自考生物工藝學全

1、1、近年來發(fā)展起來的保藏菌種的理想且適用范圍最廣的是（ ） 沙土管保藏法 斜面冰箱保藏法 石蠟油封存法 液氮超低溫保藏法2、保證種子質(zhì)量的控制措施，首先必須保證生產(chǎn)菌種的穩(wěn)定性，其次是保證（ ） 無雜菌侵入 溫度恒定 通氣充分 接種量3、菌種斜面冰箱保藏法一般保存期為（ ） 1周 1個月 36個月 1年以上4、原生質(zhì)體融合通常指在高滲條件下，將兩親本原生質(zhì)體混合，由（）作為助融劑，使它們互相凝集發(fā)生細胞融合。 聚乙二醇 瓊脂糖 病毒粒子 半胱氨酸5、培養(yǎng)和分離放線菌，通常采用的培養(yǎng)基為（ ） 牛肉膏蛋白胨瓊脂 查氏培養(yǎng)基 幾丁質(zhì)培養(yǎng)基 馬鈴薯培養(yǎng)基6、給混合菌群提供一些有利于某種菌株生長或不利

2、于其他菌株生長的條件，從而獲得所需菌種或某些特殊菌種的分離方法為（ ） 隨機分離法 劃線分離法 富集培養(yǎng)分離法 平板分離法7、沙土管菌種保藏法是一種工業(yè)生產(chǎn)菌種常用的保藏方法，適合于產(chǎn)孢子或芽孢的微生物，一般保存期為（ ） 半年左右 一年左右 二年左右 五年左右8、發(fā)酵過程中，為了提高青霉素的產(chǎn)量，通常在發(fā)酵中后期補充（ ）前體物質(zhì)。 苯乙酰胺 肌醇 甘氨酸 丙酸鹽1、下列不是次級代謝產(chǎn)物的是（ ） 脂肪 抗生素 色素 毒素1、保證種子質(zhì)量的控制措施，首先必須保證生產(chǎn)菌種的穩(wěn)定性，其次是保證（ ） 無雜菌侵入 溫度恒定 通氣充分 接種量2、影響種子質(zhì)量的主要因素是（ ） 原材料質(zhì)量 培養(yǎng)條件

3、斜面冷藏時間 以上都是3、種子制備過程中，生產(chǎn)車間種子制備階段是（ ）固體培養(yǎng)基擴大培養(yǎng) 種子罐擴大培養(yǎng) 搖瓶液體種子培養(yǎng) 斜面種子培養(yǎng)1、發(fā)酵過程中，培養(yǎng)基營養(yǎng)過于豐富，菌體生長旺盛，發(fā)酵液粘稠，對產(chǎn)物的合成（ ） 有利 不利 無關(guān) 難以確定2、在微生物深層培養(yǎng)過程中由于通氣和攪拌、代謝氣體的逸出以及培養(yǎng)基中糖、蛋白質(zhì)等原因產(chǎn)生大量泡沫，給發(fā)酵帶來“逃液”及污染雜菌等現(xiàn)象。為了有效地控制泡沫的發(fā)生，生產(chǎn)上采用控制泡沫的方法有（ ） 酸法消沫 空氣消沫 壓力消沫 機械消沫和消沫劑消沫3、種齡是指種子罐中培養(yǎng)的菌體開始移入發(fā)酵罐時的培養(yǎng)時間。適當?shù)姆N齡有利于發(fā)酵，通常，接種齡以菌體的（ ）較為合

4、適。 延遲期 對數(shù)期 減速期 穩(wěn)定期2、酶是一種具有專一催化活性的生物催化劑，它的催化活性主要依賴于其具有特殊的（ ） 活性中心 金屬離子 底物 輔基1、氨基酸發(fā)酵工業(yè)中，淀粉水解糖的制備一般采用（ ） 堿水解法 酸酶水解法 酸水解法 酶水解法1、目前我們所發(fā)現(xiàn)的抗生素產(chǎn)生菌大多來自于（ ） 細菌 絲狀真菌 放線菌 酵母菌1、誘變育種：用各種物理、化學的因素人工誘發(fā)基因突變進行的篩選，稱為誘變育種2、自然選育：利用微生物在一定的條件下自發(fā)變異的原理，通過分離篩選的方法，排除衰變型菌株，從中選擇維持原菌生產(chǎn)水平的菌株，并得到純種。3、生理堿性物質(zhì)：若菌體代謝后能產(chǎn)生堿性物質(zhì)的則此種無機氮源稱為生

5、理堿性物質(zhì)，如硝酸鈉。正確使用生理酸堿性物質(zhì)，對穩(wěn)定和調(diào)節(jié)發(fā)酵過程的pH有積極作用。 4、生理酸性物質(zhì)：無機氮源被菌體作為氮源利用后，培養(yǎng)液中就留下了酸性或堿性物質(zhì)，這種經(jīng)微生物生理作用（代謝）后能形成酸性物質(zhì)的無機氮源叫生理酸性物質(zhì)5、前體：前體指某些化合物加入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，能直接被微生物在生物合成過程中合成到產(chǎn)物物分子中去，而其自身的結(jié)構(gòu)并沒有多大變化，但是產(chǎn)物的產(chǎn)量卻因加入前體而有較大的提高。7產(chǎn)物促進劑：所謂產(chǎn)物促進劑是指那些非細胞生長所必須的營養(yǎng)物，又非前體，但加入后卻能提高產(chǎn)量的添加劑8、代謝控制發(fā)酵：人為地改變微生物的代謝調(diào)控機制，是有用的中間代謝產(chǎn)物過量積累，這種發(fā)酵稱代謝控

6、制發(fā)酵。研究內(nèi)容：研究微生物的生理代謝規(guī)律，即生物合成各種代謝產(chǎn)物的途徑和代謝調(diào)節(jié)機制，環(huán)境因素對代謝方向的影響以及改變微生物代謝方向的措施。9、巴斯德效應(yīng)： 在好氣條件下，酵母菌發(fā)酵能力下降（細胞內(nèi)糖代謝降低，乙醇積累減少）；不僅存在于酵母中，也存在于具有呼吸和發(fā)酵能力的其他細胞中。10、葡萄糖效應(yīng)：又稱葡萄糖阻遏。葡萄糖或某些容易利用的碳源，其分解代謝產(chǎn)物阻遏某些誘導酶體系編碼的基因轉(zhuǎn)錄的現(xiàn)象。如大腸埃希氏菌培養(yǎng)在含葡萄糖和乳糖的培養(yǎng)基上，在葡萄糖沒有被利用完之前，乳糖操縱子就一直被阻遏，不能被利用。這是因為葡萄糖的分解物引起細胞內(nèi)cAMP含量降低，啟動子釋放cAMPCAP蛋白質(zhì),RNA聚

7、合酶不能與乳糖的啟動基因結(jié)合，以致轉(zhuǎn)錄不能發(fā)生，直到葡萄糖被利用完，乳糖操縱子才能被轉(zhuǎn)錄，形成利用乳糖的酶。10、發(fā)酵熱：發(fā)酵熱就是發(fā)酵過程中釋放出來的凈熱量。在發(fā)酵過程中產(chǎn)生菌分解基質(zhì)產(chǎn)生熱量，機械攪拌產(chǎn)生熱量，而罐壁散熱、水分蒸發(fā)、空氣排氣帶走熱量。這各種產(chǎn)生的熱量和各種散失的熱量的代數(shù)和就叫做凈熱量。12、臨界溶氧濃度：指不影響呼吸所允許的最低溶氧濃度。1、菌株分離：就是將一個混雜著各種 HYPERLINK /view/3736.htm t _blank 微生物的樣品通過分離技術(shù)區(qū)分開，并按照實際要求和菌株的特性采取迅速、準確、有效的方法對他們進行 HYPERLINK /view/351

8、036.htm t _blank 分離、篩選，進而得到所需微生物的過程。2、篩選：是指一種以多數(shù)物質(zhì)中按預定目標就某種具有特定性質(zhì)的物質(zhì)進行精選的操作過程。3、工業(yè)菌種的育種：是運用遺傳學原理和技術(shù)對某個用于特定生物技術(shù)目的的菌株進行的多方位的改造。通過改造，可使現(xiàn)存的優(yōu)良性狀強化，或去除不良性質(zhì)或增加新的性狀。4、菌種的復壯：狹義的復壯是一 HYPERLINK /view/619409.htm t _blank 消極措施，一般指對已衰退的菌種進行復壯；廣義的復壯是一積極的措施，即在菌種的生產(chǎn)性狀未衰退前就不斷進行純種分離和生產(chǎn)性狀測定，以在群體中獲得生產(chǎn)性狀更好的自發(fā) HYPERLINK /

9、view/2099977.htm t _blank 突變株。5、種子擴大培養(yǎng)：指將保存在砂土管、冷凍干燥管中處休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后，再經(jīng)過扁瓶或搖瓶及 HYPERLINK /view/3167927.htm t _blank 種子罐逐級擴大培養(yǎng),最終獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種過程。6、培養(yǎng)基：是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、 HYPERLINK /view/151020.htm t _blank 無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。8、生長因子：凡是微生物生長不可缺少的微量有機物質(zhì)都稱為生長因子。9、分批培養(yǎng)：是指在一個

10、密閉系統(tǒng)內(nèi)投入有限數(shù)量的營養(yǎng)物質(zhì)后，接入少量的微生物菌種進行培養(yǎng)，使微生物生長繁殖，在特定的條件下只完成一個生長周期的微生物培養(yǎng)方法。 10、補料分批培養(yǎng) ：介于分批培養(yǎng)和連續(xù)培養(yǎng)之間的培養(yǎng)方法。在微生物或動植物細胞培養(yǎng)過程中，隨著營養(yǎng)物質(zhì)消耗，間歇或連續(xù)地添加營養(yǎng)成分或新鮮培養(yǎng)基，但不同時收獲培養(yǎng)液。11、連續(xù)培養(yǎng)：又稱連續(xù)發(fā)酵，指在分批式液體深層培養(yǎng)至微生物對數(shù)后期時，以一定的流速向發(fā)酵罐中連續(xù)添加滅菌的新鮮液體培養(yǎng)基，同時以相同的流速自發(fā)酵罐中排出發(fā)酵液的發(fā)酵方法。12、發(fā)酵熱：是發(fā)酵過程中釋放出來的凈熱量。各種產(chǎn)生的熱量和各種散失的熱量的代數(shù)和就叫做凈熱量。13、初級代謝產(chǎn)物：微生物從

11、外界吸收各種營養(yǎng)物質(zhì)，通過分解代謝和合成代謝，生成維持生命活動必需的物質(zhì)和能量。如蛋白質(zhì)、核酸等。14、次級代謝產(chǎn)物：是指 HYPERLINK /view/3736.htm t _blank 微生物生長到一定階段才產(chǎn)生的化學結(jié)構(gòu)十分復雜、對該生物無明顯生理功能，或并非是微生物 HYPERLINK /view/539997.htm t _blank 生長和 HYPERLINK /view/258039.htm t _blank 繁殖所必需的物質(zhì)，如 HYPERLINK /view/1325.htm t _blank 抗生素、 HYPERLINK /view/341068.htm t _blank

12、 毒素、 HYPERLINK /view/1322.htm t _blank 激素、 HYPERLINK /view/92530.htm t _blank 色素等。15、淀粉的液化：利用化學或生物催化劑，在具有一定量的水和一定的溫度條件下，使淀粉分子斷裂而變成較小分子，使淀粉糊的粘度顯著下降而成為流動性較好的流體的過程。主要有酸法和酶法。16、代謝控制發(fā)酵：用人工誘變的方法，有意識地改變微生物的代謝途徑，最大限度地積累產(chǎn)物。18、熱原：是在生產(chǎn)過程中由于被污染后由雜菌所產(chǎn)生的一種內(nèi)毒素。熱原注入體內(nèi)引起惡寒高熱，嚴重的引起休克。19、前體：指加入到培養(yǎng)基中的某些化合物能被微生物直接結(jié)合到產(chǎn)物分

13、子中，而自身的結(jié)構(gòu)無多大變化，且具有促進產(chǎn)物合成的作用。20、介質(zhì)過濾除菌：是使空氣通過經(jīng)高溫滅菌的介質(zhì)過濾層，將空氣中的微生物等顆粒阻截在介質(zhì)層中，而達到除菌的目的。一般是棉花、活性炭，也有采用玻璃纖維、焦炭等。21、同型發(fā)酵：是葡萄糖經(jīng)EMP途徑降解為丙酮酸，丙酮酸在丙酮酸脫氫酶的催化下還原為乳酸的過程。理論轉(zhuǎn)化率為100%，實際轉(zhuǎn)化率80%以上。22、異型發(fā)酵：是某些乳酸細菌利用HMP途徑，分解葡萄糖為5-磷酸核酮糖，再經(jīng)差向異構(gòu)酶作用變成5-磷酸木酮糖，然后經(jīng)磷酸酮解酶催化裂解，生成3-磷酸甘油醛和23.抗生素：是由微生物、動物和植物細胞在生長代謝過程中所產(chǎn)生的，能在低微濃度下有選擇性

14、地抑制或殺滅他種生物或腫瘤細胞的一類有機化合物。24.半合成抗生素：指用化學或生物化學的方法改變已知抗生素的化學結(jié)構(gòu)，或引入特定的功能基團而獲得的新抗生素或其衍生物的總稱。25.生物需氧量：在一定溫度、一定時間內(nèi)微生物利用有機物進行生物氧化所需要氧的量。26.化學需氧量：指用強氧化劑氧化水中污染物時所需消耗的氧量。 27.種子擴大培養(yǎng)：是指將保存在沙土管、冷凍干燥管中處于休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后，再經(jīng)過扁瓶或搖瓶及種子罐逐級擴大培養(yǎng)而獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種過程。 28.反饋抑制：是一生物合成途徑中的最終代謝產(chǎn)物抑制那一途徑的前面第一個酶或第二個酶的作用。 29. 協(xié)同反饋抑制：指

15、只有一種酶受抑制，但要抑制或阻遏這種酶需要一個以上的終點產(chǎn)物過量存在。 30.反饋阻遏：是抑制酶的形成，是由途徑中的終點產(chǎn)物或其衍生物實行的。 31.自然突變 ：是指某些微生物在沒有人工參與下所發(fā)生的那些突變。 32.雜交育種 ： 是指將兩個基因型不同的菌株經(jīng)吻合使遺傳物質(zhì)重新組合，從中分離和篩選具有新性狀的菌株。 33.固定化酶：指在一定空間內(nèi)受到完全約束或者局部約束的酶。34.酶：指具有生物催化功能的蛋白質(zhì)。1、酶分子構(gòu)象的改變和載體屏障效應(yīng)、（分配效應(yīng) ）和（擴散阻力）是影響固定化酶動力學的主要因素。1自然界分離微生物的一般操作是_土樣的采取_、_預處理_、_培養(yǎng)_、_菌落的選擇及鑒定_

16、2從環(huán)境中分離目的微生物時，進行富集的目的是_讓目的微生物在種群中占優(yōu)勢，使篩選變得可能。3菌種選育分子改造的目的是_ 防止菌種退化、解決生產(chǎn)實際問題、_提高生產(chǎn)能力、_提高產(chǎn)品質(zhì)量、開發(fā)新產(chǎn)品。4培養(yǎng)基成分選擇的原則是_菌體的同化能力_、_代謝的阻遏與誘導_、_合適的C 、N比_、_PH的要求_5種子擴大培養(yǎng)的目的是種子量的需要_、_菌種的馴化_、_縮短發(fā)酵時間、保證生產(chǎn)水平_與要求_總量與濃度能滿足要求_、_生理狀態(tài)穩(wěn)定_、_活力強，移種至發(fā)酵后能迅速生長_、_無雜菌污染_6種子擴大培養(yǎng)的一般步驟_斜面菌種制備_、_一級種子培養(yǎng)、二級種子培養(yǎng)、發(fā)酵_。7在釀酒過程中影響雜醇油生成的原因是_

17、菌種_、_培養(yǎng)基_、_發(fā)酵條件。8谷氨酸發(fā)酵的三個關(guān)鍵點是_檸檬酸合成酶_、_烏頭酸梅_異檸檬酸脫氫酶_。9發(fā)酵過程溫度選擇的依據(jù)有 根據(jù)菌種及生長階段_、_根據(jù)培養(yǎng)條件_、_根據(jù)菌生長情況10設(shè)備滲漏_、_空氣帶菌_、_種子帶菌_、_滅菌不徹底_、_技術(shù)管理部善_是引起雜菌污染的原因。11. 發(fā)酵中泡沫生成的原因是_通氣攪拌的強烈程度_、_培養(yǎng)基配比與原料的組成_、_菌種、種子質(zhì)量、接種量_和_滅菌質(zhì)量。12. 采用_輻射滅菌_、_加熱滅菌_、_靜電除菌_和_介質(zhì)過濾除菌 進行空氣除菌。13. 發(fā)酵醪中獲得產(chǎn)物分為_菌體_、_酶_和_代謝產(chǎn)物_三大類。2、氨基酸生產(chǎn)過程中一般采用流加（ 尿素

18、 ）或（氨水 ）的方法來控制pH值變化。1、目前施加選擇壓力的菌種分離方法有（富集液體培養(yǎng)）和（ 固體培養(yǎng)基的使用 ）。2、目前菌種選育的方法有（自然選育）、（誘變選育）、抗噬菌體菌株的選育、（雜交育種）和原生質(zhì)體融合技術(shù)。3、放線菌染色體結(jié)構(gòu)決定其基因重組過程的特殊性，其重組過程大體上有異核現(xiàn)象、（接合現(xiàn)象）、異核系的形成和（重組體的形成）四種遺傳體系。4、含有重組DNA質(zhì)粒的基因工程菌在培養(yǎng)中與普通微生物的最大差別是表現(xiàn)出質(zhì)粒的不穩(wěn)定性。這種不穩(wěn)定性表現(xiàn)為（質(zhì)粒的不穩(wěn)定 ）和（表達產(chǎn)物的不穩(wěn)定 ）兩種形式。1、為了解除基質(zhì)過濃的抑制、產(chǎn)物的反饋抑制和葡萄糖分解阻遏效應(yīng)，以及避免在分批發(fā)酵中

19、因一次性投糖過多造成細胞大量生長，耗氧過多而供氧不足的狀況，采用（中間補料 ）是較為有效的。2、在Jacob-Monod模型中，（無）誘導物時，調(diào)節(jié)基因編碼的阻遏物結(jié)合到操縱基因上，從而抑制結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄；（有）誘導物時，誘導物與阻遏物結(jié)合，從而使結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄可以進行。3、微生物代謝的反饋調(diào)節(jié)作用，目前已知的主要有（反饋抑制）和（反饋阻遏）兩種類型。1、工業(yè)微生物絕大部分都是異養(yǎng)型微生物，其培養(yǎng)基通常包括（碳源）、（ 氮源）、（無機鹽及微量元素）、（前體促進劑）等。2、發(fā)酵工業(yè)上，培養(yǎng)基按其用途可分為（ 孢子培養(yǎng)基）、（種子培養(yǎng)基）和（發(fā)酵培養(yǎng)基）三種。4、種子制備的工藝過程大致可以分為（實驗

20、室種子制備）和（生產(chǎn)車間種子制備）兩個階段。5、種子制備的工藝過程大致可以分為實驗室種子制備和生產(chǎn)車間種子制備兩個階段，其中實驗室種子制備階段包括（瓊脂斜面）、（ 固體培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)）或（搖瓶液體培養(yǎng)）。5、分批培養(yǎng)中，細胞一般經(jīng)歷（ 延滯期 ）、（ 對數(shù)期 ）、減速期、（ 穩(wěn)定期 ）和衰亡期五個時期。3、酶和細胞的固定化方法主要有（吸附法）、（ 包埋法 ）、（ 交聯(lián)法 ）、化學共價法和逆膠束酶反應(yīng)系統(tǒng)。1、體外培養(yǎng)動物細胞，根據(jù)其生長性質(zhì)，可分為（貼壁依賴型 ）和（懸浮型 ）兩類，通常淋巴細胞、腫瘤細胞屬于（懸浮型）。2、采用液體培養(yǎng)方式大量培養(yǎng)植物細胞的流程為（外植體的選擇和培養(yǎng)）、（ 愈

21、傷化）、搖瓶培養(yǎng)和（大量懸浮培養(yǎng)）。1、污水處理的基本方法按處理原理可分為（ 物理法 ）、（ 化學法 ）和（生化法 ）三大類。3、目前我們所發(fā)現(xiàn)的抗生素產(chǎn)生菌大多來自于（放線菌）綱，其中80%-90%源自于（ 鏈霉菌）屬。1、生物反應(yīng)器設(shè)計和操作的限制因素除傳質(zhì)和傳熱外，還受（酶）或（微生物）等生物催化劑因素的限制。2、按照能量輸入的方式，發(fā)酵罐可以分為（內(nèi)部機械攪拌式發(fā)酵罐）、（外部液體循環(huán)式發(fā)酵罐 ）和空氣噴射提升式發(fā)酵罐。四、簡答題16. 種子擴大培養(yǎng)的目的與要求？ 目的：接種量的需要 菌種的馴化 縮短發(fā)酵時間、保證生產(chǎn)水平 要求：1總量及濃度能滿足要求2生理狀況穩(wěn)定，個體與群體3活力強

22、，移種至發(fā)酵后，能夠迅速生長4無雜菌污染17. 種子擴大培養(yǎng)的一般步驟？休眠孢子母斜面活化搖瓶種子或茄子瓶斜面或固體培養(yǎng)基孢子一級種子罐二級種子罐發(fā)酵罐18. 在大規(guī)模發(fā)酵的種子制備過程中，實驗室階段和生產(chǎn)車間階段在培養(yǎng)基和培養(yǎng)物選擇上各有何特點？ 實驗室階段 在原料方面，實驗室種子培養(yǎng)階段，規(guī)模一般比較小，因此為了保證培養(yǎng)基的質(zhì)量，培養(yǎng)基的原料一般都比較精細。 生產(chǎn)車間階段 在原料方面：不如實驗室階段那么精細，而是基本接近于發(fā)酵培養(yǎng)基，這有兩個方面的原因: 1）成本 2）馴化9. 常用的碳源有哪些？常用的糖類有哪些，各自有何特點？ 碳源： 葡萄糖 糖蜜 淀粉 糊精 糖類：碳源:糖類（淀粉、葡

23、萄糖、蔗糖等）、油脂（動、植物油）、有機酸（琥珀酸、檸檬酸、乳酸、乙酸等）和低碳醇（甲醇、乙醇等）。葡萄糖，所有的微生物都能利用葡萄糖，但是會引起葡萄糖效應(yīng)糖蜜，是制糖生產(chǎn)時的結(jié)晶母液，它是制糖工業(yè)的副產(chǎn)物。主要含有蔗糖，總糖可達50%75%。一般糖蜜分甘蔗糖蜜和甜菜糖蜜葡萄糖蜜。除糖份外，含有較多的雜質(zhì)，其中有些是有用的，但是許多都會對發(fā)酵產(chǎn)生不利的影響，需要進行預處理。淀粉、糊精，缺點：難利用、發(fā)酵液比較稠、一般2.0%時加入一定的-淀粉酶。成分比較復雜，有直鏈淀粉和支鏈淀粉等等。優(yōu)點：來源廣泛、價格低，可以解除葡萄糖效應(yīng)。8. 什么是培養(yǎng)基?發(fā)酵培養(yǎng)基的特點和要求？培養(yǎng)基：廣義上講培養(yǎng)基

24、是指一切可供微生物細胞生長 繁殖所需的一組營養(yǎng)物質(zhì)和原料。同時培養(yǎng)基也為微生物培養(yǎng)提供除營養(yǎng)外的其它所必須的條件。 發(fā)酵培養(yǎng)基的要求 培養(yǎng)基能夠滿足產(chǎn)物最經(jīng)濟的合成 發(fā)酵后所形成的副產(chǎn)物盡可能的少 培養(yǎng)基的原料應(yīng)因地制宜，價格低廉；且性能穩(wěn)定，資源豐富，便于采購運輸，適合大規(guī)模儲藏，能保證生產(chǎn)上的供應(yīng)。 所選用的培養(yǎng)基應(yīng)能滿足總體工藝的要求，如不應(yīng)該影響通氣、提取、純化及廢物處理等。19什么是代謝控制發(fā)酵？代謝控制發(fā)酵的研究內(nèi)容是什么？人為地改變微生物的代謝調(diào)控機制，是有用的中間代謝產(chǎn)物過量積累，這種發(fā)酵稱代謝控制發(fā)酵。研究內(nèi)容：研究微生物的生理代謝規(guī)律，即生物合成各種代謝產(chǎn)物的途徑和代謝調(diào)節(jié)

25、機制，環(huán)境因素對代謝方向的影響以及改變微生物代謝方向的措施。20簡述糖酵解的調(diào)節(jié)機制21什么是巴斯德效應(yīng)？巴斯德效應(yīng)的機制是什么？在好氣條件下，酵母菌發(fā)酵能力下降（細胞內(nèi)糖代謝降低，乙醇積累減少）；不僅存在于酵母中，也存在于具有呼吸和發(fā)酵能力的其他細胞中。 機制；第一個調(diào)節(jié)點是磷酸果糖激酶，此酶是變構(gòu)酶，受ATP,檸檬酸及其他的高能化合物抑制，被AMP,ATP,激活。22在釀酒過程中影響雜醇油生成的原因是什么？ 1，酵母菌種，2培養(yǎng)及組成，3發(fā)酵條件44. pH對發(fā)酵的影響表現(xiàn)在哪些方面？（1）pH影響酶的活性。當pH值抑制菌體某些酶的活性時使菌的新陳代謝受阻。（2）pH影響微生物細胞膜所帶電

26、荷。從而改變細胞膜的透性，影響微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收及代謝物的排泄，因此影響新陳代謝的進行。（3）pH值影響培養(yǎng)基某些成分和中間代謝物的解離，從而影響微生物對這些物質(zhì)的利用。（4）pH值影響代謝方向。pH不同，往往引起菌體代謝過程不同，使代謝產(chǎn)物的質(zhì)量和比例發(fā)生改變。例如黑曲霉在pH23時發(fā)酵產(chǎn)生檸檬酸，在pH近中性時，則產(chǎn)生草酸。谷氨酸發(fā)酵，在中性和微堿性條件下積累谷氨酸，在酸性條件下則容易形成谷氨酰胺和N-乙酰谷氨酰胺。（5）pH在微生物培養(yǎng)的不同階段有不同的影響。45. 發(fā)酵過程的pH控制可以采取哪些措施？基礎(chǔ)培養(yǎng)基調(diào)節(jié)pH在基礎(chǔ)料中加入維持pH的物質(zhì)通過補料調(diào)節(jié)pH 當補料與調(diào)pH發(fā)生

27、矛盾時，加酸堿調(diào)pH 選擇合適的pH調(diào)節(jié)劑發(fā)酵的不同階段采取不同的pH值46. 泡沫對發(fā)酵有哪些有益之處，哪些有害之處？有利之處：氣體分散、增加氣液接觸面積有害之處：降低生產(chǎn)能力；引起原料浪費；影響菌的呼吸；引起染菌47. 發(fā)酵中泡沫形成的原因是什么？通氣攪拌；培養(yǎng)基配比與原料組成；菌種、種子質(zhì)量和接種量；滅菌質(zhì)量48. 羅氏假說對泡沫穩(wěn)定的條件作了如何假釋？在溶液中，溶解狀態(tài)的溶質(zhì)是穩(wěn)泡劑；不溶狀態(tài)的溶質(zhì)，當浸入系數(shù)與鋪展系數(shù)均為正值時即是消泡劑。49. 植物油的消泡機理是什么？當其溶入泡沫液,會顯著降低該處的表面張力。 因為這些物質(zhì)一般對水的溶解度較小,表面張力的降低僅限于泡沫的局部,而泡

28、沫周圍的表面張力幾乎沒有變化。表面張力降低的部分被強烈地向四周牽引、延伸,最后破裂。50. 對消泡劑有哪些要求？（1）在起泡液中不溶或難溶（2）表面張力低于起泡液（3）與起泡液有一定程度的親和性 （4）與起泡液不發(fā)生化學反應(yīng)（5）揮發(fā)性小，作用時間長51 染菌對發(fā)酵有什么危害，對提煉有什么危害？染菌對發(fā)酵的危害： eq oac(,1)干擾生產(chǎn)菌的正常代謝，降低產(chǎn)量 eq oac(,2)改變pH，降解某些產(chǎn)物 eq oac(,3)污染不同的微生物，不同 eq oac(,4)階段染菌危害 eq oac(,5)染菌對提煉的危害： eq oac(,6)過濾困難而大幅度降低過濾收率 eq oac(,7)

29、有機溶劑萃取時發(fā)生乳化52 有哪些原因會引起染菌？1設(shè)備滲漏2空氣帶菌3種子帶菌4滅菌不徹底5技術(shù)管理不善53 染菌以后應(yīng)采取什么措施？ 1發(fā)酵液必須滅菌后才可放下水道2尋找染菌的原因3染菌厲害時，車間環(huán)境要用石灰消毒為什么會感染噬菌體？感染了噬菌體后應(yīng)采取哪些措施？產(chǎn)生噬菌體的原因1活菌體隨意排放，造成噬菌體的感染源2建立工廠環(huán)境清潔衛(wèi)生制度3感染噬菌體的培養(yǎng)物不得帶入菌種室、搖瓶間4發(fā)現(xiàn)噬菌體停攪拌、小通風，將發(fā)酵液加熱到70800C殺死噬菌體，才可排放。5環(huán)境用漂白粉消毒6選育抗噬菌體的菌種56. 空氣除菌方法有哪些？ 1高溫除菌2 輻射除菌3 靜電除菌4介質(zhì)過濾除菌57. 介質(zhì)過濾的機

30、理是什么？ 以棉花，玻璃纖維，尼龍等，纖維類或活性炭作為介質(zhì)填充呈一定厚度的過濾層，或者將玻璃纖維，聚乙烯醇，聚四氟乙烯，金屬燒結(jié)材料制成過濾層，其介質(zhì)間的空隙大于被濾出的微生物或塵埃，空氣流過這種介質(zhì)過濾層是，借助慣性碰撞，阻截，靜電吸附，擴散特作用，將其微生物或塵埃截留在介質(zhì)層內(nèi)，達到過濾的目的。58. 影響介質(zhì)過濾效率的因素有哪些？ 1，介質(zhì)填充厚度與過濾之間的關(guān)系2，介質(zhì)填充密度與過濾之間的關(guān)系3，空氣流速與過濾效率之間的關(guān)系35. 為何氧容易成為好氧發(fā)酵的限制性因素？氧是需氧微生物生長所必需的。氧往往容易成為控制因素，是因為氧在水中的溶解度很低，培養(yǎng)基因含有大量的有機和無機物質(zhì)，氧的

31、溶解度比水中還要更低。在對數(shù)生長期即使發(fā)酵液中的氧濃度達到飽和，若此時終止供氧，發(fā)酵液中的溶氧可在幾分鐘內(nèi)全部耗盡，使溶氧成為控制因素。36. 比耗氧速度和呼吸強度的概念？比耗氧速度或呼吸強度（QO2）：單位時間內(nèi)單位重量的細胞所消耗的氧氣，mmol O2g菌-1h-119什么是代謝控制發(fā)酵？代謝控制發(fā)酵的研究內(nèi)容是什么？人為地改變微生物的代謝調(diào)控機制，是有用的中間代謝產(chǎn)物過量積累，這種發(fā)酵稱代謝控制發(fā)酵。研究內(nèi)容：研究微生物的生理代謝規(guī)律，即生物合成各種代謝產(chǎn)物的途徑和代謝調(diào)節(jié)機制，環(huán)境因素對代謝方向的影響以及改變微生物代謝方向的措施。21什么是巴斯德效應(yīng)？巴斯德效應(yīng)的機制是什么？在好氣條件

32、下，酵母菌發(fā)酵能力下降（細胞內(nèi)糖代謝降低，乙醇積累減少）；不僅存在于酵母中，也存在于具有呼吸和發(fā)酵能力的其他細胞中。 機制；第一個調(diào)節(jié)點是磷酸果糖激酶，此酶是變構(gòu)酶，受ATP,檸檬酸及其他的高能化合物抑制，被AMP,ATP,激活。1、發(fā)酵工業(yè)對菌種的要求？答：能在廉價原料制成的培養(yǎng)基上生長，且生成目的產(chǎn)物產(chǎn)量高、易于回收；生長較快，發(fā)酵周期短；培養(yǎng)條件易于控制；抗噬菌體及雜菌污染的能力強；菌種不易變異退化，以保證發(fā)酵生產(chǎn)和產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定；對放大設(shè)備的適應(yīng)性強；菌種不是病原菌，不產(chǎn)生任何有害的生物活性物質(zhì)和毒素。2、誘變育種步驟答：出發(fā)菌株的選擇；處理菌懸液的制備；誘變處理；中間培養(yǎng)；分離和篩選

33、。3、調(diào)節(jié)溶氧速率的方法？答： 調(diào)節(jié)通氣量；調(diào)節(jié)氧的分壓：富氧，增加空氣壓力； 調(diào)節(jié)氣液接觸時間：增加液位高度，增設(shè)擋板；調(diào)節(jié)氣液接觸面積：提高攪拌速率，空氣分布管及其直徑； 調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的特性：粘度、表面張力、菌體濃度，離子濃度。4、簡述種子培養(yǎng)基的目的及其特點？答：培養(yǎng)種子的目的：擴大培養(yǎng)，增加細胞數(shù)量；同時也必須培養(yǎng)出強壯、健康、活性高的細胞，為了使細胞迅速進行分裂或菌絲快速生長。種子培養(yǎng)基特點：必須有較完全和豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，特別需要充足的氮源和生長因子；種子培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度不必太高。供孢子發(fā)芽生長用的種子培養(yǎng)基，可添加一些易被吸收利用的碳源和氮源；種子培養(yǎng)基成分還應(yīng)考慮與發(fā)酵培

34、養(yǎng)基的主要成分相近。5、培養(yǎng)基中微量元素的主要作用是什么？答：微量元素(無機鹽類)是微生物生命活動所不可缺少的物質(zhì)。主要作用是：構(gòu)成菌體成分；作為酶活性基的組成部分或維持酶的活性；調(diào)節(jié)滲透壓、pH值、氧化還原電位等；作為自養(yǎng)菌的能源。8、引起發(fā)酵液pH上升或者下降的因素有那些？答：（1）引起pH下降的因素： EQ oac(,1)培養(yǎng)基中碳氮比例不當，碳源過多，特別是葡萄糖過量，或者中間補糖過多加之溶解氧不足，致使有機酸大量積累。 EQ oac(,2)消泡油加的過多。 EQ oac(,3)生理酸性物質(zhì)的存在，氨被利用，pH下降。（2）引起pH上升的因素： EQ oac(,1)培養(yǎng)基中碳氮比例不當

35、，氮源過多，氨基氮釋放，使pH上升 EQ oac(,2)生理堿性物質(zhì)的存在。 EQ oac(,3)中間補料中氨水或尿素等堿性物質(zhì)加入過多使pH上升。11、化學消泡的原理？答：化學消泡劑是表面活性劑，消泡劑本身的表面張力相對于發(fā)酵液來說是比較低的，一旦接觸到氣泡的表面，將會使氣泡膜局部的表面張力降低，力的平衡受到破壞，因而使氣泡破裂或合并，最后導致泡沫破裂。當泡沫表面層存在著極性的表面活性物質(zhì)而形成雙電層時，加入帶相反電荷的表面活性劑，可以降低膜的彈性（機械強度），或加入某些具有強極性的物質(zhì)與起泡劑爭奪液膜上的空間，并使液膜的機械強度降低，進而促使泡沫破裂。當泡沫的液膜具有較大的表面黏度時，加入

36、某些分子內(nèi)聚力較弱的物質(zhì)，可降低膜的表面黏度，從而促使液膜的液體流失而使泡沫破裂。26、簡述抗生素的作用機制有哪幾類？答：抑制細胞壁合成的抗生素；影響細胞膜功能的抗生素；抑制核酸合成的抗生素；抑制蛋白質(zhì)合成的抗生素；抑制生物能作用的抗生素。青霉素發(fā)酵中造成異常溶氧可能原因？答：異常溶氧可能原因：（1）染菌：溶氧迅速下降，鏡檢。（2）染噬菌體：溶氧上升，C下降，發(fā)酵液迅速轉(zhuǎn)稀，應(yīng)及早處理，嚴防擴大；（3）代謝異常：可能是有機酸大量積累，溶氧不足引起泡沫：27、青霉素和頭孢菌素合成的代謝調(diào)控？答：碳源分解代謝物阻遏；賴氨酸的反饋調(diào)節(jié)；L甲硫氨酸（調(diào)節(jié)物）對頭孢菌素C形成的促進作用；在頭孢菌素C的合

37、成過程中，擴環(huán)和羥化是其中的關(guān)鍵反應(yīng)和限速階段 。纈氨酸是青霉素生物合成的前體物。28、青霉素發(fā)酵中造成異常溶氧可能原因？答：染菌：溶氧迅速下降，鏡檢。染噬菌體：溶氧上升，C下降，發(fā)酵液迅速轉(zhuǎn)稀，應(yīng)及早處理，嚴防擴大；代謝異常：可能是有機酸大量積累，溶氧不足引起泡沫：29、青霉素提煉工藝中采用了哪些單元操作，為什么？答： 預處理：發(fā)酵液加少量絮凝劑沉淀蛋白。原因：濃度較低，含有大量雜質(zhì)。目的在于濃縮目的產(chǎn)物，去除大部分雜質(zhì)，改變發(fā)酵液的流變學特征，利于后續(xù)的分離純化過程。過濾:去除蛋白、菌體及其它雜質(zhì)萃?。赫噍腿。簭臑V液萃取到乙酸丁酯；反相萃取：從乙酸丁酯反萃取到水相中。反復萃取23次，達到

38、結(jié)晶要求。脫色：萃取液中添加活性炭，除去色素、熱源，過濾，除去活性炭。在提取液中加活性炭150-300g/10億單位。結(jié)晶：萃取液用0.5 M NaOH萃取得pH6.4-6.8鈉鹽水濃縮液。加2.5倍體積丁醇，1626，0.67-1.3KPa下真空蒸餾。水和丁醇形成共沸物而蒸出。蒸出餾分中含水達2-4%時，停止蒸餾。鈉鹽結(jié)晶析出。結(jié)晶經(jīng)過洗滌（丁醇4-6L/10億）、干燥后，得到青霉素產(chǎn)品。 青霉素游離酸在有機溶劑中的溶解度很大，當它與某些金屬離子或有機胺結(jié)合后，由于極性增大，溶解度大大降低而自有機溶劑中析出。30、菌種篩選的方法？答：透明圈法：在平板培養(yǎng)基中加入溶解性較差的底物，使培養(yǎng)基混濁

39、。能分解底物的微生物便會在菌落周圍產(chǎn)生透明圈，圈的大小初步反應(yīng)該菌株利用底物的能力。變色圈法：對于一些不易產(chǎn)生透明圈產(chǎn)物的產(chǎn)生菌，可在底物平板中加入指示劑或顯色劑，使所需微生物能被快速鑒別出來。生長圈法：生長圈法通常用于分離篩選氨基酸、核苷酸和維生素的產(chǎn)生菌。抑菌圈法：常用于抗生素產(chǎn)生菌的分離篩選。抑菌圈法是常用的初篩方法，工具菌采用抗生素的敏感菌。21、簡述賴氨酸的代謝控制發(fā)酵的方法？答：優(yōu)先合成的轉(zhuǎn)換滲漏缺陷型的選育；切斷支路代謝營養(yǎng)缺陷型的選育；選育結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株；解除代謝互鎖；增加前體物的合成和阻塞副產(chǎn)物生成；6、用工藝流程圖表述發(fā)酵生產(chǎn)中制備無菌空氣的過程？答：空氣高空取氣管除

40、塵器空氣壓縮機貯氣罐一級冷卻器油水分離器二級分離器除霧器加熱器總過濾器分過濾器無菌空氣1、微生物誘變育種的基本步驟有哪些？并列舉1-2種常用的誘變劑及其作用機制出發(fā)菌株的選擇 斜面活化 單孢子懸液制備 誘變處理 平板涂布 初篩 復篩 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件篩選 中試 大試 菌種保藏。常用誘變劑：如 紫外線：機理為：使染色體上相鄰的胸腺嘧啶形成二聚體，從而導致發(fā)生錯譯，而使微生物發(fā)生變異。亞硝酸：機理為脫去堿基上的氨基。2、簡述工業(yè)微生物菌種保藏的原理和意義。原理：根據(jù)菌種的生理生化特點，人為地創(chuàng)造條件，使孢子或菌體的生長代謝活動盡量降低，以減少其變異。意義：菌種保藏是進行微生物學研究和微生物育種工作

41、的重要組成部分，為微生物產(chǎn)品的生產(chǎn)、科研提供菌種，并便于菌種交換，保證菌種不死亡、不污染、不變異。3、在分離篩選規(guī)模化生產(chǎn)的工業(yè)微生物菌種時，需考慮哪些重要的指標？（1）菌種能利用廉價的營養(yǎng)物質(zhì)，并來源豐富；（2）菌種的生長溫度應(yīng)高于40，可以降低生產(chǎn)成本；（3）菌對所采用的設(shè)備和生產(chǎn)過程的適應(yīng)性；（4）菌的穩(wěn)定性；（5）菌的產(chǎn)物得率和產(chǎn)物在培養(yǎng)液中的濃度；（6）容易從培養(yǎng)液中回收產(chǎn)物。4、利用原生質(zhì)體融合技術(shù)可以大大提高重組頻率，擴大重組幅度，因而已廣泛應(yīng)用于工業(yè)新菌株的培育。請簡述原生質(zhì)體融合技術(shù)的主要優(yōu)點。（1）去除了原生質(zhì)體的障礙，親株基因組直接融合、交換，實現(xiàn)重組；（2）原生質(zhì)體融合

42、后兩親株的基因組之間有機會發(fā)生多次交換，產(chǎn)生各種各樣的基因組合而得到多種類型的重組子；（3）重組頻率高；（4）可以和其他育種方法相結(jié)合；（5）可以用溫度、紫外線等處理、鈍化親株的一方或雙方，然后使之融合，再在再生菌落中篩選重組子。5、簡述DNA重組技術(shù)的基本操作過程。（1）含目的基因DNA片斷的獲得；（2）載體的選擇；（3）含目的基因DNA片斷與載體的連接；（4）將重組分子送入受體細胞，并于其中復制、擴增；（5）篩選出帶有重組DNA分子的轉(zhuǎn)化細胞；（6）鑒定外源基因的表達產(chǎn)物。6、試簡單說明防止或降低基因工程菌表達不穩(wěn)定性的主要措施。（1）組建合適載體；（2）選擇適當宿主；（3）施加選擇壓力；

43、（4）控制基因過量表達；（5）控制培養(yǎng)條件。7、土壤是微生物生活的大本營，生活著各種各樣的微生物。目前工業(yè)上所利用的微生物大多是從土壤中分離獲得的。請你設(shè)計一種從土壤中分離固氮菌的分離方法。（1）培養(yǎng)基的選擇：配制完全無氮的培養(yǎng)基作為分離固氮菌的選擇性培養(yǎng)基。（2）取樣：選擇比較肥沃的菜園土作為分離固氮菌的土樣。（3）土壤懸浮液的制備：稱取10克土樣置于100mL帶有玻璃珠的無菌水中，充分搖勻。（4）稀釋：按照10倍稀釋法將土壤懸浮液稀釋到一定的稀釋度。（5）涂布：分別取最后三個不同的稀釋度的稀釋液于完全無氮的選擇性培養(yǎng)基平板中央，用滅菌的涂布器涂布均勻，置于37恒溫箱中培養(yǎng)至長出單菌落。（6

44、）分離純化：挑取單菌落于完全無氮選擇性培養(yǎng)基平板用劃線的方法劃線純化，直到菌體形態(tài)完全一致為止，接種于斜面保藏。8、利用微生物生產(chǎn)抗生素、氨基酸、釀造等都離不開菌種，因而菌種保藏是微生物研究和育種工作的重要組成部分。要讓菌種不致死亡，同時還要盡可能將其優(yōu)良特性保持下來。試說明菌種保藏的原理，根據(jù)不同的生產(chǎn)、實驗條件，闡述12種常用的菌種保藏方法。原理：根據(jù)菌種的生理生化特點，人為地創(chuàng)造條件，使孢子或菌體的生長代謝活動盡量降低，以減少其變異。1.斜面低溫保藏法將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長后，棉塞部分用油紙包扎好，移至28的冰箱中保藏。保藏時間依微生物的種類而有不同，霉菌、放線

45、菌及有芽孢的細菌保存24個月，移種一次。酵母菌兩個月，細菌最好每月移種一次。此法為實驗室和工廠菌種室常用的保藏法，優(yōu)點是操作簡單，使用方便，不需特殊設(shè)備，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點是容易變異，因為培養(yǎng)基的物理、化學特性不是嚴格恒定的，屢次傳代會使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀；污染雜菌的機會亦較多。2沙土保藏法 （1）取河沙加入10稀鹽酸，加熱煮沸30分鐘，以去除其中的有機質(zhì)。 （2）倒去酸水，用自來水沖洗至中性。 （3）烘干，用40目篩子過篩，以去掉粗顆粒，備用。 （4）另取非耕作層的不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土，加自來水浸泡洗滌數(shù)次，直至中性。 （5）烘干，碾

46、碎，通過100目篩子過篩，以去除粗顆粒。 （6）按一份黃土、三份沙的比例（或根據(jù)需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）摻合均勻，裝入10100mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g左右，塞上棉塞，進行滅菌，烘干。 （7）抽樣進行無菌檢查，每10支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培養(yǎng)基中，37培養(yǎng)48小時，若仍有雜菌，則需全部重新滅菌，再作無菌試驗，直至證明無菌，方可備用。 （8）選擇培養(yǎng)成熟的（一般指孢子層生長豐滿的，營養(yǎng)細胞用此法效果不好）優(yōu)良菌種，以無菌水洗下，制成孢子懸液。 （9）于每支沙土管中加入約05ml（一般以剛剛使沙土潤濕為宜）孢子懸液，以接種針拌勻。 （10）放入真空干燥器內(nèi)，用

47、真空泵抽干水分，抽干時間越短越好，務(wù)使在12小時內(nèi)抽干。 （11）每10支抽取一支，用接種環(huán)取出少數(shù)沙粒，接種于斜面培養(yǎng)基上，進行培養(yǎng)，觀察生長情況和有無雜菌生長，如出現(xiàn)雜菌或菌落數(shù)很少或根本不長，則說明制作的沙土管有問題，尚須進一步抽樣檢查。（12）若經(jīng)檢查沒有問題，用火焰熔封管口，放冰箱或室內(nèi)干燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。（13）需要使用菌種，復活培養(yǎng)時，取沙土少許移入液體培養(yǎng)基內(nèi)，置溫箱中培養(yǎng)。 此法多用于能產(chǎn)生孢子的微生物如霉菌、放線菌，因此在抗生素工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用最廣，效果亦好，可保存2年左右，但應(yīng)用于營養(yǎng)細胞效果不佳。菌種保藏的方法有那些？答：冷凍保藏（液氮-196或低溫

48、冰箱-70） 干燥保藏（沙土管保藏，冷凍真空保藏） 低溫保藏（4短時間） 傳代保藏 懸液保藏發(fā) 對于重要的菌種，應(yīng)該選用不同的保藏方法保藏，以避免菌種丟失，其主要保藏原理降低微生物的代謝水平或使其處于休克狀態(tài)，所以低溫，少水環(huán)境均可或者兩者兼用.3、什么是選擇性培養(yǎng)基？它在工業(yè)生產(chǎn)中有何重要性？試舉一例說明。（1）選擇性培養(yǎng)基：指適合于某種微生物或某類微生物生長，但不適合于其他微生物生長的培養(yǎng)基。（2）重要性：利用選擇性培養(yǎng)基可以分離采用常規(guī)方法分離不到的工業(yè)微生物菌種。（1）培養(yǎng)基的選擇：配制完全無氮的培養(yǎng)基作為分離固氮菌的選擇性培養(yǎng)基。（2）取樣：選擇比較肥沃的菜園土作為分離固氮菌的土樣。

49、（3）土壤懸浮液的制備：稱取10克土樣置于100mL帶有玻璃珠的無菌水中，充分搖勻。（4）稀釋：按照10倍稀釋法將土壤懸浮液稀釋到一定的稀釋度。（5）涂布：分別取最后三個不同的稀釋度的稀釋液于完全無氮的選擇性培養(yǎng)基平板中央，用滅菌的涂布器涂布均勻，置于37恒溫箱中培養(yǎng)至長出單菌落。（6）分離純化：挑取單菌落于完全無氮選擇性培養(yǎng)基平板用劃線的方法劃線純化，直到菌體形態(tài)完全一致為止，接種于斜面保藏。6、簡述作為發(fā)酵種子的主要準則。（1）菌種生活力強，移種至發(fā)酵罐后能迅速生長，延滯期縮短。（2）生理性狀穩(wěn)定。（3）菌體總量濃度能滿足大容量發(fā)酵罐的要求。（4）無雜菌污染。（5）保持穩(wěn)定的生產(chǎn)能力。1、

50、簡述發(fā)酵過程中引起發(fā)酵液pH值上升的因素。（1）培養(yǎng)基中碳氮比例不當，氮源過高，氨基氮釋放，使pH上升。（2）生理堿性物質(zhì)的存在。（3）中間補料中氨水或尿素等堿性物質(zhì)加入過多，使pH上升。2、簡述發(fā)酵過程中引起發(fā)酵液pH值下降的因素。（1）培養(yǎng)基中碳氮比例不當，碳源過多，特別是葡萄糖過量，或者中間補糖過多，加之溶解氧不足，致使有機酸大量積累，使pH下降。（2）消沫油加量過多。（3）生理酸性物質(zhì)的存在，NH3被利用，使pH下降。3、試論溫度對發(fā)酵的影響。（1）從酶的動力學來看，溫度升高，反應(yīng)速率加大，生長代謝加快，生產(chǎn)周期提前，但因酶本身很容易因熱而失去活性，溫度越高，酶的失活也越快，表現(xiàn)為菌體

51、容易衰老，發(fā)酵周期縮短，影響產(chǎn)物的最終產(chǎn)量。（2）溫度除直接影響反應(yīng)速率外，還通過改變發(fā)酵液的物理性質(zhì)間接影響菌的生物合成。（3）溫度影響生物合成方向。如四環(huán)素發(fā)酵中，金色鏈霉菌能同時產(chǎn)生金霉素。溫度小于30，合成金霉素能力較強，溫度大于30，則合成四環(huán)素的能力較強。4、發(fā)酵要求在沒有雜菌污染的情況下進行，因而滅菌是微生物工業(yè)生產(chǎn)的一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。試論述生產(chǎn)過程中被雜菌污染后產(chǎn)生的不良后果和采取哪些措施來防止雜菌污染。不良后果（1）由于雜菌的污染，使生物化學反應(yīng)的基質(zhì)或產(chǎn)物消耗，造成產(chǎn)率下降。（2）由于雜菌所產(chǎn)生的某些代謝產(chǎn)物，或染菌后發(fā)酵液的某些理化性質(zhì)的改變，使產(chǎn)物的提取變得困難。（3）污染

52、的雜菌可能會分解產(chǎn)物而使生產(chǎn)失敗。（4）污染的雜菌大量繁殖，會改變反應(yīng)介質(zhì)的pH值，從而使生物化學反應(yīng)發(fā)生異常變化。（5）發(fā)生噬菌體污染，微生物細胞被裂解而使生產(chǎn)失敗。措施：（1）設(shè)備滅菌并確保無泄露。（2）所用培養(yǎng)基必須滅菌。（3）通入的氣體應(yīng)經(jīng)除菌處理。（4）種子無污染，確保純種。（5）培養(yǎng)過程中加入的物料應(yīng)經(jīng)滅菌處理。3、應(yīng)用植物細胞培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物的優(yōu)點有哪些？（1）動植物細胞培養(yǎng)周期長，生長緩慢，生產(chǎn)率低；而微生物細胞培養(yǎng)生長速度快，周期短，生產(chǎn)率高。（2）動植物細胞培養(yǎng)時營養(yǎng)要求高，而微生物細胞營養(yǎng)要求相對較低。（3）動植物細胞培養(yǎng)液有效成分濃度低，而微生物細胞培養(yǎng)液中有效成分

53、濃度相對較高。（4）動植物細胞大量培養(yǎng)時相對困難，而微生物細胞培養(yǎng)時相對容易。（5）動物細胞對外界因素敏感，而微生物細胞要好得多。4、簡述動、植物細胞培養(yǎng)與微生物培養(yǎng)的區(qū)別（1）次生物質(zhì)的生產(chǎn)可在可控條件下進行，并不受地域和季節(jié)的影響。（2）在無菌條件下生長，可排除雜菌和蟲害的侵襲。（3）可進行特定的生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)而得到均一的有效成分。（4）可以探索新的合成路線和獲得新的有用物質(zhì)。2、以青霉素生產(chǎn)工藝為例，簡要說明抗生素發(fā)酵工藝流程。冷凍管 斜面母瓶 大米孢子 一級種子罐 二級種子罐 發(fā)酵罐 放罐 提取3、單細胞蛋白（Single-Cell-Protein）是通過培養(yǎng)單細胞生物而獲得的菌體蛋白質(zhì)

54、。以流程圖形式，試說明單細胞蛋白生產(chǎn)的一般工藝過程。 培養(yǎng)基、水斜面菌種 種子擴大培養(yǎng) 發(fā)酵培養(yǎng) 培養(yǎng)液 分離 菌體 水解 分離 蛋白質(zhì)抽提洗滌 純化 干燥 干燥 動物飼料 食品判斷題次級代謝產(chǎn)物的大量分泌通常是在細胞迅速生長階段內(nèi)形成。( )次級代謝產(chǎn)物是某些微生物生長所必需的。( )在分離產(chǎn)生透明圈的微生物時，透明圈的大小完全可以作為選擇高產(chǎn)菌的依據(jù)。()適合菌體生長的溫度不一定是產(chǎn)物合成的溫度。( )磷是細胞核酸和蛋白質(zhì)的重要組成成分，為了保證微生物的正常生長和代謝，可以在培養(yǎng)基中加入大量的磷元素。( )通常采用正交實驗來確定培養(yǎng)基的各組分和濃度。( )7、當培養(yǎng)基中碳源含量過多，加上供

55、氧不足或中間補糖過多，則發(fā)酵液的pH值上升。( )8、溫度對發(fā)酵的影響除了直接影響發(fā)酵過程中各種反應(yīng)速率外，還通過改變發(fā)酵液的物理性質(zhì)，間接影響菌的生物合成。( )9、自然選育可以達到純化菌種，防止菌種衰退，提高產(chǎn)量的目的，但最大缺點是效率低，進展慢( )10、分批發(fā)酵在整個發(fā)酵過程中，營養(yǎng)物質(zhì)的濃度不發(fā)生變化。( )11、自然選育可以達到純化菌種，防止菌種衰退，提高產(chǎn)量的目的，但最大缺點是效率低，進展慢。( )12、生物合成最適氧濃度與臨界氧濃度是相同的。( )13、培養(yǎng)基過于豐富，菌體生長旺盛，發(fā)酵液稠度增加，對產(chǎn)物合成有利。( )14、工業(yè)微生物各種菌均不存在最適的pH值范圍。( )15

56、、用海藻酸鹽固定酶或細胞是利用包埋法的原理。( )16、動物細胞培養(yǎng)中以葡萄糖和谷氨酰胺為主要碳源和能源，代謝的主要副產(chǎn)物是乳酸和氨。( )17、在生物反應(yīng)器中，如有足夠的生物催化劑，就一定能達到很高的生產(chǎn)速率。( )18、分批發(fā)酵在整個發(fā)酵過程中，營養(yǎng)物質(zhì)的濃度不發(fā)生變化。( )19、將配制好的培養(yǎng)基在向發(fā)酵罐輸送的同時加熱、保溫和冷卻，進行滅菌的過程，稱為連續(xù)滅菌。( )20、氮芥是一種極易揮發(fā)的油狀物，其誘變作用機制是引起細胞染色體畸變。( )21、將配制好的培養(yǎng)基放在發(fā)酵罐或其它裝置中，通入蒸汽將培養(yǎng)基和所用設(shè)備一起進行滅菌的操作過程，稱為培養(yǎng)基的分批滅菌。( )22、在培養(yǎng)過程中，為

57、了解除培養(yǎng)液里積累的細胞代謝產(chǎn)物對細胞生長的抑制作用而影響產(chǎn)物的生產(chǎn)，可以采用透析的培養(yǎng)方法來提高產(chǎn)物的生產(chǎn)率。( )23、亞硝酸是一種常用的有效誘變劑，其誘變作用主要是脫去堿基中的氨基。( )24、將酶包裹于凝膠格子或聚合物半透膜膠囊中的方法稱為包埋法。( )25、在培養(yǎng)過程中，為了解除培養(yǎng)液里積累的細胞代謝產(chǎn)物對細胞生長的抑制作用而影響產(chǎn)物的生產(chǎn)，可以采用透析的培養(yǎng)方法來提高產(chǎn)物的生產(chǎn)率。( )26、在生物反應(yīng)器中，如有足夠的生物催化劑，就一定能達到很高的生產(chǎn)速率。( )27、紫外線的誘變作用機制主要是引發(fā)形成高反應(yīng)性的離子。( )附錄資料：不需要的可以自行刪除煤礦礦井機電設(shè)備完好標準一、

58、通用部分1、 緊固件1.1 緊固用的螺栓、螺母、墊圈等齊全、緊固、無銹蝕。1.2 同一部位的螺母、螺栓規(guī)格一致。平墊、彈簧墊圈的規(guī)格應(yīng)與螺栓直徑相符合。緊固的螺栓、螺母應(yīng)有防松裝置。1.3 用螺栓緊固不透明螺孔的部件，緊固后螺孔須留有大于2倍防松墊圈的厚度的螺紋余量。螺栓擰入螺孔長度應(yīng)不小于螺栓直徑，但鑄鐵、銅、鋁件應(yīng)不小于螺栓直徑的1.5倍。1.4 螺母緊固后，螺栓螺紋應(yīng)露出螺母13個螺距，不得在螺母下面加多余墊圈減少螺栓的伸出長度。1.5 緊固在護圈內(nèi)的螺栓或螺母，其上端平面不得超出護圈高度，并需用專用工具才能松、緊。2、 隔爆性能2.1 隔爆結(jié)合面（I類）的間隙、直徑差或最小有效長度（寬

59、度）必須符合表4-1-1的規(guī)定。表中 L 靜止隔爆接合面的最小有效長度；L1 螺栓通孔邊緣至隔爆接合面邊緣的最小有效長度；W 靜止隔爆接合面及操縱桿與桿孔隔爆接合面最大間隙或直徑差；轉(zhuǎn)軸與軸孔隔爆接合面最大直徑差。但快動式門或蓋的隔爆接合面的最小有效長度須不小于25mm。 表4-1-1I類隔爆接合面結(jié)構(gòu)參數(shù)mm接合面型 式LL1W外殼容積V（t）V0.1V0.1平面、止口或圓筒結(jié)構(gòu)6.012.525.040.06.08.09.015.00.300.400.500.400.500.60帶有滾動軸承的圓筒結(jié)構(gòu)6.012.525.040.00.400.500.600.400.500.600.802.

60、2 操縱桿直徑（d）與隔爆接合面長度（L）應(yīng)符合表4-1-2的規(guī)定。表4-1-2操縱桿直徑或圓筒直徑與隔爆接合面的結(jié)構(gòu)參數(shù)mm操縱桿直徑隔爆接合面長度d66d2525dL6LdL252.3 隔爆電動機軸與軸孔的隔爆接合面在正常工作狀態(tài)下不應(yīng)產(chǎn)生摩擦。用圓筒隔爆接合面時，軸與軸孔配合的最小單邊間隙須不小于0.075mm；用滾動軸承結(jié)構(gòu)時，軸與軸孔的最大單邊間隙須不大于表4-1-1規(guī)定W值的。2.4 隔爆接合面的表面粗糙度不大于；操縱桿的表面粗糙度不大于。2.5 螺紋隔爆結(jié)構(gòu)：螺紋精度不低于3級；螺距不小于0.7mm；螺紋的最少嚙合扣數(shù)、最小擰入深度應(yīng)符合表4-1-3的規(guī)定。表4-1-3螺紋的最少