、360等波長測定對象: VitA醇 第二法 等吸收度法(皂化法)1 = 325nm2 = 310nm3 = 334nm測定對象: 第二法 等吸收度法(皂化法)1 = 325n等吸收度法（6/7吸收度法）校正公式 測定波長 300、310、325、334第一法無法消除雜質(zhì)干擾時用此法等吸收度法（6/7吸收度法）校正公式 測定波長 300維生素A含量是用生物效價表示 單位 IU/g（國際單位）換算因數(shù) 計算要求維生素A含量是用生物效價表示換算因數(shù) 計算要求1g維生素A醋酸酯相當?shù)膰H單位數(shù)為 1g維生素A醇相當?shù)膰H單位數(shù)為 1g維生素A醋酸酯相當?shù)膰H單位數(shù)為

6、 1g維生素A醇相當?shù)膰?VitA酯)(VitA醇)換算因數(shù)(VitA酯)(VitA醇)換算因數(shù)第一法測定維生素A醋酸酯時，換算因素為1900第二法測定維生素A醇時，換算因素為1830 換算因數(shù)由純品計算而得第一法測定維生素A醋酸酯時，換算因素為1900第二法測定維生應(yīng)用：維生素A膠丸的測定，求標示量A328或A 328校正 03%15%3%第二法第二法應(yīng)用：維生素A膠丸的測定，求標示量A328或A 328校正 維生素E生育酚*R1、R2均為CH3R1、R2為H和CH3R1、R2均為H生物效價 右旋體 ： 消旋體 = 1.4 ：10（天然品）（合成品）乙?；ㄉ哟姿狨ィ?維生素E生育酚*R

7、1、R2均為CH3生物效價 結(jié)構(gòu)：dl生育酚醋酸酯游離生育酚還原性水解維生素E結(jié)構(gòu)：dl生育酚醋酸酯游離生育酚還原性水解維生素E 硝酸反應(yīng) 鑒別試驗水 解橙紅色HNO3強氧化劑鄰醌結(jié)構(gòu)7515 硝酸反應(yīng) 鑒別試驗水 解橙紅色HNO3強氧化劑鄰醌結(jié) 三氯化鐵聯(lián)吡啶反應(yīng)O弱氧化劑 三氯化鐵聯(lián)吡啶反應(yīng)O弱氧化劑原理利用游離生育酚的還原性，將硫酸鈰還原成硫酸亞鈰 雜質(zhì)檢查 鈰量法檢查游離生育酚1 : 2 反應(yīng)摩爾比硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黃灰紫）原理利用游離生育酚的還原性，將硫酸鈰還原成硫酸亞鈰 雜質(zhì)藥典規(guī)定取本品0.10g，加無水乙醇5ml溶解后，用（0.01mol/L）硫酸鈰液

8、滴定，消耗硫酸鈰液1.0ml，限量2.15藥典規(guī)定取本品0.10g，加無水乙醇5ml溶解后，用（0.0 含量測定 GC法特 點選擇性好靈敏度高速度快分離效能好揮發(fā)性低、不穩(wěn)定、極性強衍生化易受樣品蒸氣壓限制ChP 維生素E原料及其制劑 含量測定 GC法特 點選擇性好揮發(fā)性低、不穩(wěn)定 氣相色譜法 ChP 內(nèi)標法加校正因子 內(nèi)標物 正三十二烷 固定相 硅酮（OV17） 檢測器 氫火焰離子化檢測器 氣相色譜法 ChP供試液（樣品+內(nèi)標）對照液（對照+內(nèi)標）內(nèi)標法加校正因子校正因子：含量計算：供試液（樣品+內(nèi)標）對照液（對照+內(nèi)標）內(nèi)標法加校正因子校正BP GC 內(nèi)標 正三十二烷 R1.4USP GC

9、 內(nèi)標 十六酸十六醇酯 R1.0JP HPLC 外標 dl生育酚 R1.4BP GC USP GC J氨基嘧啶環(huán)CH2噻唑環(huán)(季銨堿)HClCl- 維生素B1鹽酸硫胺UV氨基嘧啶環(huán)CH2噻唑環(huán)(季銨堿)HClCl- 維生素還原性堿性與生物堿非水堿量法還原性堿性與生物堿ChP 鑒別試驗 硫色素反應(yīng)熒光消失正丁醇藍色熒光H+OH-堿性ChP 鑒別試驗 硫色素反應(yīng)熒光消失正丁醇藍色熒光HVitB1H+H+H+H+ 沉淀反應(yīng)VitB1H+H+H+H+ 沉淀反應(yīng)非水溶液滴定法UV法硫色素熒光法 含量測定非水溶液滴定法 含量測定 非水溶液滴定法滴定前需加入過量醋酸汞溶液(為什么？)噻唑環(huán)上的季銨和嘧啶環(huán)上

10、氨基，反應(yīng)摩爾比1：2 ChP 原料藥 非水溶液滴定法滴定前需加入過量醋酸汞溶液(為什么？) UV法共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，UV特征紫外吸收峰隨pH變化而變化 溶劑 pH max 水 7 232-3 345 鹽酸 2 246 421ChP 片劑、注射劑 UV法共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，UV特征 溶劑 pH 含量計算（每片）相當于標示量的%=規(guī)格g/片g（每ml）相當于標示量的%=規(guī)格g/mlml含量計算（每片）相當于標示量的%=規(guī)格g/片g（每ml）相當手性CUV己糖結(jié)構(gòu)-內(nèi)酯 維生素CL抗壞血酸手性CUV己糖結(jié)構(gòu) 維生素CL抗壞血酸烯二醇強還原性酸性烯二醇酸性 鑒別試驗與氧化劑的反應(yīng)糖類的反應(yīng)UV 鑒別試驗與氧化

11、劑的反應(yīng) 與氧化劑的反應(yīng) 與氧化劑的反應(yīng)與2,6 - 二氯靛酚反應(yīng)ChP（2010）氧化型玫瑰紅色還原型藍色OH與2,6 - 二氯靛酚反應(yīng)ChP（2010）氧化型玫瑰紅色還與堿性酒石酸銅反應(yīng)與KMnO4反應(yīng)與AgNO3反應(yīng)ChP（2010）與堿性酒石酸銅反應(yīng)與KMnO4反應(yīng)與AgNO3反應(yīng)ChP（2 UVBP0.01mol/L HCl UVBP0.01mol/L HCl碘量法2,6 - 二氯靛酚滴定法HPLC 含量測定碘量法 含量測定淀粉指示液，終點至藍色不消失原理 碘量法具有較強還原性，可被氧化H+反應(yīng)摩爾比11（原料、片劑、注射液）淀粉指示液，終點至藍色不消失原理 碘量法具有較強還原性，可

12、方法Vc +新沸放冷H2O + 稀HAc 溶解 立即用標準I2滴定至Blue淀粉指示液討論新沸放冷H2O減少水中O2對測定的影響減慢VitC被O2氧化速度稀HAc,立即滴定附加劑干擾的排除片劑 滑石粉 過濾丙酮甲醛注射劑 抗氧劑 焦亞硫酸鈉方法Vc +新沸放冷H2O + 稀HAc 溶計算 W標示量V注射劑原料藥、片劑、注射劑 ？1計算 W標示量V注射劑原料藥、片劑、注射劑 ？1例：維生素C注射液（規(guī)格2ml：0.1g）的含量測定：精密量取本品2ml，加水15ml與丙酮2ml，搖勻，放置5分鐘，加稀醋酸4ml與淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.1003mol/L）滴定，至溶液顯蘭色并持續(xù)30秒鐘

13、不褪，消耗10.56ml。每1ml碘滴定液（0.1mol/L）相當于8.806mg的C6H8O6。計算維生素C注射液的標示量%。 W標示量V注射劑1例：維生素C注射液（規(guī)格2ml：0.1g）的含量測定：精密量 2,6 - 二氯靛酚滴定法USPJP原理方法自身指示終點法 溶液顯玫瑰紅色時，即為終點玫瑰紅 無色還原 2,6 - 二氯靛酚滴定法USPJP原理方法自身指示終點快速滴定 2min內(nèi) 酸性環(huán)境 HPO3-HAc 穩(wěn)定VitC防止其他還原性物質(zhì)干擾并非維生素C的專一反應(yīng)討論快速滴定 2min內(nèi) 例多種維生素片中VitA、 VitB1、VitB2 、VitB6 、煙酰胺、VitC、VitE的含量測定色譜柱 ODS流動相 A、水 -甲醇（4 ：1） B、甲醇檢測波長 272nm 280nm HPLC法對象 制劑、生物樣品、果汁 梯度洗脫例多種維生素片中VitA、 VitB1、VitB2 、Vit一、維生素A（共