壽胎丸對(duì)SD孕鼠生殖功能及其胚胎發(fā)育的毒性研究_第1頁(yè)
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1、壽胎丸對(duì)SD孕鼠生殖功能及其胚胎發(fā)育的毒性研究【摘要】目的觀察壽胎丸對(duì)SD孕鼠生殖功能及胚胎發(fā)育的毒性。方法將孕鼠隨機(jī)分成5組,即溶劑對(duì)照組、壽胎丸高劑量組簡(jiǎn)稱高劑量組、壽胎丸中劑量組簡(jiǎn)稱中劑量組、壽胎丸低劑量組簡(jiǎn)稱低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組。壽胎丸高、中、低劑量組采用灌胃給藥。觀察孕鼠增重、攝食量、交配率、受孕率等,并觀察吸收胎、畸胎等異常狀況。結(jié)果壽胎丸不同劑量對(duì)孕鼠生殖功能狀態(tài)、胎仔活胎率、吸收胎率和畸胎率的影響,與溶劑對(duì)照組比擬差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)意義。結(jié)論壽胎丸藥液在本研究所確定的50g/kg質(zhì)量濃度以下,初步認(rèn)為對(duì)安康育齡SD孕鼠生殖功能及其胚胎發(fā)育最大無(wú)損害效應(yīng)程度為50g/kg?!娟P(guān)鍵詞】壽

2、胎丸;生殖毒性;平安性壽胎丸乃清代鹽山名醫(yī)張錫純所創(chuàng),出自?醫(yī)學(xué)衷中參西錄?,原為護(hù)胎而設(shè),后經(jīng)多年降臨床醫(yī)家們反復(fù)理論與錘煉,已成為治療胎漏、胎動(dòng)不安、自發(fā)流產(chǎn)、滑胎的首選方。壽胎丸廣泛用于妊娠期,其藥效已得到了充分肯定,但臨床運(yùn)用平安性研究至今未見(jiàn)詳細(xì)報(bào)道。有效評(píng)價(jià)藥物對(duì)女性生殖功能的影響有著深遠(yuǎn)的意義,女性生殖系統(tǒng)是藥物作用的一個(gè)特有的靶器官,女性生殖系統(tǒng)復(fù)雜且所有配子在出生前就已形成,所以其損害可能是多靶點(diǎn)及永久性的,并可導(dǎo)致完全絕育1。有鑒于此,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)其不同劑量壽胎丸對(duì)SD孕鼠體內(nèi)染毒,進(jìn)展生殖毒性測(cè)定,以期獲得其繼藥效學(xué)之后的臨床前毒效學(xué)資料,為其孕期合理和平安應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)根據(jù)

3、。1材料與方法1.1材料1.1.1藥液制備對(duì)所需中藥藥材的來(lái)源及品種進(jìn)展鑒定,挑選優(yōu)質(zhì)正品,原料經(jīng)品種鑒定無(wú)誤后,再進(jìn)展挑選和洗凈,然后炮制、切片、烘干、粉碎。嚴(yán)格按照經(jīng)典處方比例用量裝備,制取工藝如下:取經(jīng)加工炮制的標(biāo)準(zhǔn)中藥飲片菟絲子、續(xù)斷、桑寄生加蒸餾水68倍量,煎煮2次,每次1.5h,合并濾液,濃縮至相對(duì)密度為1.11.25060;參加乙醇使醇含量達(dá)65%,冷藏24h,醇液濾過(guò),濾液回收乙醇,至無(wú)醇味;阿膠烊化;以上兩液合并,濾過(guò);濾液冷藏放置,視無(wú)沉淀析出;添加蒸餾水,調(diào)pH值至6.57.0,并調(diào)整至相當(dāng)于含生藥2g/L;精濾、灌封、滅菌。1.1.2主要試劑與儀器40%甲醛,北京化學(xué)試

4、劑公司消費(fèi);冰乙酸,北京化學(xué)試劑公司消費(fèi);95%乙醇,北京化學(xué)試劑公司消費(fèi);丙三醇,北京化學(xué)試劑公司消費(fèi)。光學(xué)顯微鏡:日本LYPUSSZ-ST型。電子分析天平:美國(guó)AG-104,感量值0.01g。游標(biāo)卡尺:天津儀器廠消費(fèi)。1.1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1.2方法1.2.1實(shí)驗(yàn)分組采用交配后動(dòng)物分組法:將當(dāng)日已交配受精鼠稱重,按體質(zhì)量排序,以每組5只1盒將受精鼠按體質(zhì)量依溶劑對(duì)照組、壽胎丸低劑量組簡(jiǎn)稱低劑量組、壽胎丸中劑量組簡(jiǎn)稱中劑量組、壽胎丸高劑量組簡(jiǎn)稱高劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組環(huán)磷酰胺組,代號(hào)P順序隨機(jī)分配,并盡量使各組受精鼠數(shù)相近。次日交配受精雌鼠再按體質(zhì)量編號(hào)依次隨機(jī)分配到前一日未分配組別或下一輪次組別中

5、。交配完畢前少量受精鼠再按體質(zhì)量編號(hào)依次補(bǔ)充至受精雌鼠數(shù)較少的組別中,使各組受精鼠總數(shù)相近。最終各實(shí)驗(yàn)組分組只數(shù)見(jiàn)表1。1.2.2給藥方法各劑量組大鼠分上下午2次固定時(shí)間灌胃給藥,與人臨床擬用處徑一樣,給藥劑量見(jiàn)各表,高劑量相當(dāng)于人臨床用量的200倍。于妊娠期第6d開(kāi)場(chǎng)給藥,連續(xù)給藥10d。給藥期間依體質(zhì)量變化隨時(shí)調(diào)整給藥體積。溶劑對(duì)照組:同期灌胃蒸餾水,給藥體積設(shè)計(jì)與各劑量組給藥體積相當(dāng),并依體質(zhì)量變化隨時(shí)調(diào)整給藥體積。陽(yáng)性對(duì)照組:采用腹腔注射給藥,給藥期限從妊娠第11d至妊娠第13d,給藥劑量7g/kgd。1.2.3動(dòng)物體征觀察及體質(zhì)量、攝食量測(cè)定給藥期間每3天稱1次體質(zhì)量,并計(jì)數(shù)。給藥日

6、起至處死日每日上下午觀察大鼠各1次,記錄動(dòng)物外觀、行為或異常體征。給藥日起至處死日每3天測(cè)定1次每盒大鼠攝食量。1.2.4動(dòng)物同籠交配、受精檢查雌雄鼠每日16:00以11的比例放交配籠同籠交配,于次日8:00檢查陰栓。發(fā)現(xiàn)陰栓記為交配受精,將已交配雌鼠稱重。發(fā)現(xiàn)陰栓之日定為妊娠第0d,第2d為妊娠第1d,以此類推。交配期2周,記錄每組受精鼠總數(shù)。1.2.5實(shí)驗(yàn)步驟及觀測(cè)指標(biāo)妊娠第20d頸椎脫臼處死孕鼠,處死后即稱重,計(jì)算孕鼠體質(zhì)量及增重,并計(jì)算攝食量。切開(kāi)腹部暴露兩側(cè)子宮及內(nèi)臟器官,并計(jì)數(shù)總著床數(shù)、黃體數(shù)。發(fā)現(xiàn)內(nèi)臟異常做記錄,并做組織病理學(xué)檢查??v向切開(kāi)子宮,別離胎仔,記錄死胎、活胎和早晚吸收

7、胎,計(jì)算孕鼠交配率、受孕率和死亡率。最后子宮做病理學(xué)檢查。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析全部數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析均采用SAS9.13版軟件,由計(jì)算機(jī)完成。各組孕鼠平均體質(zhì)量、攝食量等計(jì)量資料以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差s表示,數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)進(jìn)展顯著性分析?;钐?、死胎、畸胎、早晚吸收胎等計(jì)數(shù)資料以百分率%表示,數(shù)據(jù)采用2檢驗(yàn)進(jìn)展顯著性分析。2結(jié)果2.1壽胎丸對(duì)妊娠期雌鼠攝食量影響采用高中低不同劑量染毒,各劑量組雌鼠在整個(gè)妊娠期過(guò)程中的攝食量均與溶劑對(duì)照組相近,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。陽(yáng)性對(duì)照組妊娠期雌鼠攝食量也與溶劑對(duì)照組相近,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。見(jiàn)表1。表1壽胎丸不同劑量對(duì)妊娠期雌鼠攝食量影響注:GD

8、2-GD5即妊娠期第2至第5d,其余類推。2.2壽胎丸對(duì)孕鼠體質(zhì)量及妊娠期增重影響設(shè)高、中、低壽胎丸不同劑量分別對(duì)SD孕鼠染毒,結(jié)果高、中、低不同劑量組孕鼠妊娠期體質(zhì)量變化均與溶劑對(duì)照組孕鼠根本相當(dāng),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。高劑量染毒組孕鼠妊娠期增重略低于溶劑對(duì)照組,但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。而陽(yáng)性對(duì)照組孕鼠GD20體質(zhì)量變化及妊娠期增重明顯低于溶劑對(duì)照組,差異有高度統(tǒng)計(jì)意義P0.01。分析原因可能與該藥本身造成的母體毒性導(dǎo)致胎仔體質(zhì)量較低有關(guān)。見(jiàn)表2。表2壽胎丸不同劑量對(duì)孕鼠體質(zhì)量及妊娠期增重影響注:與溶劑對(duì)照組比擬*P0.01。妊娠期增重=GD20體重-GD6體重-子宮連

9、胎重。2.3壽胎丸對(duì)妊娠期雌鼠生殖狀態(tài)影響1各實(shí)驗(yàn)組孕鼠受孕率為80.77%87.50%,壽胎丸高、中、低劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組均與溶劑對(duì)照組比擬,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。實(shí)驗(yàn)期內(nèi)各組均未發(fā)現(xiàn)動(dòng)物死亡。各實(shí)驗(yàn)組孕鼠的黃體數(shù)與總著床數(shù)相近,僅有少量著床前胚胎喪失,各劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組均與溶劑對(duì)照組比擬,著床前胚胎喪失率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。各實(shí)驗(yàn)組孕鼠平均著床數(shù)為11.7613.25,各劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組均與溶劑對(duì)照組相比,差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。見(jiàn)表3。表3壽胎丸不同劑量對(duì)妊娠期雌鼠生殖狀態(tài)影響12.4壽胎丸對(duì)妊娠期雌鼠生殖狀態(tài)影響2壽胎丸各劑量組活胎率為97.7498.51,溶劑對(duì)照組

10、活胎率為97.57,各劑量組與溶劑對(duì)照組比擬,其活胎率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。各劑量組孕鼠的死胎率與溶劑對(duì)照組相當(dāng),在0.00.4之間,僅偶見(jiàn)死胎。壽胎丸不同劑量組的吸收胎率,均與溶劑對(duì)照組相當(dāng),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義。在胎鼠畸形方面,其高、中、低不同劑量組胎鼠的畸胎率0.75%1.54%與溶劑對(duì)照組1.24%相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。陽(yáng)性對(duì)照組活胎率87.94%和死胎率0.39%均與溶劑對(duì)照組相近,但畸胎率37.61%和吸收胎率11.67%明顯高于溶劑對(duì)照組,差異有高度統(tǒng)計(jì)意義(P0.01)。見(jiàn)表4。表4壽胎丸不同劑量對(duì)妊娠期孕鼠生殖狀態(tài)影響2注:與溶劑對(duì)照組比擬*P0.013討論合理使用藥

11、物,特別是減少藥物毒性對(duì)妊娠婦女機(jī)體的損害,一直是臨床用藥的宗旨。但是,許多臨床中應(yīng)用于妊娠期、圍生期等中藥或復(fù)方,由于其療效肯定,而其潛在生殖或遺傳毒性并沒(méi)有引起人們足夠重視,也正是由于這種無(wú)視,方藥的潛在毒性可能直接或間接地作用于DNA分子,使DNA的復(fù)制或修復(fù)過(guò)程受阻,從而引起疾病發(fā)生,甚至遺傳給下一代。目前國(guó)內(nèi)外所涉及的藥物生殖毒性研究方法數(shù)以百計(jì),常用的也有十余種2。如致畸敏感期毒性試驗(yàn)、胚胎毒性試驗(yàn)、一般生殖毒性試驗(yàn)、圍產(chǎn)期生殖毒性試驗(yàn)、行為畸胎學(xué)試驗(yàn)等。研究方法雖多,但根本上沒(méi)有根據(jù)中醫(yī)藥自身特點(diǎn)所建立的生殖平安性研究體系?;谥嗅t(yī)的辨證論治規(guī)律,方藥的遣方配伍原那么,壽胎丸廣泛

12、用于妊娠期,而胚胎器官形成期對(duì)藥物作用最為敏感,為此,本研究采用動(dòng)物胚胎致畸敏感期作為藥物作用的時(shí)間靶點(diǎn)進(jìn)展生殖毒性試驗(yàn)。本研究采用壽胎丸3個(gè)不同劑量對(duì)妊娠期雌鼠染毒,各劑量組雌鼠在妊娠期攝食量、體質(zhì)量及增重均與溶劑對(duì)照組相近,說(shuō)明藥物本身沒(méi)有造成明顯的母體毒性而導(dǎo)致胚胎發(fā)育體質(zhì)量偏低。剖宮檢查時(shí),未發(fā)現(xiàn)內(nèi)臟異常,進(jìn)一步說(shuō)明藥物對(duì)母體未見(jiàn)明顯毒性。各實(shí)驗(yàn)組孕鼠受孕率、黃體數(shù)與總著床數(shù)相近,僅有少量著床前胚胎喪失,與溶劑對(duì)照組比擬,均未見(jiàn)明顯差異。各實(shí)驗(yàn)組孕鼠平均著床數(shù)、活胎率,均與溶劑對(duì)照組相當(dāng),未見(jiàn)有明顯差異。不同劑量組胎鼠吸收胎率、畸胎率與溶劑對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義。這提示壽胎丸對(duì)妊娠期孕

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