DB34-T 4268-2022發(fā)酵茶中B族和G族黃曲霉毒素的測定

1、ICS67.140CCSX 55ICS67.140CCSX 55安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)DB34/T42682022發(fā)酵茶中B 族和G 族黃曲霉毒素的測定Determination of aflatoxin B and G groups in fermented tea20222022083120220930安徽省市場監(jiān)督管理局發(fā) 布前言本文件按照GB/T 1.12020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。 本文件由安徽省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。 本文件主要起草人：周育、管道健、張海柱、唐蜀昆、張梁、王希春。 發(fā)酵茶中 B 族和 G 族黃曲霉毒素的測定范圍BBG12AFB2、AFG1

2、和AFG2）的測定方法。 以下簡稱AFB1、AFB1AFB2、AFG1和AFG2含量的測定。 本文件第二法為雙柱凈化-液相色譜柱串聯(lián)質(zhì)譜法，適用于發(fā)酵茶中AFB1、AFB2、AFG1和AFG2含量的測定。 （ GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 GB 5009.22 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定 3 術(shù)語和定義3 術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。 4 第一法 雙柱凈化-高效液相色譜柱后光化學(xué)衍生法原理AFB1AFB2AFG1 試劑及材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的一級水。 4.2.1 試 劑4.2.1.1

3、 甲醇（CH3OH，CAS：67-56-1） 4.2.1.2 乙腈（CH3CN，CAS：75-05-8） 4.2.1.3 （NaCl，CAS：7647-14-5） 4.2.1.4 （Na2HPO4，CAS：7558-79-4） 4.2.1.5 （KH2PO4，CAS：7778-77-0） 4.2.1.6 （KCl，CAS：7447-40-7） 4.2.1.7 鹽酸（HCl，CAS：7647-01-0） 4.2.1.8 吐溫-20（C58H114O26，CAS：9005-64-5） 4.2.1.9 （MgSO4，CAS：7487-88-9） 4.2.1.10 （PVP，CAS：9003-39-8

4、） 4.2.1.11 N-（PSA，CAS：111-39-7） 材料1mL5mL 100 mL 1.6 m 。 AFB1 200 ng，AFB180%，AFG280 0.22 m 4.2.3.1 （84+16）：取 840 mL160 mL 4.2.3.2 （70+30）：取 700 mL300 mL 4.2.3.3 （PBS）：稱取 8.00 g 氯化鈉、1.20 g0.20 g 磷0.20 g900 mLpH 至 1000 mL 4.2.3.4 含 1%-20PBS：取 10 mL20，用 PBS1000 mL 標(biāo)準(zhǔn)品 AFB1AFB2AFG1 和AFG2 1 0.01 100 mL10

5、g/mL205009.22 （AFB1AFG1100g/L，AFB2AFG225g /L)移液管準(zhǔn)確移取AFB1和AFG1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液各 1 mL，AFB2和AFG2標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液各 250 L 至 100 mL容量瓶中，乙腈定容。密封后避光 -20 下保存，一個月內(nèi)有效。 儀器和設(shè)備 4.3.3 0.01 g0.00001 4.3.4 4.3.5 6000 。 15 mL-50 mL 1 mm2mm 分析步驟取樣茶湯采樣量需大于 1 L，將所有液體樣品在一個容器中混勻后，取其中任意的 100 mL 樣品，供檢測用。 干茶采樣量需大于 1.0 2 100 g 提取茶湯取 50 mL 試樣（精確至

6、 0.01 mL），然后加入 50 mL 乙腈（精確至 0.01 mL），7.5 g 氯化鈉（精確至 0.01g），渦旋 1 min，6000 g 離心 10 min，取上清液，再加入 50 mL 乙腈重復(fù)提取， 然后合并兩次上清液，并加入 2 g 氯化鈉（精確至 0.01 g），2 g 硫酸鎂（精確至 0.01 g），5 g PVP（精確至0.01 g），2 g PSA（精確至0.01 g），6000 g 離心 10 min，上清液用玻璃纖維濾紙過濾，收取慮液備用。 干茶稱取 5 g（0.01g）于 50 mL25 mL（4.2.3.1）或甲（4.2.3.2）20 min，（6000 下離心

7、 min 凈化移取適量上清液，按多功能凈化柱的操作說明進(jìn)行凈化，收集全部凈化液，并確保凈化液多于 4 mL。 用刻度移液管準(zhǔn)確吸取上步的凈化液 4 mL （茶湯樣品 20 mL 或依據(jù)濃度適當(dāng)調(diào)整），加入 46 mL 含 1% 吐溫 -20 的PBS（使用甲醇-水溶液作為黃曲霉毒素提取溶劑時，加入含 1% 吐溫 -20 的PBS可減半加入），混勻。 將 2 6 條件下保存的免疫親和柱從冷藏條件下取出，恢復(fù)至室溫連接于固相萃取裝置。 和柱下部放置 5 mL 刻度試管，加入 2 mL 甲醇，以每秒1滴的速度洗脫免疫親和柱，再用空氣壓力泵吹干免疫親和柱，收集全部洗脫液至試管中。在 50 條件下，用氮

8、氣緩緩地將洗脫液吹至近干，加入1.0 mL 甲醇-水溶液（45:55，V/V），渦旋 30 秒溶解殘留物，過 0.22 m 有機(jī)濾膜過濾，收集濾液待測。 高效液相色譜參考條件如下： AB A55%；B45%； C18和柱下部放置 5 mL 刻度試管，加入 2 mL 甲醇，以每秒1滴的速度洗脫免疫親和柱，再用空氣壓力泵吹干免疫親和柱，收集全部洗脫液至試管中。在 50 條件下，用氮氣緩緩地將洗脫液吹至近干，加入1.0 mL 甲醇-水溶液（45:55，V/V），渦旋 30 秒溶解殘留物，過 0.22 m 有機(jī)濾膜過濾，收集濾液待測。 高效液相色譜參考條件如下： AB A55%；B45%； C18（2

9、50mm150mm4.6 mm5 m)流速：0.8mL/min； e) 柱溫：40； 10 360nm440nm；A。試樣中目標(biāo)化合物色譜峰的保留時間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的保留時間相比較，變化范圍應(yīng)在 2.5% 之內(nèi)。 在4.4.4AFB1AFB2AFG1和AFG2 0.99。 4.4.7 空白試驗 AFB1AFB2AFG1和AFG2（1）（g/kg 或 g/L） = 1000(0) (1) 1000式中：C 試樣中AFB1、AFB2、AFG1或AFG2的含量，單位為微克每千克或微克每升（g/kg或g/L）； 標(biāo)準(zhǔn)工作液中黃曲霉毒素的濃度，單位為納克每毫升(ng/mL)； A 樣液中黃曲霉毒素的

10、峰面積； A0 V（mL）； m （g或AS 精密度在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值，不得超過算術(shù)平均值的 20%。 檢測限當(dāng)稱取樣品 g（50 mL）AFB1的檢出限為 0.04 g/kg（或g/L），AFB2的檢出限為 0.02 或0.04 的檢出限為 0.02 或 5 第二法 雙柱凈化-液相色譜柱串聯(lián)質(zhì)譜檢測法 原理AFB1AFB2、AFG1、AFG21% 吐溫 -20 試劑同4.2.1。 材料同4.2.2。 同4.2.3。 標(biāo)準(zhǔn)品同4.2.4。 同4.2.5。 5.3.3 0.01 g0.00001 g 5.3.6 6000 g 15 mL50 mL 篩網(wǎng)：1 mm m

11、m分析步驟取樣同4.4.1。分析步驟取樣同4.4.1。 提取同4.4.2。 凈化同4.4.3。 高效液相色譜參考條件如下： AB b) 梯度洗脫：95% A 相（0 min5 min），95%35% A 相（5 min7.5 min），95% A 相（7.5 min10 min）； C18（100mm2.1 mm1.7 m）流速：0.4mL/min； e) 柱溫：25； f) 進(jìn)樣體積：1.0 L。 5.4.5 質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件列出如下： （MRM）； V； 12050 L/h，500L/h650V； 1M313/269； AFB2315/259287；AFG1329/243331/2

12、85245； 1B； C 2.5% 之內(nèi)。 5020%；相對離子豐度 20%50偏差 25%；相對離子豐度 10%20%，允許相對偏差 30%；相對離子豐度 1050%）。 在5.4.4和5.4.5的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀分析條件下，將標(biāo)準(zhǔn)系列溶液由低到高濃度進(jìn)樣檢測，以AFB1AFB2AFG1和AFG2 取5.4.35.5 5.4.15.4.8 分析結(jié)果計算與表述AFB1AFB2AFG1和AFG2（g/kg或g/L） = 1000(0) (2) 1000式中：C 試樣中AFB1、AFB2、AFG1或AFG2的含量，單位為微克每千克或微克每升（g/kg或g/L）； 標(biāo)準(zhǔn)工作液中黃曲霉毒素的濃度，單

13、位為納克每毫升(ng/mL)； A 樣液中黃曲霉毒素的峰面積； A0 V（mL）； m （g或AS 精密度在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的 20%。 檢測限當(dāng)稱取樣品 5g（或 50 mL）AFB1的檢出限為 0.02 g/kg（或g/L），AFB2的檢出限為 0.05 g/kg（或g/L），AFG1的檢出限為 0.1 g/kg（g/L），AFG20.21 g/kg（或g/L） 附 錄 A（資料性）黃曲霉毒素 AFB1，AFB2，AFG1，AFG2 液相色譜圖A1為四種黃曲霉毒素添加回收樣品色譜峰；A2為四種黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰。 圖A.1 黃曲霉毒素 AFB1，AFB2，AFG1，AFG2 液相色譜圖附 錄 B（資料性）黃曲霉毒素 AFB1，AFB2，AFG1，AFG2 總離子流掃描圖B1為