壽胎丸對(duì)SD孕鼠生殖功能及其胚胎發(fā)育的毒性研究

1、壽胎丸對(duì)SD孕鼠生殖功能及其胚胎發(fā)育的毒性研究【摘要】目的觀察壽胎丸對(duì)SD孕鼠生殖功能及胚胎發(fā)育的毒性。方法將孕鼠隨機(jī)分成5組，即溶劑對(duì)照組、壽胎丸高劑量組簡(jiǎn)稱高劑量組、壽胎丸中劑量組簡(jiǎn)稱中劑量組、壽胎丸低劑量組簡(jiǎn)稱低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組。壽胎丸高、中、低劑量組采用灌胃給藥。觀察孕鼠增重、攝食量、交配率、受孕率等，并觀察吸收胎、畸胎等異常狀況。結(jié)果壽胎丸不同劑量對(duì)孕鼠生殖功能狀態(tài)、胎仔活胎率、吸收胎率和畸胎率的影響，與溶劑對(duì)照組比擬差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)意義。結(jié)論壽胎丸藥液在本研究所確定的50g/kg質(zhì)量濃度以下，初步認(rèn)為對(duì)安康育齡SD孕鼠生殖功能及其胚胎發(fā)育最大無(wú)損害效應(yīng)程度為50g/kg?！娟P(guān)鍵詞】壽

2、胎丸；生殖毒性；平安性壽胎丸乃清代鹽山名醫(yī)張錫純所創(chuàng)，出自?醫(yī)學(xué)衷中參西錄?，原為護(hù)胎而設(shè)，后經(jīng)多年降臨床醫(yī)家們反復(fù)理論與錘煉，已成為治療胎漏、胎動(dòng)不安、自發(fā)流產(chǎn)、滑胎的首選方。壽胎丸廣泛用于妊娠期,其藥效已得到了充分肯定,但臨床運(yùn)用平安性研究至今未見(jiàn)詳細(xì)報(bào)道。有效評(píng)價(jià)藥物對(duì)女性生殖功能的影響有著深遠(yuǎn)的意義，女性生殖系統(tǒng)是藥物作用的一個(gè)特有的靶器官，女性生殖系統(tǒng)復(fù)雜且所有配子在出生前就已形成,所以其損害可能是多靶點(diǎn)及永久性的,并可導(dǎo)致完全絕育1。有鑒于此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)其不同劑量壽胎丸對(duì)SD孕鼠體內(nèi)染毒，進(jìn)展生殖毒性測(cè)定,以期獲得其繼藥效學(xué)之后的臨床前毒效學(xué)資料，為其孕期合理和平安應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)根據(jù)

3、。1材料與方法1.1材料1.1.1藥液制備對(duì)所需中藥藥材的來(lái)源及品種進(jìn)展鑒定，挑選優(yōu)質(zhì)正品，原料經(jīng)品種鑒定無(wú)誤后，再進(jìn)展挑選和洗凈，然后炮制、切片、烘干、粉碎。嚴(yán)格按照經(jīng)典處方比例用量裝備，制取工藝如下：取經(jīng)加工炮制的標(biāo)準(zhǔn)中藥飲片菟絲子、續(xù)斷、桑寄生加蒸餾水68倍量，煎煮2次，每次1.5h，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.11.25060；參加乙醇使醇含量達(dá)65%，冷藏24h，醇液濾過(guò)，濾液回收乙醇，至無(wú)醇味；阿膠烊化；以上兩液合并，濾過(guò)；濾液冷藏放置，視無(wú)沉淀析出；添加蒸餾水，調(diào)pH值至6.57.0,并調(diào)整至相當(dāng)于含生藥2g/L；精濾、灌封、滅菌。1.1.2主要試劑與儀器40%甲醛，北京化學(xué)試

4、劑公司消費(fèi)；冰乙酸，北京化學(xué)試劑公司消費(fèi)；95%乙醇，北京化學(xué)試劑公司消費(fèi)；丙三醇，北京化學(xué)試劑公司消費(fèi)。光學(xué)顯微鏡：日本LYPUSSZ-ST型。電子分析天平：美國(guó)AG-104，感量值0.01g。游標(biāo)卡尺：天津儀器廠消費(fèi)。1.1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1.2方法1.2.1實(shí)驗(yàn)分組采用交配后動(dòng)物分組法：將當(dāng)日已交配受精鼠稱重,按體質(zhì)量排序，以每組5只1盒將受精鼠按體質(zhì)量依溶劑對(duì)照組、壽胎丸低劑量組簡(jiǎn)稱低劑量組、壽胎丸中劑量組簡(jiǎn)稱中劑量組、壽胎丸高劑量組簡(jiǎn)稱高劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組環(huán)磷酰胺組，代號(hào)P順序隨機(jī)分配，并盡量使各組受精鼠數(shù)相近。次日交配受精雌鼠再按體質(zhì)量編號(hào)依次隨機(jī)分配到前一日未分配組別或下一輪次組別中

5、。交配完畢前少量受精鼠再按體質(zhì)量編號(hào)依次補(bǔ)充至受精雌鼠數(shù)較少的組別中，使各組受精鼠總數(shù)相近。最終各實(shí)驗(yàn)組分組只數(shù)見(jiàn)表1。1.2.2給藥方法各劑量組大鼠分上下午2次固定時(shí)間灌胃給藥，與人臨床擬用處徑一樣，給藥劑量見(jiàn)各表,高劑量相當(dāng)于人臨床用量的200倍。于妊娠期第6d開(kāi)場(chǎng)給藥，連續(xù)給藥10d。給藥期間依體質(zhì)量變化隨時(shí)調(diào)整給藥體積。溶劑對(duì)照組：同期灌胃蒸餾水，給藥體積設(shè)計(jì)與各劑量組給藥體積相當(dāng)，并依體質(zhì)量變化隨時(shí)調(diào)整給藥體積。陽(yáng)性對(duì)照組：采用腹腔注射給藥，給藥期限從妊娠第11d至妊娠第13d，給藥劑量7g/kgd。1.2.3動(dòng)物體征觀察及體質(zhì)量、攝食量測(cè)定給藥期間每3天稱1次體質(zhì)量，并計(jì)數(shù)。給藥日

6、起至處死日每日上下午觀察大鼠各1次，記錄動(dòng)物外觀、行為或異常體征。給藥日起至處死日每3天測(cè)定1次每盒大鼠攝食量。1.2.4動(dòng)物同籠交配、受精檢查雌雄鼠每日16：00以11的比例放交配籠同籠交配，于次日8：00檢查陰栓。發(fā)現(xiàn)陰栓記為交配受精，將已交配雌鼠稱重。發(fā)現(xiàn)陰栓之日定為妊娠第0d，第2d為妊娠第1d，以此類推。交配期2周，記錄每組受精鼠總數(shù)。1.2.5實(shí)驗(yàn)步驟及觀測(cè)指標(biāo)妊娠第20d頸椎脫臼處死孕鼠,處死后即稱重,計(jì)算孕鼠體質(zhì)量及增重，并計(jì)算攝食量。切開(kāi)腹部暴露兩側(cè)子宮及內(nèi)臟器官,并計(jì)數(shù)總著床數(shù)、黃體數(shù)。發(fā)現(xiàn)內(nèi)臟異常做記錄,并做組織病理學(xué)檢查。縱向切開(kāi)子宮,別離胎仔,記錄死胎、活胎和早晚吸收

7、胎,計(jì)算孕鼠交配率、受孕率和死亡率。最后子宮做病理學(xué)檢查。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析全部數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析均采用SAS9.13版軟件，由計(jì)算機(jī)完成。各組孕鼠平均體質(zhì)量、攝食量等計(jì)量資料以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差s表示，數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)進(jìn)展顯著性分析?；钐?、死胎、畸胎、早晚吸收胎等計(jì)數(shù)資料以百分率%表示，數(shù)據(jù)采用2檢驗(yàn)進(jìn)展顯著性分析。2結(jié)果2.1壽胎丸對(duì)妊娠期雌鼠攝食量影響采用高中低不同劑量染毒，各劑量組雌鼠在整個(gè)妊娠期過(guò)程中的攝食量均與溶劑對(duì)照組相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。陽(yáng)性對(duì)照組妊娠期雌鼠攝食量也與溶劑對(duì)照組相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。見(jiàn)表1。表1壽胎丸不同劑量對(duì)妊娠期雌鼠攝食量影響注：GD

8、2-GD5即妊娠期第2至第5d,其余類推。2.2壽胎丸對(duì)孕鼠體質(zhì)量及妊娠期增重影響設(shè)高、中、低壽胎丸不同劑量分別對(duì)SD孕鼠染毒，結(jié)果高、中、低不同劑量組孕鼠妊娠期體質(zhì)量變化均與溶劑對(duì)照組孕鼠根本相當(dāng),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。高劑量染毒組孕鼠妊娠期增重略低于溶劑對(duì)照組，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。而陽(yáng)性對(duì)照組孕鼠GD20體質(zhì)量變化及妊娠期增重明顯低于溶劑對(duì)照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)意義P0.01。分析原因可能與該藥本身造成的母體毒性導(dǎo)致胎仔體質(zhì)量較低有關(guān)。見(jiàn)表2。表2壽胎丸不同劑量對(duì)孕鼠體質(zhì)量及妊娠期增重影響注：與溶劑對(duì)照組比擬*P0.01。妊娠期增重=GD20體重-GD6體重-子宮連

9、胎重。2.3壽胎丸對(duì)妊娠期雌鼠生殖狀態(tài)影響1各實(shí)驗(yàn)組孕鼠受孕率為80.77%87.50%，壽胎丸高、中、低劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組均與溶劑對(duì)照組比擬，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。實(shí)驗(yàn)期內(nèi)各組均未發(fā)現(xiàn)動(dòng)物死亡。各實(shí)驗(yàn)組孕鼠的黃體數(shù)與總著床數(shù)相近，僅有少量著床前胚胎喪失，各劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組均與溶劑對(duì)照組比擬，著床前胚胎喪失率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。各實(shí)驗(yàn)組孕鼠平均著床數(shù)為11.7613.25，各劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組均與溶劑對(duì)照組相比，差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。見(jiàn)表3。表3壽胎丸不同劑量對(duì)妊娠期雌鼠生殖狀態(tài)影響12.4壽胎丸對(duì)妊娠期雌鼠生殖狀態(tài)影響2壽胎丸各劑量組活胎率為97.7498.51，溶劑對(duì)照組

10、活胎率為97.57，各劑量組與溶劑對(duì)照組比擬，其活胎率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。各劑量組孕鼠的死胎率與溶劑對(duì)照組相當(dāng)，在0.00.4之間，僅偶見(jiàn)死胎。壽胎丸不同劑量組的吸收胎率，均與溶劑對(duì)照組相當(dāng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義。在胎鼠畸形方面，其高、中、低不同劑量組胎鼠的畸胎率0.75%1.54%與溶劑對(duì)照組1.24%相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義P0.05。陽(yáng)性對(duì)照組活胎率87.94%和死胎率0.39%均與溶劑對(duì)照組相近，但畸胎率37.61%和吸收胎率11.67%明顯高于溶劑對(duì)照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)意義(P0.01)。見(jiàn)表4。表4壽胎丸不同劑量對(duì)妊娠期孕鼠生殖狀態(tài)影響2注：與溶劑對(duì)照組比擬*P0.013討論合理使用藥

11、物，特別是減少藥物毒性對(duì)妊娠婦女機(jī)體的損害，一直是臨床用藥的宗旨。但是，許多臨床中應(yīng)用于妊娠期、圍生期等中藥或復(fù)方，由于其療效肯定，而其潛在生殖或遺傳毒性并沒(méi)有引起人們足夠重視，也正是由于這種無(wú)視，方藥的潛在毒性可能直接或間接地作用于DNA分子，使DNA的復(fù)制或修復(fù)過(guò)程受阻，從而引起疾病發(fā)生，甚至遺傳給下一代。目前國(guó)內(nèi)外所涉及的藥物生殖毒性研究方法數(shù)以百計(jì)，常用的也有十余種2。如致畸敏感期毒性試驗(yàn)、胚胎毒性試驗(yàn)、一般生殖毒性試驗(yàn)、圍產(chǎn)期生殖毒性試驗(yàn)、行為畸胎學(xué)試驗(yàn)等。研究方法雖多，但根本上沒(méi)有根據(jù)中醫(yī)藥自身特點(diǎn)所建立的生殖平安性研究體系?；谥嗅t(yī)的辨證論治規(guī)律，方藥的遣方配伍原那么，壽胎丸廣泛

12、用于妊娠期，而胚胎器官形成期對(duì)藥物作用最為敏感，為此，本研究采用動(dòng)物胚胎致畸敏感期作為藥物作用的時(shí)間靶點(diǎn)進(jìn)展生殖毒性試驗(yàn)。本研究采用壽胎丸3個(gè)不同劑量對(duì)妊娠期雌鼠染毒，各劑量組雌鼠在妊娠期攝食量、體質(zhì)量及增重均與溶劑對(duì)照組相近，說(shuō)明藥物本身沒(méi)有造成明顯的母體毒性而導(dǎo)致胚胎發(fā)育體質(zhì)量偏低。剖宮檢查時(shí)，未發(fā)現(xiàn)內(nèi)臟異常，進(jìn)一步說(shuō)明藥物對(duì)母體未見(jiàn)明顯毒性。各實(shí)驗(yàn)組孕鼠受孕率、黃體數(shù)與總著床數(shù)相近，僅有少量著床前胚胎喪失，與溶劑對(duì)照組比擬，均未見(jiàn)明顯差異。各實(shí)驗(yàn)組孕鼠平均著床數(shù)、活胎率，均與溶劑對(duì)照組相當(dāng)，未見(jiàn)有明顯差異。不同劑量組胎鼠吸收胎率、畸胎率與溶劑對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義。這提示壽胎丸對(duì)妊娠期孕