實驗四細胞的冷凍保存

1、關(guān)于實驗四細胞的冷凍保存第1頁，共11頁，2022年，5月20日，22點13分，星期三一、實驗?zāi)康恼莆占毎麅龃媾c復(fù)蘇的基本原理、方法和要領(lǐng)熟練進行細胞凍存與復(fù)蘇的操作第2頁，共11頁，2022年，5月20日，22點13分，星期三二、實驗原理細胞凍存的主要目的：保存種子細胞。減少細胞被污染的危險性。減少細胞因傳代培養(yǎng)而引起的遺傳變異和形態(tài)改變。避免有限細胞系出現(xiàn)衰老或惡性轉(zhuǎn)化。降低人力和物力。第3頁，共11頁，2022年，5月20日，22點13分，星期三冰晶細胞脫水電解質(zhì)濃度變化pH變化蛋白質(zhì)變性水解酶釋出線粒體功能障礙細胞超微結(jié)構(gòu)改變?nèi)苊阁w膜透性變化核內(nèi)DNA構(gòu)型和生物學(xué)行為的變化細胞損傷冰晶

2、對細胞的損傷第4頁，共11頁，2022年，5月20日，22點13分，星期三冷凍保存原則 冷凍過程要緩慢。凍存細胞必須處在對數(shù)生長期細胞濃度控制在：11075107/ml使用高濃度血清或蛋白保護劑使用合適的細胞冷凍保護劑，以保護細胞在冷凍過程中免受冰晶破壞。第5頁，共11頁，2022年，5月20日，22點13分，星期三細胞冷凍保護劑的選擇 對細胞無毒 易穿透進入細胞，使冰點降低 提高細胞膜對水的通透性常用冷凍保護劑是 DMSO(二甲基亞砜) GL (甘油) EG (乙二醇)第6頁，共11頁，2022年，5月20日，22點13分，星期三標(biāo)準(zhǔn)冷凍程序降溫速率 -1-2/min；當(dāng)溫度達-25以下時，

3、可增至-5-10/min到100時，則可迅速浸入液氮中。第7頁，共11頁，2022年，5月20日，22點13分，星期三簡易冷凍程序細胞凍存管放入泡沫小盒放入-70冰箱3h細胞凍存管放入紗布小袋中液氮表面上停留30min直接投入液氮細胞凍存管放入泡沫小盒放入-20冰箱3h細胞凍存管放入紗布小袋中放入液氮灌的液氮蒸汽中，逐漸下降到液氮表面（3040min）停留30min后，直接投入液氮中細胞凍存管裝入紗布小袋液氮罐口緩慢放入，按-1/min，在3040min內(nèi)到達液氮表面停留30min投入液氮第8頁，共11頁，2022年，5月20日，22點13分，星期三液氮從液體向氣體轉(zhuǎn)化的過程中產(chǎn)生的深低溫-196 第9頁，共11頁，2022年，5月20日，22點13分，星期三本次冷凍程序細胞凍存管用厚棉花包裹，放入塑料盒中或泡沫盒中，直接投入-70 超低溫冰箱中。第10頁，共11頁，2022年，5月