培養(yǎng)基、耗材管理指導

1、目的與適用范圍對培養(yǎng)基試劑與耗材進行管理。培養(yǎng)基管理包括培養(yǎng)基試劑儲存，使用，保存，適用性檢查。耗材管理包括耗材的驗收，一次性滅菌耗材的無菌檢查等。保證培養(yǎng)基試劑與耗材質(zhì)量符合實驗要求，從而減少發(fā)生問題的概率，提高實驗的準確度。本文件適用于微生物實驗室檢測中所使用培養(yǎng)基與耗材的管理。職責檢驗人員應(yīng)用本文件對培養(yǎng)基與耗材使用前及使用過程中進行質(zhì)量控制，確保符合相關(guān)標準的要求，符合自身實驗室要求。培養(yǎng)基管理培養(yǎng)基試劑的購置和驗收培養(yǎng)基的購置檢測人員按照需求申購對應(yīng)的培養(yǎng)基試劑。試劑管理員在接到批準的采購信息后，從合格,CNAS報告，請一同索取。培養(yǎng)基的驗收購買培養(yǎng)基到貨后，由試劑管理員和微生物檢測

2、人員共同核對生產(chǎn)企業(yè)提供的資料、培養(yǎng),培養(yǎng)基試劑的儲存干粉培養(yǎng)基應(yīng)按照要求保存在陰涼干燥處或2-8冰箱，要避免陽光直射；開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應(yīng)注意防潮并在有效期或6個月內(nèi)用完。應(yīng)每月對儲存中的培養(yǎng)基進行常規(guī)檢查，如容器密閉性復查、首次開封日期、內(nèi)容物的感官檢查有效日期檢查等，如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用，超過有效期的培養(yǎng)基試劑應(yīng)清理，同時填寫于臺賬上。成品培養(yǎng)基儲存應(yīng)按照使用說明進行儲存。開封的脫水培養(yǎng)基，每次使用前應(yīng)對其質(zhì)量進行檢查，通過粉末的流動性、均勻性、結(jié)塊情況和色澤變化等判斷培養(yǎng)基的質(zhì)量變化。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基受潮或物理性狀發(fā)生明顯改變則不應(yīng)再使用。即用性培

3、養(yǎng)基按照產(chǎn)品標識要求進行儲存。培養(yǎng)基配制與滅菌配制培養(yǎng)基試劑制備用水應(yīng)使用實驗室一級水或二級水。制備培養(yǎng)基所用的玻璃器皿（如吸管、試管、燒杯等）新的玻璃器皿（首次使用）和再次使用的玻璃器皿按規(guī)定方法洗滌、干燥。稱量稱量時要用專用的藥匙，避免交叉污染而影響檢驗結(jié)果；干粉培養(yǎng)基易吸潮，如房間環(huán)境濕度較大時，應(yīng)提高稱量速度，完畢后及時蓋緊瓶蓋。溶解溶解時應(yīng)注意以下事項：a配制、盛裝、保存培養(yǎng)基請使用玻璃器皿；b容器大小需大于溶解后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中，c加熱煮沸培養(yǎng)基時一定要進行攪拌，特別是瓊脂類培養(yǎng)基；d為避免燒焦和沸騰溢出，對于少量的培養(yǎng)基最好使用沸水浴進行加熱；e含有瓊

4、脂粉的培養(yǎng)基，在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘；f對于瓊脂類培養(yǎng)基進行再融化時應(yīng)使用先在恒溫水浴鍋中預(yù)熱再用電加熱板進行加熱溶解，最多只能加熱兩次，第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應(yīng)棄去；g燒糊的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)被破壞，并可產(chǎn)生有毒物質(zhì)，如發(fā)現(xiàn)焦化，或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出，該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。滅菌培養(yǎng)基一般采用高壓蒸汽滅菌或煮沸滅菌，含糖或特殊培養(yǎng)基，按照國家標準或生產(chǎn)商提供的說明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須在15分鐘內(nèi)滅菌，避免微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分，改變培養(yǎng)基的酸堿度。為避免高溫破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分，降低瓊脂的凝膠強度，必須嚴格控制滅菌溫度和時間，不可二次高壓蒸汽滅菌。培養(yǎng)基試劑配

5、制完畢請?zhí)顚懪囵B(yǎng)基配制與滅菌記錄。pH測定在初次使用每批培養(yǎng)基時，均需隨同檢測配制一個測試培養(yǎng)基，在滅菌前采用精密或者pH計測試pH值，；,培養(yǎng)基溢出；pH試紙pH,應(yīng)用1mol/LNaOH培養(yǎng)基溢出；pH試紙pH,應(yīng)用1mol/L培養(yǎng)基標識和保存滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度，避免長時間保存在滅菌鍋內(nèi)，造成過度滅菌，影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。當天使用的瓊脂類培養(yǎng)基可在恒溫水浴鍋中保溫。在每個已滅菌的培養(yǎng)基容器外做好標記，填寫培養(yǎng)基保存記錄。培養(yǎng)基保存注意事項：a環(huán)境條件：各種培養(yǎng)基均應(yīng)在潔凈的普通冰箱內(nèi)保存，以2-8左右為宜，不得凍結(jié)。b保存時限：倒好的培養(yǎng)基。選擇性分離鑒別培

6、養(yǎng)基制成平板后當日用完,置保鮮膜（袋）密閉保存期限可延長至一周。從外單位購買的培養(yǎng)基保存時限按照產(chǎn)品標注的時限執(zhí)行。培養(yǎng)基內(nèi)部批號管理培養(yǎng)基的內(nèi)部批號組成，批號為年、月、日，各取2位，年份取后2位，月和日不足2位時，分別在數(shù)字前加0，表明是本日配制的批號，再加上培養(yǎng)基的簡寫（如有寫簡寫，沒有簡寫2018年6月4日BHI）,批號為180604-BHI,180604-SX,SX質(zhì)量檢查購置的同一批次培養(yǎng)基其質(zhì)量檢查應(yīng)能通過無菌檢查（制備好的培養(yǎng)基經(jīng)30-37培養(yǎng)48小時，真菌培養(yǎng)基經(jīng)20-25培養(yǎng)72小時候后，應(yīng)無菌生長）、新購的不同批次的成品化培養(yǎng)基在使用前應(yīng)進行培養(yǎng)基性能測試，經(jīng)檢查合格的該批

7、次培養(yǎng)基方準許使用，否則禁止使用，做好檢查記錄并與供應(yīng)商聯(lián)系退換貨。成品培養(yǎng)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制應(yīng)包括物理指標和微生物指標的測試。培養(yǎng)基適用性檢查新購的不同批次的商品化培養(yǎng)基在使用前應(yīng)進行培養(yǎng)基性能測試，包括物理指標和微生物指標的測試，根據(jù)測試結(jié)果及時填寫培養(yǎng)基測試記錄單、成品培養(yǎng)基測試記錄單，菌株的選擇參考GB4789.28-2013培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求。物理指標控制測試20-25的pH值粉末的質(zhì)量、加水后的顏色和透明度，凝固成平板后的通透性與顏色。微生物污染的控制從每批制備好的培養(yǎng)基中選取至少一個（或1%）平板或試管，置于35-37或按特定標準48h應(yīng)無菌生長，真菌培養(yǎng)基經(jīng)20-25培養(yǎng)72

8、,微生物學指標控制可根據(jù)要求選用半定量方法或定性方法（詳見GB4789.28-2013培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求可根據(jù)要求選用半定量方法或定性方法（詳見中附表E,附表E沒有涉及的培養(yǎng)基，,，對培養(yǎng)基性能進行測試。生長率將適量測試菌株的工作培養(yǎng)物接種至固體、半固體和液體培養(yǎng)基中，每種培養(yǎng)基上菌株的生長率應(yīng)達規(guī)定的最低限值。1）半定量方法半定量方法采用生態(tài)測量技術(shù)在平板上劃線，平板連續(xù)劃線區(qū)域得分的總和即為生長指數(shù)G,G值不應(yīng)超出標準規(guī)定的允許范圍。2）定性方法定性方法采用三區(qū)或四區(qū)等劃線法劃出單菌落進行觀察。選擇性將濃度為104CFU/mLT06CFU/mL,擇性應(yīng)達到規(guī)定值。C.生理生化特性（選擇

9、性和特異性）規(guī)定培養(yǎng)基的基本特性，使用一套適當?shù)臏y試菌株對培養(yǎng)基上的目標菌的生理生化特性（菌落形態(tài)、大小等）和非目標菌的被抑制程度進行測試。D.性能評價和結(jié)果解釋按照規(guī)定得到的所有測試菌株的性能均符合規(guī)定，則該批培養(yǎng)基品質(zhì)優(yōu)良；若只有物理指標和微生物指標符合規(guī)定，則該批培養(yǎng)基可被接收。3.6.4具體操作首先確認需要檢查的培養(yǎng)基類型，購買商業(yè)培養(yǎng)基產(chǎn)品的主要類型有：非選擇性分離和計數(shù)固體培養(yǎng)基，選擇性分離和計數(shù)固體培養(yǎng)基，非選擇性增菌培養(yǎng)基，選擇性增菌培養(yǎng)基，7大類。7大類。3.6.4.2根據(jù)以上7大類，參考GB3.6.4.2根據(jù)以上7大類，參考GB4789.28-2013培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求

10、附表E與附表D.8,對應(yīng)進行填寫培養(yǎng)基測試記錄單或成品培養(yǎng)基測試記錄單，并按照記錄單進行試驗。制備菌懸液。按照記錄單制備管，對比0.5制備菌懸液。按照記錄單制備管，對比0.5麥氏濃度比濁管制備）。非選擇性分離和計數(shù)固體培養(yǎng)基的檢查0.5麥氏濃度的工作菌懸液（挑取工作菌株于生理鹽水：用瓜L,平板上劃線。目標菌的劃線方式參考GB4789.28-2013平板上劃線。目標菌的劃線方式參考GB4789.28-2013培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求里條款6.2.1，然后參照附表E上生長率的要求，記錄數(shù)據(jù)。3.6.4.5選擇性分離和計數(shù)固體培養(yǎng)基的檢查：目標菌的生長率計算參考3.6.4.4。非目標菌的選擇性，操作參

11、考3.6.4.4，非目標菌的劃線方式，參考GB4789.28-2013培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求里條款6.1.2.2。非目標菌的特異性，用接種環(huán)蘸取工作菌懸液在培養(yǎng)基上劃線分離，后參照附表E上特異性的要求，記錄數(shù)據(jù)。：將培養(yǎng)基滅菌后分裝無菌試管10mL，制備目標菌、非目標菌的工作菌懸液，用1|JL然后參照附表E上生長率的要求，記錄數(shù)據(jù)。3.6.4.5選擇性分離和計數(shù)固體培養(yǎng)基的檢查：目標菌的生長率計算參考3.6.4.4。非目標菌的選擇性，操作參考3.6.4.4，非目標菌的劃線方式，參考GB4789.28-2013培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求里條款6.1.2.2。非目標菌的特異性，用接種環(huán)蘸取工作菌懸液在

12、培養(yǎng)基上劃線分離，后參照附表E上特異性的要求，記錄數(shù)據(jù)。：將培養(yǎng)基滅菌后分裝無菌試管10mL，制備目標菌、非目標菌的工作菌懸液，用1|JL接種環(huán)蘸取一環(huán)直接接種至液體培養(yǎng)基中，按適合的培養(yǎng)時間與溫度進行培養(yǎng)。用目測的濁度值0-2)評估培養(yǎng)基。0表示無渾濁，2表示嚴重渾濁。目標菌的濁度值應(yīng)為2,非目標菌的濁度值應(yīng)為1。,發(fā)生這3.6.4.6非選擇性增菌培養(yǎng)基、選擇性增菌培養(yǎng)基和選擇性液體計數(shù)培養(yǎng)基的檢查,3.6.4.7懸浮培養(yǎng)基和運輸培養(yǎng)基的檢查：用1pL3.6.4.7懸浮培養(yǎng)基和運輸培養(yǎng)基的檢查測培養(yǎng)基的試管中,混勻后，立即用10測培養(yǎng)基的試管中,混勻后，立即用10pL接種環(huán)取一環(huán)工作菌培養(yǎng)物

13、劃平行線接種平板，按標準方法中規(guī)定的培養(yǎng)時間和溫度培養(yǎng)；剩余已接種菌液的待測培養(yǎng)基置20C-25C放置剩余已接種菌液的待測培養(yǎng)基置20C-25C放置45min后，再用10pL作菌培養(yǎng)物劃平行線接種平板，按標準方法中規(guī)定的培養(yǎng)時間和溫度培養(yǎng)。接種前后平板上目標菌的生長情況應(yīng)均為良好。記錄數(shù)據(jù)。3.6.4.8鑒定培養(yǎng)基和實驗試劑的檢查：制備3.6.4.8鑒定培養(yǎng)基和實驗試劑的檢查：制備5麥氏濃度的菌懸液，吸取1-2滴接種至培養(yǎng)基內(nèi)，按標準方法中規(guī)定的培養(yǎng)時間和溫度進行培養(yǎng)。需加指示劑的試驗在微生物生長良好的情況下，按順序加入指示劑，再觀察結(jié)果。結(jié)果解釋參照GB況下，按順序加入指示劑，再觀察結(jié)果。結(jié)果解釋參照GB4789.28-2013培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求附錄D表D.8。記錄數(shù)據(jù)。3.6.4.9檢查完畢的培養(yǎng)基，數(shù)據(jù)填寫完畢后歸檔。3.7培養(yǎng)基的保存配制并滅菌后的培養(yǎng)基，如果當天用不上可以進行保存，根據(jù)要求的保存溫度進行保存。并填寫培養(yǎng)基保存記錄。傾倒成平板的培養(yǎng)基用兩個滅菌的密封袋密封好，外層封口袋封口處寫上保存日期，一般有效期為一周至