土三七對食管癌細胞超微結(jié)構(gòu)的影響

1、土三七對食管癌細胞超微構(gòu)造的影響付煜榮，薄愛華孫犁郭春燕白雪梅李海峰【摘要】目的研究土三七對食管癌細胞E-109超微構(gòu)造的影響。方法培養(yǎng)的E-109細胞分別與土三七提取液作用3，6h后，通過透射電鏡觀察各實驗組和對照組食管癌細胞的超微構(gòu)造。結(jié)果電鏡下可見實驗組E-109細胞出現(xiàn)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)消失，核糖體減少；線粒體呈空泡狀，大局部嵴消失。藥物對癌細胞的殺傷作用隨時間延長而增強。結(jié)論土三七對食管癌細胞超微構(gòu)造有明顯的破壞作用。【關(guān)鍵詞】土三七食管癌細胞超微構(gòu)造Abstrat:bjetiveTstudytheeffetfTusanqinultrastruturefesphagealarinaellsE

2、-109.ethdsAftertreatedithTusanqifr3,6hursrespetively,theultrastruturefesphagealarinaellsinexperientalgrupsandntrlgrupserebservedundertransissineletrnirspe.ResultsTusanqiresultedindisappearanefrughendplasiretiuluandthestfithndrialristaes,redutinfribse,appearanebubbleinplasse.Theseverityfinjuryfebranu

3、sstruturesinreasediththetieprlngingfTusanqiatin.nlusinTusanqihasdaageeffettultrastruturefesphagealarinaells.Keyrds:Tusanqi；Esphagealarinaell；Ultrastruture土三七為景天科景天屬植物，是一種藥食兩用的植物，別名較多，如景天三七、費菜、養(yǎng)心草、血散、吐血草等。它在我國分布較廣，尤其是河北、山西和內(nèi)蒙等地更為多見。在臨床和民間早有應用，具有涼血止血，散淤、消炎、安神、鎮(zhèn)痛等作用1，2。目前土三七的藥用開發(fā)工作剛剛起步，關(guān)于土三七制劑的抗腫瘤作用，鮮見

4、報道。我們利用電子顯微技術(shù)，觀察了土三七水提液對人源性食管癌細胞E-109株超微構(gòu)造的影響，說明土三七對癌細胞的殺傷作用，為開發(fā)中草藥抗癌制劑提供科學根據(jù)。1材料與方法1.1原料與試劑土三七采自河北張家口市區(qū)，經(jīng)本校藥師鑒定確認。E-109細胞北京市腫瘤研究所；RPI-1640GibBRL公司；胎牛血清天津川頁生化制品。其余試劑均為分析純，實驗用水為二次去離子水。1.2儀器與設(shè)備透射電子顯微鏡JE100X-，日本；超薄切片機KD1508,日本；高效液相色譜儀(簡稱HPL,型號HP1100，美國Agilent公司。1.3土三七提取液的制備精細稱取枯燥粉碎土三七0.8484g，加水20l，沸水浴3

5、0in,取上清液，藥渣加水10l，再次提取30in。合并兩次提取液，定容至25.00l。過大孔樹脂處理，除去色素，得無色水溶液。無菌條件下過0.22微孔濾膜，密封4冰箱保存。經(jīng)HPL檢測沒食子酸含量為126.7gl-13。1.4電鏡樣本制作選擇對數(shù)生長期人源性食管癌細胞株E-109,調(diào)整細胞數(shù)為濃度5104/l，接種于6孔培養(yǎng)板，RPI-1640完全培養(yǎng)液(含15%胎牛血清,慶大霉素100gl-1)，置37,5%2孵箱中培養(yǎng)。待24h后癌細胞呈對數(shù)生長時,分對照組、加土三七提取液250l相當于分別參加生藥15.9g，含沒食子酸31.7g3)。再分別培養(yǎng)3h和6h。將細胞剮起，細胞經(jīng)離心后常規(guī)2

6、.5%戊二醛及1%鋨酸雙重固定和Epn812包埋；超薄切片，厚度4050n。常規(guī)鈾-鉛染色，JE100X透射電鏡觀察攝像。2結(jié)果對照組癌細胞呈圓形，周圍有較多微絨毛，胞質(zhì)中有粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體、線粒體等。其中線粒體呈棒狀或球形，其膜和嵴明晰可見；細胞核呈球形，常染色質(zhì)多，異染色質(zhì)少，呈中等電子密度，核仁大而較多見，圖像見圖1。3h組與6h組無明顯差異。藥物作用3h后，癌細胞周圍微絨毛減少，或大局部消失，或縮短。胞質(zhì)中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)消失；核糖體減少；線粒體呈空泡狀，大局部嵴消失。損傷較嚴重的細胞那么有質(zhì)膜斷裂現(xiàn)象。細胞核異染色質(zhì)明顯增多，核仁可見。見圖2。藥物作用6h后癌細胞微絨毛消失，而且大局部細

7、胞質(zhì)膜斷裂或消失，細胞器溢出，有較多細胞碎屑。局部細胞的胞質(zhì)中有較多空泡，其他細胞器很少見到。局部細胞的胞質(zhì)中出現(xiàn)牛眼樣次級溶酶體。胞核出現(xiàn)凹陷，核膜構(gòu)造不清或大局部消失，核仁變形或消失。見圖3。3討論據(jù)報告景天三七SeduaiznL.，富含多種營養(yǎng)成分，如蛋白質(zhì)、脂肪、糖和維生素，B；同時含有鈣、磷、鐵及鋅、硒、銅等微量元素，因此作為新興的保健蔬菜得到人們的重視和推廣4。更可喜的是土三七中有豐富的藥用成分沒食子酸、多種酚酸、齊墩果酸、熊果酸、谷甾醇、黃酮類成分和生物堿等5。有報道在臨床利用土三七汁治療肺癌咯血，獲得明顯療效6；治療心血管疾病方面說明土三七具有改善微循環(huán)、化淤降壓和寧心安神作用

8、7。將藥物作用3h，E-109癌細胞出現(xiàn)膜性構(gòu)造如質(zhì)膜、線粒體膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)受到損傷，說明藥物對磷脂成分為主的構(gòu)造有破壞作用。核內(nèi)異染色質(zhì)增多，說明核酸合成及代謝受阻。加藥6h，局部細胞解體，形成碎屑；局部細胞中空泡增多和細胞器明顯減少，胞核與胞質(zhì)界限不清，說明藥物對癌細胞具有殺傷作用，以細胞壞死為主。我們曾用藥物作用24h，培養(yǎng)液中已很難找到癌細胞，提示藥物對癌細胞的殺傷作用隨著藥物作用時間延長而增強?？傊ㄟ^本實驗說明土三七對食管癌細胞超微構(gòu)造有明顯的破壞作用。今后有望利用土三七在抗癌防癌工作中另辟新徑?！緟⒖嘉墨I】1國家中醫(yī)藥管理局?中華草本?編委會.中華草本，第3冊.上海：上海科學技術(shù)出版社，1999：765.2韓敏，趙莉.景天屬植物研究進展J.安徽農(nóng)業(yè)科學，2022，3311：2129，2141.3付煜榮，張萬明，陳桂敏，等.景天三七中沒食子酸和總酚酸含量測定J.中成藥，2022，287：1016.4尚成武.景天三七的應用及栽培J.中國林副特產(chǎn)，2000，532：52.5