免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理課件

1、免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù) 的基本原理免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù) 的基本原理免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 免疫學(xué)診斷抗原或抗體的檢測(cè)淋巴細(xì)胞的測(cè)定免疫學(xué)檢測(cè)方法的應(yīng)用免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 免疫學(xué)診斷抗原或抗體的檢測(cè)淋巴細(xì)胞的測(cè)定免疫學(xué)檢測(cè)方 目的要求1.掌握：凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、免疫 標(biāo)記技術(shù)的概念；凝集反應(yīng)、沉淀 反應(yīng)、免疫標(biāo)記技術(shù)的常用方法及 實(shí)際應(yīng)用. 2.熟悉：細(xì)胞免疫檢測(cè)法的基本原理 及實(shí)際應(yīng)用;3.了解：其他免疫學(xué)檢測(cè)方法及其應(yīng)用 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 目的要求1.掌握：凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、免疫免疫學(xué)(一)抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn) 1.抗原抗體反應(yīng)的特異性 2.抗原抗體反應(yīng)的可逆性

2、4.抗原抗體反應(yīng)的階段性： 特異性結(jié)合階段、肉眼可見(jiàn)階段 3.抗原抗體反應(yīng)的可見(jiàn)性一、抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn)及影響因素 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理(一)抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn) 1.抗原抗體反應(yīng)的特異性 2.抗原Ab 過(guò)剩Ag 過(guò)剩比例適當(dāng)，交聯(lián)成網(wǎng)絡(luò)Ag-Ab反應(yīng)的可見(jiàn)性免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理Ab 過(guò)剩Ag 過(guò)剩比例適當(dāng)，交聯(lián)成網(wǎng)絡(luò)Ag-Ab反應(yīng)的可見(jiàn)（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素電解質(zhì) 抗原抗體（等電點(diǎn)pH3-5和pH5-6）在中性或弱堿性條件下帶有負(fù)電荷，需適當(dāng)濃度的電解質(zhì)（如0.85%NaCl）才會(huì)結(jié)合；溫度 通常為37酸堿度 最適pH值在6-8之間。pH值接近等電點(diǎn)時(shí)，抗原抗體多帶正負(fù)電荷相

3、等，由于自身吸引而出現(xiàn)凝集，導(dǎo)致非特異性反應(yīng)。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理二、抗原或抗體的體外檢測(cè)方法免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理二、抗原或抗體的體外檢測(cè)方法免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理1.凝集反應(yīng)直接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng) 細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成凝集團(tuán)塊稱(chēng)凝集反應(yīng)。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理1.凝集反應(yīng)直接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng) 細(xì)菌、紅細(xì)胞直接凝集反應(yīng)的作法及應(yīng)用玻片法：定性試驗(yàn),主要用于細(xì)菌與人類(lèi)ABO血型的鑒定。試管法：半定量試驗(yàn).常用于檢測(cè)抗體的滴度或效價(jià)，臨床診斷傷寒或副傷寒所用的肥達(dá)氏反應(yīng)和診斷布氏菌病所用的瑞特試驗(yàn)免疫學(xué)檢

4、測(cè)技術(shù)的基本原理直接凝集反應(yīng)的作法及應(yīng)用玻片法：定性試驗(yàn),主要用于細(xì)菌與人 1:2稀釋待測(cè)血清 1:4 1:8 1:16 玻片法試管法直接凝集反應(yīng)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 1:2稀釋待測(cè)血清 1:4 間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用常用的載體顆粒：人O型血紅細(xì)胞和 聚苯乙烯乳膠顆粒應(yīng)用：鏈球菌O抗體的檢測(cè)實(shí)驗(yàn); 類(lèi)風(fēng)濕因子的檢測(cè).Coombs試驗(yàn)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用常用的載體顆粒：人O型血紅細(xì)胞和 聚苯2.沉淀反應(yīng) 可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物稱(chēng)沉淀反應(yīng)。單向免疫擴(kuò)散免疫比濁法雙向免疫擴(kuò)散免疫電泳 抗原或抗體的檢測(cè)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理2.沉淀反應(yīng) 可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合

5、后出現(xiàn)沉單向免疫擴(kuò)散的應(yīng)用應(yīng)用：測(cè)定血清中IgG、IgM、IgA 與補(bǔ)體C3的含量.缺點(diǎn):12天才出結(jié)果。雙向免疫擴(kuò)散的應(yīng)用應(yīng)用：根據(jù)沉淀線(xiàn)的數(shù)目和形狀可對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定性檢測(cè)、組分分析等。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理單向免疫擴(kuò)散的應(yīng)用應(yīng)用：測(cè)定血清中IgG、IgM、IgA 對(duì)流免疫電泳可檢測(cè)： 血液中的HBsAg和AFP 免疫比濁法主要用于： 血清蛋白及抗體成分的分析研究免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理對(duì)流免疫電泳可檢測(cè)：免疫比濁法主要用于：免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的3.免疫標(biāo)記技術(shù) 抗原或抗體的檢測(cè) 用熒光素、酶、同位素等標(biāo)記抗體或抗原用以測(cè)定相應(yīng)抗原或抗體的技術(shù)稱(chēng)為免疫標(biāo)記技術(shù)。特點(diǎn)：敏感、特異、快速，能定

6、性、定量、定位。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理3.免疫標(biāo)記技術(shù) 抗原或抗體的檢測(cè) 用熒光素、酶免疫印跡法免疫膠體金技術(shù) 放射免疫測(cè)定法免疫熒光技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) 免疫標(biāo)記技術(shù)常用方法酶免疫測(cè)定法ELISA免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理免疫印跡法免疫膠體金技術(shù) 放射免疫測(cè)定法免疫熒光技術(shù)(1)酶免疫測(cè)定法（ELISA） ： 1971年瑞典學(xué)者Engvail和Perlman-nn,荷蘭學(xué)者Van Weerman和Schuurs分別報(bào)道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測(cè)體液中微量物質(zhì)的固相免疫測(cè)定方法，稱(chēng)為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理(1)酶免疫測(cè)定法（ELISA） ：免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 抗原或抗體的檢

7、測(cè)間接法: 常用于檢測(cè)血清中的抗體。將已知抗原包被于固相載體，加入待檢標(biāo)本，若標(biāo)本中有相應(yīng)的抗體，則可與抗原結(jié)合，再加入酶標(biāo)二抗，洗滌后加底物，底物受酶的催化發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)。 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 抗原或抗體的檢測(cè)間接法:免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理此法是測(cè)定抗體最常用的方法。 間接法已知抗原待測(cè)抗體酶標(biāo)抗體免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理此法是測(cè)定抗體最常用的方法。 間接法已知抗原待測(cè) 抗原或抗體的檢測(cè)雙抗體夾心法: 常用于檢測(cè)標(biāo)本中的抗原。將已知抗體包被在固相載體上，加入待測(cè)標(biāo)本，使其中的抗原與抗體結(jié)合，洗去未結(jié)合的抗原，加入已知的酶標(biāo)抗體與標(biāo)本中抗原結(jié)合，再洗去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，加入底

8、物，底物受酶的催化發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)。 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 抗原或抗體的檢測(cè)雙抗體夾心法:免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原雙抗體夾心法抗體待測(cè)抗原酶標(biāo)抗體底物免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理雙抗體夾心法抗體待測(cè)抗原酶標(biāo)抗體底物免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理BAS-ELISA:可用來(lái)檢測(cè)細(xì)菌、病毒、腫瘤細(xì)胞表面抗原等。 生物素與抗生物素有極高的親和力，利用抗生物素為橋梁，聯(lián)結(jié)生物素化的抗體及生物素化過(guò)氧化物酶，可獲得極高的敏感性（多級(jí)放大系統(tǒng)）。 -Ab+待測(cè)Ag+ Ab-生物素化+抗生物素（四價(jià)）+ 生物素化E+底物免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理BAS-ELISA:可用來(lái)檢測(cè)細(xì)菌、病毒、腫瘤細(xì)胞表面抗原等 BA

9、S-ELISA法：敏感性更高。用于抗原、抗體以及DNA、RNA的檢測(cè)。卵白及某些微生物中的蛋白質(zhì)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 BAS-ELISA法：敏感性更高。用于抗原、抗體以及DN 抗原或抗體的檢測(cè)微粒捕獲酶免疫分析技術(shù) 常用于檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物(CEA、AFP)性激素、甲狀腺素（T3、T4）、HCG等微量可溶性抗原 。將已知抗體致敏的微粒與生物素親和素酶放大系統(tǒng)結(jié)合，最后酶作用于熒光底物，通過(guò)檢測(cè)熒光強(qiáng)度來(lái)判斷未知抗原的含量。 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 抗原或抗體的檢測(cè)微粒捕獲酶免疫分析技術(shù) 免疫學(xué)檢測(cè)磁性微粒子固相：直徑2.8微米，粒子小，懸 液類(lèi)似液相；包被面積大；磁吸引分離方便。免疫學(xué)檢測(cè)技

10、術(shù)的基本原理磁性微粒子固相：直徑2.8微米，粒子小，懸免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基 抗原或抗體的檢測(cè)免疫組化技術(shù)：指帶顯色劑（酶）標(biāo)記的特異性抗體或抗原在組織細(xì)胞原位發(fā)生抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗原或抗體進(jìn)行定位、定性、定量檢測(cè)的技術(shù)。 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 抗原或抗體的檢測(cè)免疫組化技術(shù)：指帶顯色劑（酶）標(biāo)記的免疫組化技術(shù)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理免疫組化技術(shù)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理(2)免疫熒光技術(shù) 是用熒光素標(biāo)記一抗或二抗，檢測(cè)特異性抗原或抗體的方法。常用的熒光素有異硫氰酸熒光素、藻紅蛋白等.免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理(2)免疫熒光技術(shù)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理直接熒光法：檢測(cè)不同的抗

11、原，需要不同的特異性熒光抗體間接熒光法：用一抗與樣本中的抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的二抗染色。此方法既可檢測(cè)抗原又可檢測(cè)抗體。若查抗原，一抗為已知的；若查抗體，抗原是已知的。一種熒光抗體可用于多種不同抗原的檢測(cè)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理直接熒光法：檢測(cè)不同的抗原，需要不同的特異性熒光抗體免疫學(xué)檢(3)放射免疫測(cè)定法(RIA）：是用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行的免疫測(cè)定。將同位素的敏感性與抗原抗體結(jié)合的特異性結(jié)合起來(lái)，具有重復(fù)性好、準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn). 用于激素、藥物等微量物質(zhì)的檢測(cè)，敏感性可達(dá)到pg/ml水平。常用的放射性核素有131I和125I等。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理(3)放射免疫測(cè)定法(RIA

12、）：是用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體(3)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)（CLIA）： 將化學(xué)發(fā)光（如魯米諾）分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。 特點(diǎn)：靈敏度高、特異性強(qiáng) 分離簡(jiǎn)便、自動(dòng)化分析。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理(3)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)（CLIA）：免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理（4）免疫膠體金技術(shù)（ICS）： 用膠體金顆粒標(biāo)記抗體或抗原，以檢測(cè)未知抗原或抗體的方法稱(chēng)免疫膠體金技術(shù)。 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理（4）免疫膠體金技術(shù)（ICS）：免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理（5）免疫印跡技術(shù) 又稱(chēng)Western blotting，是將十二烷基磺酸鈉（SDS）聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）分離得到的蛋白轉(zhuǎn)移到

13、固相載體膜上，再用標(biāo)記的特異性抗血清或單克隆抗體對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定性及定量分析的技術(shù)。敏感性為15ng。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理（5）免疫印跡技術(shù)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理4、蛋白質(zhì)芯片技術(shù) 常用于微生物感染的檢測(cè)。其原理是將各種蛋白質(zhì)固定于載體上制成芯片，再用熒光標(biāo)記抗體與芯片作用，洗去未結(jié)合的抗體后，用熒光掃描儀或激光共聚焦掃描技術(shù)測(cè)定芯片上各點(diǎn)熒光強(qiáng)度，以此檢測(cè)熒光對(duì)應(yīng)的抗體及其相互結(jié)合的程度。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理4、蛋白質(zhì)芯片技術(shù)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理三、免疫細(xì)胞的測(cè)定人的免疫細(xì)胞測(cè)定：外周血?jiǎng)游锏拿庖呒?xì)胞測(cè)定： 外周血、胸腺、脾臟與其他組織。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理三、免疫細(xì)胞的測(cè)定

14、人的免疫細(xì)胞測(cè)定：外周血?jiǎng)游锏拿庖呒?xì)胞測(cè)定常用的方法：葡萄糖-泛影葡胺密 度梯度離心法。 外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離 淋巴細(xì)胞及其亞群的分離1.免疫吸附分離法:獲得不同的T細(xì)胞亞群2.免疫磁珠分離法：獲得不同表面標(biāo)志的 活T細(xì)胞亞群. 3.免疫磁珠法4.抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù) 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理常用的方法：葡萄糖-泛影葡胺密 外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離 免疫吸附分離法： 將已知抗淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志的抗體包被聚苯乙烯培養(yǎng)板，加入淋巴細(xì)胞懸液，表達(dá)相應(yīng)細(xì)胞表面標(biāo)志的淋巴細(xì)胞可被吸附在培養(yǎng)板上，即可與其他細(xì)胞分開(kāi)。 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理免疫吸附分離法：免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理免疫吸附分離法加入

15、淋巴細(xì)胞懸液anti-CD4anti-CD4anti-CD4棄上清免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理免疫吸附分離法加入淋巴anti-CD4anti-CD4ant免疫磁珠法:應(yīng)用較廣泛 是一種特異性分離所需淋巴細(xì)胞的方法。首先將特異性抗體（如抗CD3、抗CD4或抗CD8等）吸附在磁性微珠上，與待測(cè)細(xì)胞懸液中的相應(yīng)細(xì)胞特異性結(jié)合后,再將磁珠結(jié)合細(xì)胞與未結(jié)合磁珠細(xì)胞分開(kāi)，即可獲得純度高的所需細(xì)胞。 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理免疫磁珠法:應(yīng)用較廣泛免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理磁珠分離法免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理磁珠分離法免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理熒光激活細(xì)胞分選儀分離法： （流式細(xì)胞術(shù)分離法） 是一種集光學(xué)、流體力學(xué)、電

16、力學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)于一體，可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)定量測(cè)定和綜合分析方法. 定量分析活細(xì)胞表面表達(dá)的特異分子 免疫細(xì)胞分析和細(xì)胞計(jì)數(shù)。 白血病和淋巴瘤的免疫學(xué)分型。 細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡檢測(cè)。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理熒光激活細(xì)胞分選儀分離法：免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理流式細(xì)胞術(shù)熒光抗體標(biāo)記混合細(xì)胞噴嘴單細(xì)胞懸液5000-10000個(gè)/秒細(xì)胞分選器熒光檢測(cè)器免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理流式細(xì)胞術(shù)熒光抗體標(biāo)記混合細(xì)胞噴嘴單細(xì)胞懸液細(xì)胞分選器熒光檢抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù) 將特異性抗原肽段、可溶性MHC-類(lèi)分子重鏈及2微球蛋白在體外正確折疊，在親和素存在下構(gòu)建四聚體，并結(jié)合流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)外周血及組織中抗原特

17、異性CTL的比率。 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理淋巴細(xì)胞及其亞群的分離免疫細(xì)胞功能測(cè)定磁珠分離法免疫吸附分離法流式細(xì)胞術(shù)肽MHC四聚體技術(shù)T細(xì)胞功能測(cè)定B細(xì)胞功能測(cè)定細(xì)胞因子檢測(cè)T細(xì)胞增殖試驗(yàn)遲發(fā)型超敏反應(yīng)的檢測(cè)抗體含量測(cè)定溶血空斑試驗(yàn)巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)細(xì)胞毒試驗(yàn)吞噬功能測(cè)定51Cr釋放法乳酸脫氫酶釋放法細(xì)胞染色法凋亡細(xì)胞檢測(cè)法硝基藍(lán)四氮唑試驗(yàn)生物活性檢測(cè)法免疫學(xué)檢測(cè)法（三）淋巴細(xì)胞功能的測(cè)定免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理淋巴細(xì)胞及其亞群的分離免疫細(xì)胞磁珠分離法免疫吸附分離法流式細(xì)1.T淋巴細(xì)胞功能的測(cè)定 形態(tài)學(xué)方法：T淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn). 3H-TdR

18、摻入法:靈敏性高,但有放射污染. MTT法：靈敏性不及3H-TdR摻入法,但 無(wú)放射污染.（4）遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH）的檢測(cè) 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理1.T淋巴細(xì)胞功能的測(cè)定（4）遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH）的檢測(cè)形態(tài)學(xué)方法：T淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) T淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)，在有絲分裂原刺激下,可轉(zhuǎn)化為T(mén)淋巴母細(xì)胞(體積增大、細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則、胞質(zhì)增多、細(xì)胞核松散及出現(xiàn)較多核仁)。通過(guò)觀(guān)察培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)量，了解其細(xì)胞的增殖變化。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理形態(tài)學(xué)方法：T淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的3H-TdR摻入法: T細(xì)胞增殖過(guò)程中DNA和RNA合成會(huì)增加。在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷(

19、3H-TdR）或125I標(biāo)記的尿嘧啶核苷（125-UdR），則會(huì)被摻入細(xì)胞核中。培養(yǎng)結(jié)束后收集細(xì)胞，用液體閃爍儀測(cè)定樣本中放射性活性，可反映細(xì)胞的增殖水平。 靈敏性高, 有放射污染。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理3H-TdR摻入法:免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理放射性測(cè)定3H-TdR絲裂原刺激淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)原理示意免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理放射性測(cè)定3H-TdR絲裂原刺激淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)原理示意免疫 MTT法：靈敏性不及3H-TdR摻入法 但無(wú)放射污染. T細(xì)胞增殖時(shí)，線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶將MTT還原為紫褐色的甲臜顆粒，該顆粒被隨后加入的異丙醇或二甲基亞砜溶解。用酶標(biāo)儀測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中溶解紫褐色甲臜

20、的OD值，即反映細(xì)胞的增殖水平。 （ MTT一種噻唑鹽，二苯基溴化四唑，淡黃色可溶性物質(zhì)）。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 MTT法：靈敏性不及3H-TdR摻入法 免疫學(xué)檢測(cè)技遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH） 體內(nèi)檢測(cè)細(xì)胞免疫功能的皮試方法原理：被抗原已致敏的機(jī)體，再用相同的抗原作皮試可導(dǎo)致遲發(fā)型超敏反應(yīng)， 72小時(shí)后局部充血、滲出、紅腫和硬結(jié)。細(xì)胞免疫正常者出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，細(xì)胞免疫低下者則呈弱陽(yáng)性或陰性反應(yīng)。 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理常用于檢測(cè)某些微生物感染免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理常用于檢測(cè)某些微生物感染免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 2.B淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn) (1)

21、利用前面介紹的抗原抗體檢測(cè)方法 測(cè)定標(biāo)本中抗體含量。 (2)抗體形成細(xì)胞測(cè)定試驗(yàn)： 又稱(chēng)溶血空斑形成細(xì)胞試驗(yàn),可 檢測(cè)產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞數(shù)量。 3.細(xì)胞毒試驗(yàn):是檢測(cè)CTL、NK等細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞活性的細(xì)胞學(xué)技術(shù)。主要用于腫瘤免疫、移植排斥反應(yīng)和病毒感染等方面的研究。 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 2.B淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)3.細(xì)胞毒試驗(yàn):是檢測(cè)CTL、NK等4.吞噬細(xì)胞功能測(cè)定 顯微鏡測(cè)定法 吞噬率（）=（吞噬細(xì)菌的吞噬細(xì)胞數(shù) 200個(gè)吞噬細(xì)胞）100 吞噬指數(shù)=（200個(gè)吞噬細(xì)胞中所吞噬的細(xì)菌 總數(shù) 200個(gè)吞噬細(xì)菌的吞噬細(xì)胞） 100 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理4.吞噬細(xì)胞功能測(cè)定 顯微鏡測(cè)定法免疫學(xué)

22、檢測(cè)技術(shù)的基本原5細(xì)胞因子的測(cè)定 細(xì)胞因子的檢測(cè)有助于了解其在免疫調(diào)節(jié)中的作用，監(jiān)測(cè)細(xì)胞免疫功能。常檢測(cè)的細(xì)胞因子有IL-2、IL-4、IL-10、IFN-等。常用的方法主要有生物活性檢測(cè)法、ELISA法等。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理5細(xì)胞因子的測(cè)定 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理三、免疫學(xué)檢測(cè)的應(yīng)用（一）協(xié)助診斷感染性疾病（三）協(xié)助診斷免疫系統(tǒng)疾?。ㄋ模┻M(jìn)行免疫學(xué)監(jiān)測(cè)（二）協(xié)助診斷腫瘤免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理三、免疫學(xué)檢測(cè)的應(yīng)用（一）協(xié)助診斷感染性疾病（三）協(xié)助診斷免思考題1.解釋名詞 凝集反應(yīng) 沉淀反應(yīng) 免疫標(biāo)記技術(shù)2.可用哪些方法定量檢測(cè)血液標(biāo)本中的抗原？3.可用哪些方法檢測(cè)組織中的抗原？4.H

23、IV、HBV感染者的診斷和病情監(jiān)測(cè)可用哪些方法?免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理思考題1.解釋名詞免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理凝集反應(yīng)原理圖解（一）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理凝集反應(yīng)原理圖解（一）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理凝集反應(yīng)原理圖解（二）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理凝集反應(yīng)原理圖解（二）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理凝集反應(yīng)原理圖解（三）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理凝集反應(yīng)原理圖解（三）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原 雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基免疫電泳(immunoelectrophoresi

24、s)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理免疫電泳(immunoelectrophoresis)免疫學(xué) 對(duì)流免疫電泳免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 對(duì)流免疫電泳 火箭電泳免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 火箭電泳免疫測(cè)吸光度抗體抗原免疫復(fù)合物的濃度與透射光的衰減呈正相關(guān)。免疫比濁法原理免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理測(cè)吸光度抗體抗原免疫復(fù)合物的濃度與透射光的衰減呈正相關(guān)。免疫 免疫熒光技術(shù)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 免疫熒光技術(shù)免疫學(xué)檢測(cè)技 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA-間接法)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA-間接法)免疫學(xué)檢測(cè)斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)?zāi)z體金：氯金酸（HAuCl4）在還原劑的作用下，可聚合成特定大

25、小的金顆粒，因其在靜電作用下而呈穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱(chēng)膠體金。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)?zāi)z體金：氯金酸（HAuCl4）在還原劑的作斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn) 用膠體金作為標(biāo)記物來(lái)檢測(cè)抗原或抗體的方法。膠體金顆粒聚集后呈紅色，可用于標(biāo)記多種大分子，如白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、激素、脂蛋白、植物血凝素、卵白素等。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn) 用膠體金作為標(biāo)記物來(lái)檢測(cè)抗原或抗體 兔抗鼠IgG鼠抗HCG單抗金標(biāo)鼠抗HCG單抗尿液浸濕標(biāo)志線(xiàn) 手持端斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)（一）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 兔抗鼠IgG鼠抗HCG單抗金標(biāo)鼠抗HCG單抗尿液浸濕標(biāo)志線(xiàn)斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)（二）尿樣

26、陽(yáng)性弱陽(yáng)性陰性無(wú)效免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)（二）尿樣陽(yáng)性弱陽(yáng)性陰性無(wú)效免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)免疫印跡法圖解裂解病毒聚丙酰胺凝膠電泳-+ 95 68 45 12KD電轉(zhuǎn)印至NC膜上置待測(cè)血清中，漂洗；加酶標(biāo)抗抗體，漂洗；加底物 顯色120 41 24KD十二烷基磺酸鈉SDS免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理免疫印跡法圖解裂解病毒聚丙酰胺凝膠電泳-+ 9 T細(xì)胞亞群的檢測(cè)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 T細(xì)胞亞群的檢測(cè)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理抗凝血 分層液 抗凝血血漿 白膜層 紅細(xì)胞離心淋巴細(xì)胞的分離免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理抗凝血 分層液 抗凝血血漿 白膜層 紅細(xì)胞離心淋巴細(xì)胞的分離 T細(xì)胞亞群的檢測(cè)花

27、環(huán)法（一）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 T細(xì)胞亞群的檢測(cè)花環(huán)法（一）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的 T細(xì)胞亞群的檢測(cè)花環(huán)法（二）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 T細(xì)胞亞群的檢測(cè)花環(huán)法（二）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基PHA淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)示意圖細(xì)胞淋巴母細(xì)胞免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理PHA淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)示意圖細(xì)胞淋巴母細(xì)胞免淋轉(zhuǎn)（標(biāo)本片）淋巴母細(xì)胞免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理淋轉(zhuǎn)（標(biāo)本片）淋巴母細(xì)胞免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理淋轉(zhuǎn)（標(biāo)本片）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理淋轉(zhuǎn)（標(biāo)本片）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理淋轉(zhuǎn)（標(biāo)本片）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理淋轉(zhuǎn)（標(biāo)本片）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理操作流程1.制備抗體包被板（試劑盒中所帶） 2.加待測(cè)標(biāo)本及對(duì)照品；加酶標(biāo)記物 3.溫育，37 30min 4.漂洗（磷酸緩沖鹽水） ,20s*5次 5.加底物(四甲基聯(lián)苯胺)、顯色劑(H2O2)37 5min 6.結(jié)果測(cè)定EEEEEEEE底物系統(tǒng)抗AFP抗體AFP酶標(biāo)抗體雙抗體夾心復(fù)合物免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理操作流程1.制備抗體包被板（試劑盒中所帶） 2.加待測(cè)標(biāo)本及4.蛋白質(zhì)芯片技術(shù)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理4.蛋白質(zhì)芯片技術(shù)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理抗原肽-MHC四聚體分離技術(shù)親和素抗原肽MHC I生物素anti-CD8肽-四聚體肽特異性CD8TCD4T及B非肽特異性CD