蟾皮和蟾蛻脂蟾毒配基含量測定與比較

1、蟾皮和蟾蛻脂蟾毒配基含量測定與比擬【摘要】目的檢測蟾皮及新發(fā)現(xiàn)的藥用部位蟾蛻脂蟾毒配基含量并進(jìn)展比擬。方法HPL檢測蟾皮、蟾蛻中的脂蟾毒配基含量。結(jié)果蟾皮、蟾蛻中的脂蟾毒配基含量分別為0.0117，0.0313g/g。結(jié)論實(shí)驗(yàn)提示蟾蛻、蟾皮中均只有極微量的蟾毒配基殘留?！娟P(guān)鍵詞】脂蟾毒配基;蟾皮;蟾蛻蟾蜍是一種中醫(yī)臨床常用的藥物原動物來源，其藥用記載首見于我國第一部藥物學(xué)專著?神農(nóng)本草經(jīng)?1。當(dāng)代本草學(xué)巨著?中華本草?記載：蟾蜍“味辛、性涼，有毒。歸心、肝、脾、肺經(jīng)，能“解毒散結(jié)，消積利水，殺蟲消疳。主治癰疽，疔瘡，發(fā)背，瘰癘，惡瘡，癥瘕癖積，膨脹，水腫，小兒疳積，破傷風(fēng)，慢性咳喘。蟾蜍全身均

2、可入藥，載入?中華本草?的有蟾蜍、蟾皮、蟾酥、蟾頭、蟾舌、蟾蜍肝、蟾蜍膽2。其中目前臨床應(yīng)用廣泛的藥材商品是蟾酥和蟾皮。蟾酥是擠取蟾蜍耳后腺及皮膚腺中的漿液經(jīng)加工枯燥后得到的白色分泌物，蟾皮又稱干蟾皮，是把蟾蜍采取蟾酥后除去內(nèi)臟曬干或烘干而成。而近年來，在江蘇海門地區(qū)又有人首先發(fā)現(xiàn)蟾蜍在其生長發(fā)育過程中可定期蛻下完好的角質(zhì)衣膜的現(xiàn)象，與蛇蛻皮有一定的相似之處，因之將其蛻下的衣膜稱為蟾蛻或蟾衣。但蟾蜍蛻皮后往往即刻將其吞吃，一般不留痕跡，除非被人及時(shí)發(fā)現(xiàn)并將其截留。經(jīng)觀察和考證，該現(xiàn)象從未被古今本草文獻(xiàn)收載，因此將蟾蛻確認(rèn)為是蟾蜍的一個新的藥用部位3，并已有人將其用于保健和一些疾病的治療4，5。

3、蟾蛻的藥用不需要?dú)⑺荔蛤?，可以有效地保護(hù)這一有益資源，因此逐漸被人們重視。蟾毒配基是一大類主要來自蟾蜍耳后腺和皮膚毒腺的甾族類分泌物的統(tǒng)稱，具有很強(qiáng)的毒性，同時(shí)也是重要的藥效活性物質(zhì)2。由于蟾皮、蟾蛻在藥材來源上具有同源性，均可能含有蟾毒配基成分。因此，我們對蟾毒配基中代表成分脂蟾毒配基含量進(jìn)展了檢測和比擬，以期能為臨床更平安有效地使用這些藥材提供參考資料。1材料1.1藥材蟾蛻、蟾皮由江蘇海門康平蟾衣研究所提供，其原動物經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)教研室周秀佳教授鑒定，確認(rèn)為是中華大蟾蜍Bufbufgargarizansantr，研缽中充分研磨后，過120目篩，置電熱恒溫烘箱4524h烘干后，制成供

4、試樣品。1.2試劑脂蟾毒配基標(biāo)準(zhǔn)品(上海市藥品檢驗(yàn)所)，甲醇(色譜純)，無水乙醇(分析純)，磷酸二氫鉀(分析純)，超純水。1.3器材HP1100高效液相色譜儀(安捷倫公司)，色譜柱：-BNDAPAK18，(3003.9，10)。2方法與結(jié)果2.1色譜條件流動相為甲醇-0.05l/L磷酸二氫鉀(7030)，磷酸調(diào)pH3.2，流速為1.0l/in，檢測波長為296n，柱溫為25，理論塔板數(shù)以脂蟾毒配基基峰計(jì)不低于2000，進(jìn)樣量20l。見圖1。2.2對照品溶液制備精細(xì)稱量脂蟾毒配基標(biāo)準(zhǔn)品1.62g，用無水乙醇溶解并定容至50l。A-脂蟾毒配基對照品B-蟾蛻-蟾皮圖1蟾蛻、蟾皮HPL圖譜2.3線性范

5、圍確定精細(xì)汲取脂蟾毒配基標(biāo)準(zhǔn)液注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，以進(jìn)樣量(g)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程，確定線性范圍。得到回歸方程為：=348667.0A-6186.9，r=0.9996，進(jìn)樣量在0.0320.648g線性關(guān)系良好。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.4供試液準(zhǔn)備充分枯燥后蟾蛻2.0g，蟾皮樣品2.0g，精細(xì)稱定，加無水乙醇40l，回流1h，提取液回收無水乙醇并濃縮至干，殘?jiān)訜o水乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10l量瓶內(nèi)，加無水乙醇至刻度。搖勻，用0.45微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。2.5精細(xì)度實(shí)驗(yàn)對上述蟾蛻供試品溶液按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，測得脂蟾毒配基峰面

6、積，測得精細(xì)度RSD=0.80%(n=5)。2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)對蟾蛻供試品溶液按上述色譜條件每隔1.0h進(jìn)樣，連續(xù)5次，測得RSD=1.26%(n=5)。2.7重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取同一批號蟾蛻對蟾蛻供試品溶液按上述色譜條件每隔1.0h進(jìn)樣，連續(xù)5次，測得RSD=1.26%(n=5)。干粉5份，分別按方法步驟“2.4處理后，按上述色譜條件進(jìn)展含量測定，測得RSD=1.63%(n=5)。2.8回收率實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確參加脂蟾毒配基標(biāo)準(zhǔn)品到精細(xì)稱取的蟾蛻干粉中，分別按方法步驟“2.4處理后，測定回收率。結(jié)果見表13。表180%加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表2100%加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表3120%加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.9樣品含量測

7、定分別測定蟾蛻、蟾皮提取液中的脂蟾毒配基含量，換算得到每克樣品中脂蟾毒配基的含量。結(jié)果見表4。表4蟾皮、蟾蛻樣品中脂蟾毒配基含量3討論脂蟾毒配基，是從中藥蟾酥中提取的一個成分，屬于蟾毒配基類。蟾毒配基是一大類主要出自蟾蜍耳后腺及皮膚腺分泌物中的乙型強(qiáng)心甾族類化合物的統(tǒng)稱。它們的構(gòu)造特點(diǎn)是都具有一個甾體的母核，然后在17上再接一個-吡喃酮基，所以又名蟾蜍甾二烯類，易溶于極性小的有機(jī)溶劑。已有的研究說明，蟾毒配基類具有廣泛的生理藥理活性，如，強(qiáng)心、增強(qiáng)心肌收縮、抗凝血、抑制血小板、影響心肌電生理、收縮血管、升血壓、抗休克、抗腫瘤、部分麻醉等。由于蟾毒配基藥性強(qiáng)烈，使用中一旦過量即可表現(xiàn)為中毒，因此

8、蟾酥毒性較大，國家對其的使用和攝入量有嚴(yán)格的限定6。歷來國家和各地方藥品管理機(jī)構(gòu)都把蟾毒配基中的主要成分作為蟾酥或者是含有蟾酥的中藥的重要監(jiān)控指標(biāo)7。蟾皮是把蟾蜍擠去蟾酥后再除去內(nèi)臟后曬干或烘干而成的中藥材，全國各地均有銷售。由于蟾皮本身即包含分泌腺的構(gòu)造，而蟾蛻來自蟾蜍表皮，兩者都有可能含有一定的蟾酥成分。因此，兩者尤其是作為新發(fā)現(xiàn)的藥用部位蟾蛻來說，其使用的平安性值得考慮。方法學(xué)研究顯示用本實(shí)驗(yàn)的HPL方法檢測蟾蛻和蟾皮中的脂蟾毒配基含量，其精細(xì)度，重復(fù)性，回收率均符合要求。而測定結(jié)果那么顯示，蟾皮和蟾蛻中脂蟾毒配基含量均甚微，幾乎位于標(biāo)準(zhǔn)曲線的下限。實(shí)際上在本研究的過程中，除極少數(shù)樣品外，大部分樣品甚至達(dá)不到儀器檢測靈敏度而無法檢出。究其原因，對蟾皮而言，可能是由于采集加工前已將蟾酥盡可能擠出另用，因此僅殘留