北京流行性腦脊髓膜炎監(jiān)測方案-北京豐臺區(qū)疾病預(yù)防控制中心

1、附件 2北京市流行性腦脊髓膜炎監(jiān)測與控制方案流行性腦脊髓膜炎 ( 簡稱流腦 ) 是由腦膜炎柰瑟菌引起的急性呼吸道傳染病，多發(fā)于冬春季節(jié)，該菌有13 個血清群，中國以A 群為主， B、C群有散發(fā)病例發(fā)生。北京市自1949 年以來共發(fā)生過3 次流行，約 8-10 年出現(xiàn)一次流行高峰，呈現(xiàn)周期性流行的特點。20 世紀(jì) 80 年代，隨著 A 群流腦多糖菌苗的推廣使用，流腦的發(fā)病率和死亡率大幅度降低,1995-1999 年發(fā)病率控制在1/10萬以下。 2000 年以來，北京市流腦發(fā)病率有所回升，但發(fā)病以外來人口為主，均為散發(fā)病例。針對流腦的防治工作，北京市衛(wèi)生局下發(fā)了北京市流行性腦脊髓膜炎疫情應(yīng)急預(yù)案。

2、為進一步落實 2006 年衛(wèi)生部下發(fā)的全國流行性腦脊髓膜炎監(jiān)測方案的各項措施，特制定本方案。目的1.1 及時發(fā)現(xiàn)病例，采取有效防治措施，控制疫情蔓延;1.2 掌握我市流腦菌群分布特征、變遷趨勢和發(fā)病趨勢，完善流腦預(yù)測、預(yù)警機制 ;1.3 掌握流腦疫苗接種情況和人群免疫水平，識別高危地區(qū)和高危人群，加強預(yù)防控制工作 ;1.4 掌握我市流腦的流行病學(xué)特征，為制定防控措施提供科學(xué)依據(jù)。病例診斷2.1 疑似病例：冬春季節(jié)發(fā)病，1 周內(nèi)有流腦病人密切接觸史，或當(dāng)?shù)赜斜静“l(fā)生或流行，如果出現(xiàn)發(fā)熱、頭痛、嘔吐、腦膜刺激征等癥狀之一者均作為流腦疑似病例報告。2.2 病例分類臨床診斷病例：疑似病例，皮膚、粘膜出

3、現(xiàn)瘀點或瘀斑，同時實驗室檢測符合下述兩項：（1）末梢血象：白細胞總數(shù)、中性粒細胞計數(shù)明顯增加。（2）腦脊液：外觀呈渾濁米湯樣或膿樣，壓力增高；白細胞數(shù)明顯增高，并以多核細胞增高為主；糖及氯化物明顯減少，蛋白含量升高。確診病例：疑似或臨床診斷基礎(chǔ)上，具有下述任一項：（1）病原學(xué)：瘀點（斑）組織液、腦脊液涂片，可在中性粒細胞內(nèi)見到革蘭陰性腎形雙球菌；或腦脊液或血液培養(yǎng)腦膜炎奈瑟菌陽性；或檢測到腦膜炎奈瑟菌特異性核酸片斷。（2）血清、免疫學(xué)：急性期腦脊液、血液檢測到腦膜炎柰瑟菌群特異性多糖抗原或恢復(fù)期血清流腦特異性抗體，效價較急性期呈4 倍或 4 倍以上升高。1免疫預(yù)防3.1常規(guī)免疫北京市將流腦疫苗

4、納入免疫規(guī)劃， A 群流腦多糖疫苗與 A+C群流腦多糖疫苗使用原則如下：免疫程序：流腦疫苗注射4 劑，第 1、2 劑為基礎(chǔ)免疫，出生6 月、9 月時接種 A 群流腦多糖疫苗各1 劑；第 3、4 劑次為加強免疫， 3 歲、 9 歲（小學(xué)四年級）時接種A C 群流腦多糖疫苗各1 劑。查漏補種標(biāo)準(zhǔn)漏種針次為基礎(chǔ) 1-2 針時，用 A 群多糖流腦疫苗補基礎(chǔ)， 2 針次間隔不少于 3 個月，若已滿 3 歲，尚未接種過流腦多糖疫苗，用 A+C流腦多糖疫苗補 1 劑基礎(chǔ)，并不再接種 3 歲 A+C流腦多糖疫苗。若已滿 14 歲，不再補種。歲 A+C群多糖流腦疫苗時，若之前接種過 2 劑 A 群流腦多糖疫苗，

5、與前劑間隔1 年補種。若之前只接種過 1 劑 A 群流腦多糖疫苗，需間隔3個月。若已上小學(xué)，不再補種。漏種針次為 9 歲 A+C群多糖流腦疫苗時，與前劑間隔3 年補種，若已滿 14 歲，不再補種。預(yù)防接種工作嚴(yán)格按照預(yù)防接種工作規(guī)范及國家對流腦疫苗使用的有關(guān)規(guī)定實施，特別注意掌握預(yù)防接種禁忌癥。3.2特殊人群預(yù)防接種根據(jù)疫情動態(tài)，在北京市衛(wèi)生局的統(tǒng)一部署下，開展對重點或高危人群的流腦疫苗免疫接種活動。兒童查漏補種。學(xué)齡前外來兒童查漏補種安排在3-4 月，中小學(xué)生查漏補種工作在春秋季開學(xué)時進行，對漏種兒童按照補種原則進行補種。外來務(wù)工人員預(yù)防性接種。在流腦流行季節(jié)（ 2-3 月份），對集中用工單

6、位中 40 歲以下、來京時間不足半年且 3 年內(nèi)未接種過流腦疫苗的外來務(wù)工人員進行 A 群流腦多糖疫苗接種。3.3 應(yīng)急接種當(dāng)發(fā)生流腦病例時，對易感者進行流腦疫苗的應(yīng)急接種工作。疫情報告流腦作為乙類法定報告?zhèn)魅静?，?zhí)行職務(wù)的醫(yī)護人員、檢疫人員、疾控人員、鄉(xiāng)村醫(yī)生和個體開業(yè)醫(yī)生為責(zé)任疫情報告人。各級醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)和疾控機構(gòu)為責(zé)任報告單位。各級、各類醫(yī)療機構(gòu)及其執(zhí)行職務(wù)的人員發(fā)現(xiàn)流腦病例和疑似病例時，遵循疫情報告屬地化管理原則，嚴(yán)格按照國家規(guī)定的內(nèi)容、程序、方法和時限報告。城鎮(zhèn)于 6 小時 , 農(nóng)村于 12 小時內(nèi)通過傳染病疫情監(jiān)測信息系統(tǒng)進行報告。發(fā)現(xiàn)暴發(fā)疫情或符合突發(fā)公共衛(wèi)生事件定義的疫情，應(yīng)在

7、2 小時內(nèi)報告上級疾2控中心和衛(wèi)生行政部門。醫(yī)療機構(gòu)還應(yīng)負(fù)責(zé)流腦病例出院、轉(zhuǎn)診或死亡等轉(zhuǎn)歸情況的報告，區(qū)縣級疾病預(yù)防控制機構(gòu)負(fù)責(zé)流腦病例轉(zhuǎn)歸的核實。疫情處理原則5.1 散發(fā)疫情小范圍內(nèi)出現(xiàn)的散在病例、各病例之間在發(fā)病時間和地點方面無明顯聯(lián)系，屬于散發(fā)疫情。本市戶口及發(fā)病前在京居住7 天以上外地戶口的流腦病例，接報后 24 小時內(nèi)，由住址所在地區(qū)縣疾控中心、相關(guān)醫(yī)療保健部門共同做個案調(diào)查、疫源地處理；出現(xiàn)死亡病例時，市疾控中心人員到現(xiàn)場調(diào)查核實，區(qū)縣疾控中心處理完畢后3 天內(nèi)寫出調(diào)查報告。區(qū)縣疾控中心1 周內(nèi)將個案調(diào)查數(shù)據(jù)庫上報市疾控中心。發(fā)病前在京居住7 天以下外地戶口的流腦病例，由醫(yī)院負(fù)責(zé)病

8、例調(diào)查，調(diào)查表1 周內(nèi)逐級上報至區(qū)縣疾控中心保存。市疾控中心按全國流行性腦脊髓膜炎監(jiān)測方案要求的報告程序，將流行病學(xué)和實驗室監(jiān)測數(shù)據(jù)庫上報至國家疾控中心。5.2 暴發(fā)和突發(fā)事件在行政村、居委會或集體單位中10 天內(nèi)發(fā)生 5 例或以上病人屬暴發(fā)疫情。同一學(xué)校、幼兒園、自然村寨、社區(qū)、建筑工地等集體單位3 天內(nèi)發(fā)生 3 例及以上流腦病例，或者有 2 例及以上死亡時，按突發(fā)公共衛(wèi)生事件相關(guān)信息報告管理工作規(guī)范的要求報告。發(fā)生暴發(fā)和突發(fā)事件時，病例所屬的區(qū)縣疾控中心和地段保健科接到報告后應(yīng)立即到達現(xiàn)場，共同負(fù)責(zé), 市疾控中心人員參與協(xié)同處理疫情。區(qū)縣疾控中心在暴發(fā)或突發(fā)事件處理完畢后3 天內(nèi)寫出調(diào)查報

9、告。報告工作的具體要求按照傳染病防治法和相關(guān)的法律、規(guī)章的規(guī)定執(zhí)行。流行病學(xué)調(diào)查6.1核實診斷根據(jù)病例的臨床表現(xiàn)和實驗室檢查，對照流腦的病例定義，對報告病例進行核實診斷，必要時邀請高資專家進行排查，確定首例病例。6.2個案調(diào)查了解病人的發(fā)病過程，密切接觸者人員的姓名和居住地的發(fā)病情況等相關(guān)因素。進行綜合分析，對疫情形勢做出初步判定。6.3流行病學(xué)現(xiàn)場調(diào)查一旦發(fā)現(xiàn)有流行或者暴發(fā)的跡象，或者病例為幼兒園兒童、學(xué)生或民工等生活、工作、學(xué)習(xí)接觸密切的人群時，應(yīng)開展流行病學(xué)現(xiàn)場調(diào)查?，F(xiàn)場調(diào)查包括對病人居住地周圍進行詳細地病例搜索和追蹤觀察，病人發(fā)生地醫(yī)療機構(gòu)的病例主動搜索等。由于流腦隱性感染率高，直接接

10、觸病人感染發(fā)病的概率較低，暴露的家庭成員的流腦發(fā)生概率為0.4% 4%，難以發(fā)現(xiàn)病例之間的必然聯(lián)系，主要根據(jù)病3例的時間聚集或者地點聚集和易感人群積累狀況等因素對疫情做出初步估計，再結(jié)合實驗室結(jié)果等相關(guān)因素做出綜合分析，判定疫情趨勢。疫情控制措施7.1 醫(yī)療機構(gòu)防控工作各級醫(yī)療機構(gòu)要嚴(yán)格執(zhí)行衛(wèi)生部下發(fā)的醫(yī)療機構(gòu)傳染病預(yù)檢分診管理辦法的各項規(guī)定，切實做好醫(yī)院流腦預(yù)檢、分診工作；在發(fā)現(xiàn)疑似患者時，應(yīng)首先給患者及其密切接觸者戴上口罩，并及時準(zhǔn)確地診斷、報告病例，對病人開展規(guī)范化治療；及時對其密切接觸者進行檢查、登記，采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施；要加強醫(yī)院內(nèi)消毒隔離和防護措施，防止流腦在醫(yī)院內(nèi)的交叉感染。醫(yī)務(wù)

11、人員要加強培訓(xùn)，掌握流腦的臨床特征、診斷標(biāo)準(zhǔn)、治療原則，及時發(fā)現(xiàn)病人，及時報告疫情；同時要掌握消毒、隔離和個人防護知識和措施。各級疾控機構(gòu)要做好技術(shù)指導(dǎo)，衛(wèi)生監(jiān)督部門要加強各項措施落實的督導(dǎo)檢查。7.2 病人治療與管理流腦病例應(yīng)按照屬地化的原則就地隔離治療，隔離期為發(fā)病起 10 天，或癥狀消失后 3 天。收治醫(yī)院要向當(dāng)?shù)丶部貦C構(gòu)報告病例的轉(zhuǎn)歸情況。要盡早采取規(guī)范治療，避免或減少嚴(yán)重并發(fā)癥。如因病情嚴(yán)重需要轉(zhuǎn)院治療，必須采取嚴(yán)密的隔離措施，用救護車轉(zhuǎn)運病人。醫(yī)療機構(gòu)發(fā)現(xiàn)流腦病例和疑似病例時，無論是否使用抗生素治療，都要盡快采集病人腦脊液、血液、瘀點（斑）組織液標(biāo)本，標(biāo)本要盡可能在使用抗生素治療前

12、采集，并及時送實驗室檢測。病人的臨床治療原則參見衛(wèi)生部下發(fā)的流行性腦脊髓膜炎診療要點。7.3 密切接觸者管理密切接觸者是家庭成員、病人看護人員以及任何可能暴露于病人口腔、鼻咽分泌物的人員。對密切接觸者必須采取下列措施：（1）醫(yī)學(xué)觀察：對密切接觸者進行醫(yī)學(xué)觀察隨訪，時間為 7 天（自最后接觸之日算起），期間內(nèi)可不限制其活動，但要告知其盡量減少與他人接觸，一旦其出現(xiàn)突然寒戰(zhàn)、高熱、惡心、嘔吐、流涕、鼻塞、咽痛、全身疼痛、頭痛等癥狀，要主動申報，并及時就診。所在地鄉(xiāng)村醫(yī)生、校醫(yī)、社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站醫(yī)務(wù)人員等負(fù)責(zé)醫(yī)學(xué)觀察工作。（2）預(yù)防性服藥：發(fā)生流腦流行時，可對密切接觸者采取的應(yīng)急預(yù)防性服藥?？筛鶕?jù)當(dāng)?shù)?/p>

13、往年流腦細菌耐藥性的相關(guān)情況選擇預(yù)防服藥的種類。7.4 應(yīng)急接種當(dāng)發(fā)生流腦流行時，市衛(wèi)生局可依據(jù)中華人民共和國傳染病防治法的規(guī)定，以及流腦病例實驗室診斷、人群免疫監(jiān)測和菌群監(jiān)測等結(jié)果，決定使用疫苗的種類并盡快組織對病例周圍高危人群開展應(yīng)急接種工作。46 個月 -2 歲兒童選擇 A 群流腦多糖疫苗進行應(yīng)急接種，或根據(jù)當(dāng)?shù)匕l(fā)病情況擴大接種年齡范圍；2 歲以上兒童、中小學(xué)生及其他高危人群選擇AC群流腦多糖疫苗進行應(yīng)急接種，在流行區(qū)可對2 歲以下兒童接種。7.5 消毒處理和個人防護區(qū)縣疾控人員開展和指導(dǎo)對社區(qū)、學(xué)校等疫源地和周圍環(huán)境進行濕式清潔，必要時用 1漂白粉澄清液或其它含氯制劑噴霧消毒。定期開窗

14、通風(fēng)，應(yīng)做到每天開窗至少 3 次，每次不少于 10 分鐘。如周圍有流腦病人時，應(yīng)增加通風(fēng)換氣的次數(shù)。在開窗時，要避免穿堂風(fēng)。對物體表面可用適當(dāng)濃度含氯制劑擦拭。負(fù)責(zé)現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查、采樣和醫(yī)療救治的工作人員要加強個人防護，及時做好藥物預(yù)防和免疫預(yù)防工作。同時注意避免醫(yī)院內(nèi)的交叉感染與傳播。7.6 加強區(qū)域聯(lián)防疫情調(diào)查處理時要加強不同部門或機構(gòu)間的協(xié)作，如疫情發(fā)生在兩縣或多縣交界地區(qū)，由相關(guān)區(qū)縣衛(wèi)生局負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)處理該區(qū)域疫情；必要時報請市衛(wèi)生局協(xié)調(diào)處理。各級疾控機構(gòu)要及時將有關(guān)疫情信息向相鄰區(qū)縣、省疾控中心通報。市衛(wèi)生局適時向社會通報疫情。7.7 加強部門合作和健康教育，動員全社會參與堅持預(yù)防為主

15、的方針，在流行季節(jié)前，各區(qū)縣可通過各種媒體宣傳防治流腦的科普知識，增強廣大群眾預(yù)防流腦的意識。教育群眾搞好個人衛(wèi)生和家庭衛(wèi)生，改變不良生活習(xí)慣、勤掃地、勤洗手、淡鹽水漱口；開窗通風(fēng)，保持室內(nèi)外空氣流通。引導(dǎo)群眾加強營養(yǎng)和室外活動，增強體質(zhì)、提高機體抵御疾病的能力。流腦流行期間，減少或停止各種大型聚會活動。在衛(wèi)生部門與各有關(guān)部門參與或監(jiān)督下，托兒機構(gòu)、中小學(xué)校、廠礦、工地、商場和影劇院等公共場所要搞好環(huán)境衛(wèi)生，保證空氣流通。發(fā)生流腦疫情后，衛(wèi)生行政部門要根據(jù)國家有關(guān)規(guī)定適時公布疫情，做好與媒體的溝通，避免處置過度造成社會恐慌。當(dāng)疫情嚴(yán)重時，根據(jù)突發(fā)公共衛(wèi)生事件管理的有關(guān)規(guī)定，啟動應(yīng)急預(yù)案，實行群

16、防群控。各級衛(wèi)生行政部門和衛(wèi)生監(jiān)督部門要會同有關(guān)部門加強對轄區(qū)內(nèi)學(xué)校、建筑工地和醫(yī)療機構(gòu)的流腦防治工作進行督導(dǎo)檢查，及時發(fā)現(xiàn)和解決問題，促進各項防控措施的落實。最后一例病例發(fā)病 10 天后，沒有出現(xiàn)續(xù)發(fā)疑似流腦病例可停止對務(wù)工人員健康狀況監(jiān)測。監(jiān)測工作8.1 病例的病原學(xué)監(jiān)測醫(yī)院負(fù)責(zé)病人標(biāo)本的采集，分別采集2 份腦脊液、血液標(biāo)本，其中1 份供自行進行檢測用，另 1 份送區(qū)縣疾控中心。送區(qū)縣疾控中心檢測的樣本采集和運送要求如下：5（1）腦脊液標(biāo)本：無菌采集病人早期腦脊液標(biāo)本 1ml，置滅菌帶螺旋帽小試管中，室溫保存， 20-36 條件下盡快送區(qū)縣疾控中心實驗室進行腦膜炎柰瑟菌分離培養(yǎng)。（2）急性

17、期血液標(biāo)本：采集病人急性期血液 2ml 加入含 EDTA抗凝劑的滅菌小試管中， -20 保存， 2-8 條件下盡快送區(qū)縣疾控中心實驗室，如有條件可進行核酸檢測，否則保存血液標(biāo)本以備病原學(xué)檢測。另取病人急性期血液2ml 加入不含抗凝劑的滅菌小試管中，2-8 保存， 24 小時內(nèi)分離血清， -20 保存以備血清學(xué)檢測。（3）瘀點瘀斑標(biāo)本：選病人皮膚上的新鮮瘀點（斑），消毒后用針頭挑破，擠出組織液，直接涂抹在 PV巧克力瓊脂平板上， 20-36 條件下盡快送區(qū)縣疾控中心進行腦膜炎柰瑟菌分離培養(yǎng)。區(qū)縣疾控中心負(fù)責(zé)標(biāo)本運送及初步檢測， 7 天內(nèi)向市疾控中心上報檢測結(jié)果，將分離的菌株或培養(yǎng)陰性的標(biāo)本 48

18、 小時內(nèi)送市疾控中心。市疾控中心收到分離的菌株標(biāo)本后，對菌株應(yīng)及時完成復(fù)核鑒定， 10 天內(nèi)反饋結(jié)果。對培養(yǎng)陰性的標(biāo)本進行特異性核酸 PCR檢測，檢測完成后，及時將結(jié)果反饋與區(qū)縣級疾控中心。市疾控中心收到菌株 28 天內(nèi)將菌株及標(biāo)本送檢單送國家疾控中心實驗室。有條件的醫(yī)院應(yīng)盡快開展流腦病原、血清學(xué)診斷，需妥善保存流腦病例標(biāo)本和 / 或可疑陽性菌株，由區(qū)縣疾控中心按要求及時送市疾控中心進行分群或復(fù)核鑒定。市疾病預(yù)防控制中心收到病例菌株或密切接觸者菌株后 7 天內(nèi)應(yīng)完成耐藥性檢測，同時將病例菌株提供給市衛(wèi)生局指定的三級醫(yī)院用于耐藥性檢測，醫(yī)院收到菌株后 7 天內(nèi)應(yīng)完成耐藥性檢測。其他有條件的醫(yī)院也

19、可以開展耐藥性檢測，方法可以使用肉湯稀釋法。耐藥性檢測結(jié)果統(tǒng)一報市疾控中心實驗室，市疾控中心報市衛(wèi)生局和國家疾控中心實驗室。8.2 病例的血清學(xué)監(jiān)測對流腦病例采集急性期和恢復(fù)期血標(biāo)本各1 份，間隔 4 周。每份采全血2mL， 2-8 保存， 24 小時內(nèi)分離血清，于 -20 凍存。雙份血清標(biāo)本于采集后盡快在冷藏條件下送市疾控中心檢測，測定流腦特異性抗體。住院病人的標(biāo)本由醫(yī)院采集，未住院病人的標(biāo)本由區(qū)縣疾控中心采集。8.3 密切接觸者的病原學(xué)監(jiān)測在發(fā)現(xiàn)流腦首例病例后應(yīng)在病例密切接觸者預(yù)防性服藥前采集10-20 人咽拭子標(biāo)本，直接涂抹在 PV巧克力瓊脂平板上， 20-36 條件下盡快送區(qū)縣疾控中心

20、進行分離培養(yǎng)， 7 天內(nèi)向市疾控中心上報檢測結(jié)果，陽性菌株在 24 小時內(nèi)送市疾控中心進行分群鑒定， 10 天內(nèi)反饋結(jié)果。8.4 健康人群流腦抗體水平監(jiān)測6選擇西城、宣武、豐臺、朝陽、昌平、通州，門頭溝和平谷8 個區(qū)縣為監(jiān)測點，監(jiān)測對象按 0-4 歲、 5-9 歲、 10-14 歲、 15-24 歲、 25-34歲、 35-44歲、 45 歲以上分為 7 個年齡組，每個區(qū)縣每個年齡組隨機選擇監(jiān)測對象15人，每區(qū)監(jiān)測 105 人，共監(jiān)測 840 人。采集非流腦流行季節(jié)（一般是7-9 月份）采血 1 次（ 2 毫升）。同時填寫健康人群流腦抗體水平監(jiān)測登記表。血標(biāo)本在 2-8 條件下保存， 24 小

21、時內(nèi)自動沉降或離心分離血清，常規(guī)血清量需 300ul / 份；血清標(biāo)本封裝于微量離心管內(nèi)，在 -20 保存、 8以下運送，避免反復(fù)凍融。血清標(biāo)本送市疾控中心實驗室，采用殺菌力試驗或酶聯(lián)免疫吸附試驗等，測定流腦特異性抗體。8.5健康人群帶菌率調(diào)查健康人群進行流腦帶菌率調(diào)查與人群抗體水平調(diào)查同時進行。對同一調(diào)查對象采集咽拭子標(biāo)本，直接接種于培養(yǎng)基，24 小時內(nèi)送區(qū)縣疾控中心進行病原分離培養(yǎng)。檢測結(jié)果上報市疾控中心，陽性菌株和培養(yǎng)陰性的標(biāo)本 7 天內(nèi)送市疾控中心實驗室進行分群鑒定和藥敏試驗。培養(yǎng)所獲得的腦膜炎柰瑟菌菌株分純鑒定合格后，將其純培養(yǎng)物的菌苔刮到 35 支滅菌的脫脂牛奶菌種管中，置 -20

22、 冰箱保存，菌株及時送國家疾控中心傳染病預(yù)防控制所進一步鑒定分析。在朝陽、海淀、豐臺和大興 4 個區(qū)縣， 2-3 月份對集中用工單位中 40 歲以下 ,3 年內(nèi)無流腦疫苗接種史且來京時間不足半年的民工進行流腦帶菌率調(diào)查。每個區(qū)縣隨機選擇集體用工單位的外來民工50 人，共 200 人，采集咽拭子標(biāo)本，直接接種于培養(yǎng)基，立即送區(qū)縣疾控中心進行病原分離培養(yǎng)。檢測結(jié)果上報市疾控中心，陽性菌株送市疾控中心實驗室進行分群鑒定。8.6主動監(jiān)測和主動搜索各級疾控機構(gòu)要定期開展流腦疫情報告情況檢查和督導(dǎo)。發(fā)現(xiàn)首例病例后，區(qū)縣疾控機構(gòu)對病例所在區(qū)縣的醫(yī)療機構(gòu)開展病例搜索，必要時開展社區(qū)病例主動搜索。同時還要了解人

23、群疫苗接種、人口流動、人群發(fā)病以及居住環(huán)境等情況。當(dāng)以村、居委會或?qū)W?；蚣w單位 7 天內(nèi)發(fā)現(xiàn) 2 例或以上流腦病例；或在 1 個鄉(xiāng)鎮(zhèn) 14 天內(nèi)發(fā)現(xiàn) 3 例或以上流腦病例；或在 1 個縣 1 個月內(nèi)發(fā)現(xiàn) 5 例或以上流腦病例時，還應(yīng)采取以下措施：1）開展主動監(jiān)測和病例搜索工作。二級和二級以上的醫(yī)院為主動監(jiān)測醫(yī)院，按周開展主動監(jiān)測和病例搜索工作，在流行高峰季節(jié)的 2-4 月份進行。區(qū)縣疾控中心選擇轄區(qū)內(nèi) 1 家醫(yī)院，按周開展主動監(jiān)測工作。各級醫(yī)療機構(gòu)對所發(fā)現(xiàn)不明原因的具有突然寒戰(zhàn)、高熱、全身疼痛、頭痛、瘀點瘀斑等癥狀的病人，實行“零病例”日報告制度。72）發(fā)生疫情的學(xué)校，學(xué)校醫(yī)院( 醫(yī)務(wù)室 )

24、 應(yīng)加強晨檢制度，監(jiān)測每位學(xué)生的健康狀況，尤其要了解缺課學(xué)生的健康狀況，并做好晨檢工作的登記和報告工作。3）發(fā)生疫情的建筑工地，應(yīng)設(shè)立務(wù)工人員進出登記制度，掌握本工地流動人員情況，指定專人負(fù)責(zé)務(wù)工人員健康狀況監(jiān)測。預(yù)測預(yù)警預(yù)測預(yù)警必須建立在相應(yīng)監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上。各級疾控機構(gòu)要結(jié)合歷年來流腦疫情數(shù)據(jù)、實驗室檢測、健康人群帶菌狀況和血清抗體水平監(jiān)測結(jié)果等信息進行分析，對當(dāng)?shù)亓髂X疫情進行預(yù)測和預(yù)警。各級衛(wèi)生主管部門根據(jù)預(yù)測和預(yù)警的結(jié)果，及時制定和部署相應(yīng)的預(yù)防控制措施，啟動相應(yīng)的流腦疫情應(yīng)急預(yù)案。資料管理（1）病例調(diào)查資料：流行病學(xué)調(diào)查表由各區(qū)縣疾控中心負(fù)責(zé)管理。（2）疫情信息的傳輸：區(qū)縣

25、疾控中心于疫情初訪后，將個案表及時輸入數(shù)據(jù)庫中，及時填寫復(fù)訪結(jié)果，新病例個案調(diào)查后 1 周內(nèi)將累計病例個案表數(shù)據(jù)庫上報市疾控中心。暴發(fā)疫情需上交調(diào)查報告。市疾控中心將健康人群帶菌監(jiān)測和抗體水平監(jiān)測結(jié)果及時上報國家疾控中心。（3）資料的利用：充分利用資料撰寫暴發(fā)疫情調(diào)查總結(jié)、年終總結(jié)、階段性疫情簡報以及其他臨時性總結(jié)。11 評價指標(biāo)醫(yī)療單位病例及時報告率100病例 24 小時內(nèi)區(qū)縣疾控中心調(diào)查率 80%首例病例區(qū)縣疾控中心調(diào)查率100%死亡病例市疾控中心現(xiàn)場調(diào)查核實率100%聚集性病例市疾控中心現(xiàn)場調(diào)查率100%病例腦脊液或血液標(biāo)本采集率 80%腦膜炎奈瑟菌培養(yǎng)陰性標(biāo)本 PCR檢測率 90%區(qū)縣

26、疾控中心 24 小時標(biāo)本送達市疾控中心比例 80%區(qū)縣、市疾控中心收到標(biāo)本檢測 7 天內(nèi)完成、反饋率 80%市疾控制中心收到菌株藥物敏感性7 天內(nèi)完成、反饋率 80%市疾控中心實驗室分離菌株后 28 天內(nèi)送達國家實驗室率 80%以區(qū)縣為單位流腦疫苗接種率 85%市疾控中心在流行期間對監(jiān)測數(shù)據(jù)每月進行1 次分析，并將結(jié)果報送市衛(wèi)生局和區(qū)縣級疾控中心。反饋應(yīng)在次月的第一周內(nèi)完成，可采用簡報、通報等方式。市疾控中心在下年度第一個季度內(nèi)完成流腦防控工作的年終總結(jié)。8附件 1流行性腦脊髓膜炎個案調(diào)查表病例編號：調(diào)查單位： _病例調(diào)查者：調(diào)查日期：年月日標(biāo)本采集者：采集日期：年月日 實驗室結(jié)果填報人：填報

27、日期：年月日一、基本情況1.患者姓名： _2.性別：男女3.出生日期：年月日4.如無出生日期，年齡：歲月5.職業(yè)： 1.兒童 2. 學(xué)生 3.職工 4. 民工 5.農(nóng)民 6.個體 7.其他如果是民工 , 那么是1. 建筑 2.保安 3. 服務(wù)員 4.工人 5.其他6.戶籍地：_7.家庭現(xiàn)住址：省地（市）縣（區(qū)）鄉(xiāng)（鎮(zhèn)、街道）村（居委會）工作單位： _是否是外來人口 1. 是 2.否如果是，來京日期為：8.居住情況：散居集體（托幼、學(xué)校、工地）其他 不祥9.家長姓名：聯(lián)系電話： _10.報告單位：報告日期：年月日 / /11.發(fā)病地點：發(fā)病日期：年月日 / / 12.初診醫(yī)院：初診日期：年月日

28、/ / 13.收治醫(yī)院：住院日期：年月日 / / 14.診斷醫(yī)院：診斷日期：年月日 / / 共就診次數(shù)15.出院日期：年月日 / / 16.病例轉(zhuǎn)歸1. 痊愈 2. 死亡 3.后遺癥4. 不詳如死亡，死亡日期：年月日 /如有后遺癥，名稱 _17.流腦疫苗免疫史：無有不詳17.1.如有，接種次數(shù)：次不詳17.2.接種依據(jù)接種卡接種證回憶917.3.A 群多糖疫苗接種時間：第一針：年月日 / / 第二針：年月日 / / 第三針：年月日 / / 17.4.A+C 群多糖疫苗接種時間：第一針：年月日 / / 第二針：年月日 / / 17.5.如無疫苗接種史，未種原因：1. 不知道要接種2.不知道接種地

29、點3. 接種費用高4.接到通知未去接種5.其它9.不詳18.病前 10 天內(nèi)外出史1.有 2.無 3.不詳如有 , 詳細地址_返京日期：年月日 / / 18.1.發(fā)病地點近期是否有同類（流腦）病人：有無不詳18.2.發(fā)病前一周與同類（流腦）病人接觸史：有無不詳18.3.如有接觸，接觸方式：同住陪護同校同單位 其它開始接觸日期：年月日 / / 18.4.家庭內(nèi)同類（流腦）病人：有無 不詳18.5.如周邊（同宿舍、同班、同校）有同類（流腦）病人，根據(jù)情況填寫下表：患者姓名性別年齡與患者關(guān)系發(fā)病情況二、臨床表現(xiàn)主要癥狀：1.1.起病：急緩不詳1.2.發(fā)熱：有無不詳1.3.上呼吸道感染癥狀：有無不詳1

30、.4.頭痛：劇烈輕微無不詳1.5.惡心：有否不詳1.6.嘔吐：有否不詳1.7.抽風(fēng)：有否不詳1.8驚厥：有否不詳1.9.神志：清楚嗜睡煩躁昏迷 不詳1.10.其它癥狀： _主要體征：2.1.體溫：2.2.面部、唇周色澤蒼白發(fā)紺正常102.3.皮膚出血點較多較少無不詳2.4.如有，其部位是：四肢軀干其它：2.5.皮膚瘀點、瘀斑較多較少無不詳2.6.頸項強直：有否不詳2.7.意識障礙：有無不詳2.8.角弓反張：有無不詳2.9.前鹵隆起：有無不詳2.10.克氏征：有無不詳2.11.布氏征：有無不詳2.12. 其它體征：_診療情況3.1病人隔離有無不詳3.2隔離地點：醫(yī)院在家其它：3.3使用抗生素類藥

31、物：有無不詳3.4使用藥物名稱：_3.5使用效果：有效效果不明顯無效3.6轉(zhuǎn)歸：痊愈好轉(zhuǎn)未好轉(zhuǎn)惡化死亡三、實驗室檢驗結(jié)果1.血常規(guī)：有無1.1.采集日期： / / 檢驗日期： / / 1.2.血液白細胞總數(shù) 109 個 /L ； ( 正常值 4-10*109/L)1.3.中性粒細胞; ( 正常值50-75%, 供參考 )2.腦脊液常規(guī)：有無2.1.標(biāo)本采集日期：年月日 / / 2.2.檢驗日期：年月日 / / 2.3.外觀清晰微混混濁2.4.蛋白質(zhì)g/L（正常值 0.15-0.45g/L,或 15-45mg/dL）正常增高2.5.白細胞個 / L( 正常值 0-15/ L)正常增多2.6.葡萄

32、糖mmol/L(正常值45-80mg/dL,或 2.5-4.5mmol/L) 正常增多2.7.氯化物mmol/L（正常值 119-127mmol/L或 700-760mg/dL ） 正常減少增高3.病原培養(yǎng) :有無3.1.腦脊液有無送檢日期年月日 / / 3.1.1涂片結(jié)果陽性 血清群陰性未查Nm3.1.2 Nm培養(yǎng)結(jié)果陽性 血清群陰性未查113.1.3Nm特異抗原檢查陽性血清群陰性未查3.1.4Nm特異 DNA PCR 陽性血清群陰性未查3.2. 血液或出血點有無3.2.1標(biāo)本采集日期：年月日 / / 送檢日期年月日 / / 3.2.2Nm培養(yǎng)結(jié)果陽性 血清群陰性未查3.2.3特異抗原檢查陽

33、性血清群陰性 未查Nm3.2.4Nm特異 DNA檢查陽性血清群陰性未查3.3 尿液有無3.3.1標(biāo)本采集日期：年月日 / / 送檢日期年月日 / / 3.3.2Nm特異抗原檢查陽性血清群陰性未查3.3.3Nm特異 DNA PCR陽性血清群陰性未查血清學(xué)檢測：4.1.第一份血清：有無4.1.1標(biāo)本采集日期：年月日 / / 送檢日期：年月日 / / 4.1.2 Nm 特異抗體滴度 1 X_抗體檢測方法 _4.1.3血清分群 A 群 C群 B 群其他群（ 5）陰性 4.2.第二份血清：有無4.2.1標(biāo)本采集日期：年月日 / / 送檢日期：年月日 / / 4.2.2Nm特異抗體滴度 1 X _抗體檢測

34、方法 _4.2.3血清分群 A 群 C 群 B 群其他群(5）陰性5. 藥敏結(jié)果： 有無5.1. A群敏感藥品： _5.2. C群敏感藥品： _四、病例分類最終病例診斷結(jié)果疑似 臨床診斷實驗室確診排除如果不是排除病例，最終血清分群A 群 C群 B 群其他群不祥12五、與該病例密切接觸者的調(diào)查登記表與該病例接觸情況咽拭子標(biāo)本同同單鄰居采送病病性住住位疫苗集檢原原年齡日日分鑒姓名職業(yè)接種史別址期期離定培養(yǎng)六、措施1.是否對周圍人群預(yù)防性投藥1. 是2.否2.藥品名稱 _3.服藥人數(shù)_人4.是否應(yīng)急接種1. 是2.否5.疫苗種類_6.接種人數(shù)_人本表上報日期：年月日 /13填表說明請您用園珠筆或鋼筆

35、填寫。凡是數(shù)字，都填寫阿拉伯?dāng)?shù)字如：0、1、 2、 3、。請將所選擇答案的序號寫在題后的“”內(nèi)。4. 病例編號：共11 位，前 6 位為縣級國標(biāo)碼，7、 8 位表示病例發(fā)病年份，9-11 位為縣級單位的病例順序編號。將編碼依次填寫在相應(yīng)欄內(nèi)。001表示第 1例病例。調(diào)查日期：所有日期需填寫到日，填寫公歷時間，如入院時間為；時間不詳，則不填寫，以下相同。第 12 項中初診單位如果是正規(guī)醫(yī)院，應(yīng)詳細填寫醫(yī)院名稱，如果是個體診所，應(yīng)注明詳細地址。14附件 2流行性腦脊髓膜炎的樣品采集和運送適宜的檢測樣品為腦脊液、血液、皮膚粘膜出血點擠出液、血清及鼻咽拭子等。病例的腦脊液、血液、皮膚粘膜出血點擠出液中

36、檢出腦膜炎奈瑟菌可直接作為確診依據(jù)。一、樣品采集：1咽拭子：用長柄棉拭子采咽后壁兩側(cè)分泌物，立即接種于卵黃雙抗培養(yǎng)基（EPV）或巧克力血平板，也可將咽拭子放入液體雙抗增菌管內(nèi)，增菌8-12 小時以后分離培養(yǎng)。2腦脊液：采集 3-5 毫升腦脊液，可直接接種于巧克力或EPV平板，也可先增菌再進行分離培養(yǎng)。3血液：無菌手續(xù)抽取發(fā)熱期病人全血3-5 毫升，立即加于50 毫升的葡萄糖肉湯中增菌后再分離培養(yǎng)；4淤血點：選病人皮膚上的新鮮淤斑或淤血點，消毒后用針頭挑破，擠出組織液，用無菌棉簽蘸取先接種含雙抗的葡萄糖增菌肉湯管中增菌8-12 小時后分離培養(yǎng)或直接接種EPV平板，再涂片染色直接鏡檢。制成涂片，干

37、后革蘭染色，直接鏡檢；涂片也可做免疫熒光檢查。5血清：采集病人發(fā)病早期和恢復(fù)期（1-3 周內(nèi)）雙份血清，檢測血清中特異性抗體呈 4 倍或 4 倍以上升高。二、樣品的處理和運送1及時處理樣品：腦膜炎奈瑟菌比較脆弱，采集樣品后，應(yīng)盡可能地做到床邊接種，若無可能則應(yīng)再最短的時間內(nèi)送至實驗室進行接種培養(yǎng)。2早期采集樣品：應(yīng)盡可能采集病人用藥前的早期樣品，這可以明顯提高病原的檢出水平。3保溫運送：腦膜炎奈瑟菌對溫度較為敏感，溫度過低或過高均可導(dǎo)致菌株死亡。在運送樣品或培養(yǎng)物時，應(yīng)保持樣品處于20 - 36之間，切記不能低溫運送（檢測抗體的血清標(biāo)本除外）。要求每份血液標(biāo)本不少于3 毫升，分離血清后低溫(-

38、20 ) 保存，待檢測流腦抗體測定和 / 或細菌分離與鑒定。15附件 2A流行性腦脊髓膜炎病原學(xué)診斷方法A1病原體 ( 腦膜炎奈瑟氏菌Neissriameningiti s) 分離從疑似流腦患者采集CSF或急性期血液分離Nm。A1.1標(biāo)本的采集CSF：無菌操作，吸出CSF 2mL，立即放到無菌試管內(nèi)離心(2000 3000r/min ， 30min) ，用滅菌過的毛細管吸取沉淀物直接接種到10羊血巧克力色瓊脂上(CSF 上清液部分供檢測 Nm特異抗原，亦可將其置于 20待測 ) ， 5二氧化碳環(huán)境 37 培養(yǎng) 24 72h，每日檢查細菌生長的情況，及時分離純培養(yǎng)物供鑒定。血液：采取病人急性期靜

39、脈血液6mL，無菌操作，向盛有30mL增菌用葡萄糖肉湯的三角瓶內(nèi)注入4mL血液 ( 余下的 2mL血液離心后吸出血清，供檢測Nm特異抗原和抗體，亦可將其置于一20待測 ) ， 5二氧化碳環(huán)境，培養(yǎng)24 72h，每日進行觀察、分離、培養(yǎng)。A1.2接種和菌種鑒定細菌形態(tài)： Nm應(yīng)為革蘭陰性，呈卵圓形或腎形，0.8 m0.6 m大小。常成對排列，臨近兩邊扁平凹陷。菌落： Nm接種于巧克力色瓊脂平皿上，5二氧化碳， 37培養(yǎng) 24h 后，其菌落直徑約 1mm，表面突起、光滑、濕潤、圓整、略帶灰白色、半透明、不溶血、無色素。培養(yǎng)時間延長，菌落增大、變成黃色、不透明，并可出現(xiàn)顆粒狀中心和放射性周邊。生長及

40、抗原特性：絕大多數(shù) Nm菌株分解葡萄糖和麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。不分解蔗糖、果糖和乳糖。過氧化酶和氧化酶陽性。Nm新分離菌株具有下列主要抗原：血清群特異性莢膜多糖，主要外膜蛋白OMP(包括血清型特異的2/3 類 OMP，亞型特異的1 類 OMP以及 4 與 5 類 OMP)，鐵調(diào)節(jié)蛋白，脂寡糖(LOS) ，脂蛋白、菌毛抗原等，根據(jù)群特異性莢膜多糖的結(jié)構(gòu)與組成成分，Nm可分為 13 個血清群 (A 、B、 C、 D、 29E、 H、 I 、 K、 L、W135、 X、 Y、 Z) ，其中 90以上的病例是由A、 B和 C 群 Nm引起的。根據(jù) 2/3 類 OMP可將 B 群與 C 群 Nm分成 20

41、 個血清型，但差不多半數(shù)菌株目前尚不能分型。在可分型菌株中，以15、 2 和 4 型， P1.2 、 P1.1 、 P1.12 、 P1.15 及P1.16 亞型多見；對于 A 群 Nm現(xiàn)有 4 與 21 兩個血清型，以 P1.7 與 P1.9 亞型多見。 Nm還可以分成 13 個 LOS免疫型，其中 A 群以 L10 和 L11 型多見， B 群中以 L3， 7， 9 復(fù)合型多見。 Nm群特異性莢膜多糖、型和亞型的 OMP及 LOS等抗原成分對流腦發(fā)病與流行及其菌苗的研究均具有重要價值。16附件 2B流行性腦脊髓膜炎血清學(xué)診斷方法B1玻片凝集試驗B1.1目的應(yīng)用玻片凝集試驗對Nm病原菌株或帶

42、菌者菌株進行血清學(xué)分群。B1.2材料B1.2.1待檢的 Nm菌株純培養(yǎng)物。B1.2.2診斷血清：多價 I( 包含 A、 B、C、 D 群 ) ，多價包含1889(Y) 、Nm1890(H) 、 1892(29E) ，多價包含319(W135)、 1916(X) 、 1486(I)、 1811(K) 群及 11群單價血清，共計 14 種。B1.2.3潔凈載玻片。B1.2.4生理鹽水。B1.3試驗方法B1.3.1先將診斷血清按說明書稀釋成所需的濃度，滴一滴在潔凈的玻片上。B1.3.2用白金耳刮取菌苔少許，在玻片上沾取少量血清，在一旁研磨均勻，再與血清混勻。B1.3.3輕輕搖動玻片數(shù)次，在12min

43、 內(nèi)出現(xiàn)明顯凝集者，即為陽性。B1.3.4檢查從病人分離的疑似時，先試 A 群血清，若不與其發(fā)生凝集，則試用BNm或 C 群血清，仍不凝集時，則試用多價或多價血清。若發(fā)生凝集，再用單價血清定群。從病人分離的疑似 Nm對現(xiàn)有診斷血清皆不凝集者則送研究單位進一步鑒定。在玻片上與各群診斷血清、鹽水或正常兔血清皆發(fā)生凝集者，即定為自凝菌。B2 酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA) ：按照試劑盒說明書進行操作。B3 殺菌力試驗B3.1 目的應(yīng)用微量殺菌力試驗 (TTC 法 ) 測定病人急性期和恢復(fù)期血清中對 Nm的殺菌抗體水平。此方法也可用于健康人群的血清抗體測定。B3.2 材料17靶菌：對補體的自然殺菌作

44、用具有耐受性，但對殺菌抗體反應(yīng)敏感的Nm(A 群29019， B 群和 C 群 Nm)。稀釋液： Dulbeccos 磷酸鹽緩沖鹽水A 液：氯化鈉 (NaCl)8.0g，氯化鉀 (KCl)0.2g，磷酸氫二鈉(Na2HPO4)1.15g ，磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.2g ，蒸餾水 800mL；B 液：氯化鈣 (CaCl 2)0.1g ，蒸餾水100mL；C液：氯化鎂 (MgCl 26H2O)0.1g ，蒸餾水100mL。上述三液分別滅菌121， 15min ，置 4備用。需用時按A 液 8 份， B 液和 C 液各 1份的比例混合，pH 為 7.1 。使用時每 100mL稀釋液加滅活兔血清

45、1mL，萬古霉素500 g，多粘菌素B 2500 單位或硫酸抗敵霉素5000 單位。稀釋液盛于小瓶中，置4備用，可存放2 周。滴定板：底部呈“ U”形的96 孔有機玻璃微滴板，并備用同樣大小的普通玻璃作蓋板。將它們平放在80的烤箱內(nèi)烤2h 后備用。試驗完畢，以約80的熱水泡板1h殺死靶菌，再以自來水沖洗干凈，并用棉棒拭凈不潔凈的孔。最后以蒸餾水沖洗一次，37烤干后同上于80干烤。滴定板使用一段時間后或遇到雜菌污染較嚴(yán)重時，可用熱水殺死靶菌并沖洗干凈；在比較稀的硫酸重鉻酸鉀清潔液內(nèi)浸泡4h，沖洗干凈后同上處理備用。B3.2.4兔補體：可以購買成品。B3.2.5氯化三苯四氮唑 (Triphenyl

46、TetrazoliumChloride ， TTC)瓊脂培養(yǎng)基 (TTC瓊脂 )B3.2.5.1TTC瓊脂配方：牛肉膏 0.5 ，氯化鈉0.5 ，日本蛋白胨3.0 ，可溶性淀粉0.2 ，以蒸餾水配制，調(diào) pH7.4 7.6 ，瓊脂 0.5 。TTC瓊脂制作上述培養(yǎng)基成分熔化后，按每10mL或 20mL分裝于大試管，121滅菌 15min，冷卻后置 4備用。臨用前將培養(yǎng)基加熱熔化，每10mL培養(yǎng)基加50葡萄糖注射液0.1mL，1TTC水溶液 (4 避光保存 )0.1mL ，混勻放在45水溶液中待用。陽性參考血清用 Nm免疫兔制備的診斷血清，未加防腐劑，經(jīng)預(yù)試測定其殺菌抗體滴度較高(1 3200以

47、上)。18B3.3殺菌抗體測定步驟靶菌液的制備B3.3.1.1開啟 A、 B 或 C 群 Nm菌種，接種到巧克力色瓊脂平皿上，37二氧化碳孵箱或燭缸培養(yǎng)15 20h，挑取 3 5 個菌落涂于另一平皿，同上培養(yǎng)10 15h。B3.3.1.2用 Nm診斷血清和生理鹽水進行玻片凝集及顯微鏡檢查，以核實菌種。B3.3.1.3菌種被確證以后，取其菌苔，混勻于2mL滅菌脫脂牛奶管中，制成濃菌液，分裝若干支小試管，每管約0.2mL，置 20以下保存， Nm可存活 3 6 個月。需用靶菌時，取出一支上述牛奶菌種管，熔化后立即轉(zhuǎn)種并放在4冰箱內(nèi)保存，供每日分離靶菌制作菌懸液，可備用2 周。在測定抗體的過程中，每

48、次所用靶菌傳種的代數(shù)保持一致。從所分離的靶菌平皿上挑取3 5 個典型菌落，涂抹轉(zhuǎn)種1/4 巧克力色瓊脂平皿， 37燭缸培養(yǎng)4 6h，刮取菌苔，于盛有3.5mL 左右稀釋液的試管壁上用白金耳將其充分研磨，制成輕度混濁的均勻菌懸液，其光密度值相當(dāng)于0.1 。取出上述菌懸液2mL加到 0.5cm 的比色杯內(nèi)，在波長為540nm的分光光度計上測其光密度值。稀釋液用量按式(B1) 計算：XOD100.1 (B1)式中： X稀釋液用量，mL；OD光密度值。按照式 (B1)計算稀釋液用量，然后往里加入0.1mL 靶菌懸液，此時相當(dāng)于光密度值為0.1 的靶菌液作了 10 倍稀釋。吹吸均勻后，由其開始再連續(xù)作1

49、0 倍稀釋至 10 5 稀釋度，以菌液的最終濃度為每毫升含4000 個菌落形成單位為宜。B3.3.1.8稀釋好的靶菌懸液在 1h 內(nèi)用完。殺菌抗體的測定B3.3.2.1先在微滴板每孔內(nèi)加 1 滴相當(dāng)于 25 L 的稀釋液。B3.3.2.2用移液器從每排第一孔內(nèi)加25 L 經(jīng) 56 30min 滅活的待檢血清，吹吸5 10 次后吸出25L 至下一孔，如此作連續(xù)倍比稀釋至最后一孔。每份血清分別用一支移液槍頭。B3.3.2.3從低溫冰箱內(nèi)取出補體，于37溫水中搖動將其速溶，每孔加一滴。若補體已冷凍干燥，可往安瓿內(nèi)加相當(dāng)于補體血清原體積的稀釋液，使其融化后即刻使用。19每孔加一滴稀釋成合適濃度的靶菌菌

50、液，微滴板置微型振蕩器上中速振蕩5min，再在 37培養(yǎng) 25min ，取出后重復(fù)上述振蕩。每孔加 2 滴已熔化冷至45左右的TTC瓊脂后，微滴板置37燭缸內(nèi)培養(yǎng)15 20h 后觀察結(jié)果。每次試驗需做下列對照：陽性參考血清對照；4 孔補體對照 ( 稀釋液、補體、菌液各一滴，檢查補體自然殺菌活性) ； 4 孔細菌生長對照( 稀釋液、滅活補體和靶菌菌液各1 滴) 。每次檢測時至少每5 塊微滴板中應(yīng)有一組上述三種對照試驗。往各孔滴完靶菌菌液之后，應(yīng)將該菌液兩滴分別滴加到一個巧克力色瓊脂平皿的一端，沿著劃好的兩條線傾斜下流，于37燭缸內(nèi)同時培養(yǎng)，次日檢查每滴靶菌的菌落數(shù)及其純度。判斷結(jié)果時，先檢查上述

51、三種對照試驗的結(jié)果：補體的和細菌生長對照的各孔應(yīng)出現(xiàn)眾多的紅色點狀小菌落；陽性參考血清應(yīng)達到原來確定的殺菌滴度。若所試各孔中紅色點狀菌落數(shù)目明顯地少于補體對照孔或不出現(xiàn)紅色點狀菌落時，則判斷為殺菌陽性；如果所試孔中的菌落數(shù)目接近補體對照孔的一半或更多時，則判斷為殺菌陰性。根據(jù)紅色點狀菌落數(shù)目的多少，以符號“”記錄試驗結(jié)果。若補體及靶菌生長對照各孔的細菌正常生長時，應(yīng)出現(xiàn)眾多紅色點狀菌落，可記為“”。當(dāng)所試各孔與其比較，菌落數(shù)減少30以下，記為“”；減少50左右記為“”；減少70左右記為“”；每孔少于10 個菌落則記為“”。以細菌生長成呈“”及以下者判斷為殺菌陽性；以“”及以上者判為殺菌陰性。以

52、出現(xiàn)殺菌陽性的血清最高稀釋度為殺菌抗體的最高滴度。20附件 2C流行性腦脊髓膜炎膠乳凝集試驗C1目的應(yīng)用膠乳凝集試驗測定病人CSF、急性期血清和尿中Nm群特異抗原，輔助流腦臨床診斷。C2材料可購買成品膠乳檢測試劑，按照說明書進行操作。C3.2以膠乳凝集試驗檢測疑似流腦病人標(biāo)本內(nèi)Nm群特異性抗原。病人標(biāo)本的處理：CSF離心 (3000r/min， 30min) ，取上清，沉淀部分作細菌培養(yǎng)；急性期血液(2mL) ，分離血清，置56將其滅活30min；急性期尿液5mL加 20mL無水乙醇，置4 1 2h，離心 (3000r/min， 15min) ，棄上清，收集沉淀部分加0.25mL BBSB液將其溶解，同前離心，小心地吸取上清液待測，不要吸取尿中不溶解的沉渣。在上述病人標(biāo)本中只要有一種標(biāo)本與抗任何一群Nm的 IgG 所致敏的Lx 發(fā)生明顯凝集反應(yīng)，則說明所檢標(biāo)本中含有Nm相應(yīng)群特異的抗原，即可輔助臨床診斷為流腦。21附件 2D標(biāo)本及疑似菌株輔助鑒定對于不能用血清學(xué)分群的腦膜炎奈瑟菌疑似菌株或無法進行腦膜炎奈瑟菌分離培養(yǎng)的腦脊液、血液、血清標(biāo)本可采用方法進行擴增輔助檢測鑒定。3.1目的基因：唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因（siaD 基因）：可以作為PCR擴增的目的片段來區(qū)