溫度和pH的交互作用對黃綠青霉菌產(chǎn)毒影響

1、溫度和pH的交互作用對黃綠青霉菌產(chǎn)毒影響【關(guān)鍵詞】黃綠青霉菌；黃綠青霉素：產(chǎn)毒；交互作用摘要：目的在實驗室條件下觀察溫度、ph對黃綠青霉菌pv產(chǎn)毒的影響及其交互作用。方法采用析因?qū)嶒炘O(shè)計，用察氏培養(yǎng)基培養(yǎng)黃綠青霉菌，二氯甲烷提取黃綠青霉素(it)，高效液相色譜法檢測it毒素含量。結(jié)果黃綠青霉菌在高溫、低溫、酸性及堿性條件下均可產(chǎn)毒，產(chǎn)毒量603033610gg培養(yǎng)基；高溫、堿性條件下產(chǎn)毒量較高，是低溫條件的2倍以上。結(jié)論溫度和ph對黃綠青霉菌產(chǎn)毒量有較大影響，且有交互作用。關(guān)鍵詞：黃綠青霉菌；黃綠青霉素：產(chǎn)毒；交互作用interatinfteperatureandphntxinprdutinf

2、peniilliuitreviridinhuhaifeng,qiyngxiu,liqunei.institutefepideilgy,taishanedialllege(taian271000,hina)abstrat：bjetivebservetheeffetfteperature,phandtheirinteratinnpeniilliuitreviridins(p.v.)txinprdutininlabratry.ethdsp.v.asulturedinharlesultureediuindifferentnditinsardingtthefatrialexperientfrtfatrs

3、.itasextratedbydihlrethaneandquantitatedbyhplethd.resultsp.v.prdueditinallharlesultureediu.quantitiesfitprduedbyp.v.ere60.30336.10g/gediu.p.v.prduedreitinarnditininaidharlesultureediu.nlusinquantitiesfitprduedbyp.v.ereaffetedbyteperature,phandtheirinteratin.keyrds：peniilliuitreviridin(pv)；itreviridi

4、n(it)；prdutinftxin;interatin黃綠青霉菌(peniilliuitreviridin，pv)屬單輪青霉群，是污染糧食常見的真菌之一，尤其是在大米、小米霉變過程中經(jīng)?？蓹z出黃綠青霉菌，該菌污染的糧食外觀呈黃綠色。黃綠青霉菌產(chǎn)生的黃綠青霉素(itreviridin，it)是一種具有心臟血管毒性、神經(jīng)毒性、遺傳毒性的真菌毒素1。相關(guān)研究說明，it是導(dǎo)致克山病的可疑病因2，并且溫度、培養(yǎng)時間、酸堿度等黃綠青霉菌產(chǎn)毒條件與克山病病區(qū)環(huán)境條件非常類似3。為進一步討論黃綠青霉菌產(chǎn)毒特征，本文對溫度、ph對該菌產(chǎn)毒的交互作用進展觀察?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。1材料與方法11材料(1)菌株：黃

5、綠青霉菌菌株(中科院微生物研究所)，菌株號為34033。(2)培養(yǎng)基：黃綠青霉菌培養(yǎng)采用察氏培養(yǎng)基，120高壓滅菌20in。待溫度降至60左右時，參加青霉素100ul，混勻。無菌條件下分裝入培養(yǎng)皿，制成平板待用4。(3)標(biāo)準(zhǔn)溶液：it標(biāo)準(zhǔn)品(美國siga公司)分別用流動相配成1，2，5，10，40和100gl的標(biāo)準(zhǔn)溶液，冷藏待檢。(4)儀器與試劑：aters600液相色譜儀；aters2996二極管陣列檢測器，46150,5hypersil硅膠色譜柱(大連依利特公司)。12方法121培養(yǎng)條件控制菌株培養(yǎng)在本所生物培養(yǎng)室進展，溫度分別控制在30和8；通過高壓滅菌前添加nah和hl溶液，分別配制成

6、ph50和90的培養(yǎng)基。采用22析因設(shè)計方法觀察溫度、ph對產(chǎn)毒的獨立作用及交互作用；每種條件下培養(yǎng)5份，培養(yǎng)時間2周。122樣品提炔5，6將培養(yǎng)物攪碎，移入具塞三角燒瓶，參加50l二氯甲烷，塞緊磨沙塞，振蕩10in，避光靜置30in。過濾，取濾液2l，在避光、通風(fēng)條件下?lián)]干，得到粗毒素，定容后上機檢測。123分析條件5，6采用高效液相色譜法檢測標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品中的it含量，流動相為乙酸乙酯：正己烷(73，vv)；流速為1lin；檢測波長為383n；分析時間10in。13統(tǒng)計分析采用aterseper軟件采集檢測數(shù)據(jù)；采用spss120軟件進展統(tǒng)計分析。2結(jié)果21it含量與色譜峰面積關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線

7、以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(gl)為自變量，色譜圖峰面積(vs)為應(yīng)變量，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y=24400 x+3020，相關(guān)系數(shù)(r)為099994，線性關(guān)系較好。22不同溫度及ph條件下黃綠青霉菌產(chǎn)毒量在高溫、低溫、酸性及堿性環(huán)境條件下黃綠青霉菌均可產(chǎn)生it毒素，產(chǎn)毒量分別為：高溫酸性條件下92141600)gg；高溫堿性條件下(234767079)gg；低溫酸性條件下(10170557)gg；低溫堿性條件下(91022670)gg。23析因設(shè)計方差分析結(jié)果(表1)溫度和ph影響黃綠青霉菌產(chǎn)毒，高溫堿性條件下黃綠青霉菌產(chǎn)毒量高于低溫酸性下產(chǎn)毒量(p001)。溫度和ph對黃綠青霉菌產(chǎn)毒的影響存在交互作用

8、(p001)。表1溫度、ph對黃綠青霉菌產(chǎn)毒量影響析因設(shè)計方差分析結(jié)果略3討論本實驗發(fā)現(xiàn)，溫度和ph因素對黃綠青霉菌產(chǎn)毒的影響存在交互作用，黃綠青霉菌在高溫堿性條件下比在酸性溫下更易產(chǎn)毒，此結(jié)果與前期觀察一樣3。結(jié)果說明，黃綠青霉菌在高溫(30)或變溫(830)、弱堿性或中性條件下，只要有充足的營養(yǎng)，約10d左右即可產(chǎn)生大量it毒素。文獻提示，克山病病區(qū)的地理特點是，病區(qū)的緯度與海拔高度呈相反關(guān)聯(lián)特征，即高緯度的低海拔和低緯度的高海拔，這種海拔高度與緯度之間的配置關(guān)系表現(xiàn)為，病區(qū)內(nèi)濕度較大；谷物收獲期恰逢多雨天氣；并且病區(qū)屬大陸性氣候，晝夜溫差較大，在020之間波動7?？松讲〔^(qū)這種環(huán)境條件與本實驗觀察到的黃綠青霉菌產(chǎn)毒特性非常相似，提示在這種氣溫變化較大，環(huán)境酸堿度不穩(wěn)定的自然條件下，黃