成纖維細胞生長因子在早期人胚胎組織的表達

1、成纖維細胞生長因子在早期人胚胎組織的表達【摘要】目的研究成纖維細胞生長因子FibrblastGrthFatr,B-FGF在人胚早期發(fā)育的表達。方法用胚胎齡51天的人胚胎行免疫細胞化學AB法染色。結果胚胎早期發(fā)育第51天，在肝、上下肢芽和表皮等組織器官中觀察到有B-FGF免疫陽性反響存在，不同器官其免疫陽性反響的強弱和表達情況有差異。結論在人胚胎發(fā)育過程中，B-FGF在肝、上肢芽和表皮等組織器官中分布，提示B-FGF對肝、上肢芽和表皮等組織的增殖起作用?！娟P鍵詞】B-FGF；胚胎；增殖Abstrat：bjetiveTinvestigatetheexpressinandthedistributin

2、fthefibrblastgrthfatrduringtheearlydevelpentfhuanebry.ethdsThehuanebryin51daysandiunytheistryABtehniqueithanti-B-FGFantibdyereused.ResultB-FGFiun-psitivesubstaneerebservedintheytplasfliver,anterirandpsterirlibbudandepideris.ThereeredifferentialexpressinnB-FGFiun-psitivesubstaneindifferentellsanddiff

3、erentrgans.nlusinTheexpressinfB-FGFiun-psitivesubstaneintheliver,libbudandepiderisightsuggestthatB-FGFplaysaniprtantrleinprtingandaintainingthebilgialfuntininthedevelpentfhuanebry.Keyrds:B-FGF;huanebry;develpent成纖維細胞生長因子(FibrblastGrthFatr-，B-FGF)在體內具有廣泛的生物學意義，對胚胎發(fā)育起著非常重要的作用1。為此國外許多學者對胚胎、成人和動物用不同方法對B

4、-FGF的含量，蛋白表達和RNA進展定位研究2，但對人類胚胎多種組織的B-FGF的免疫組化研究較少。為了探明B-FGF在胚胎組織的分布情況和可能起到的作用，本實驗用免疫組化方法對人胚胎B-FGF的分布進展研究。1材料和方法1.1材料搜集早期人胚胎51天標本3例，用4%多聚甲醛固定后制作8厚的石蠟切片。B-FGF抗體Siga公司產品，AB藥盒Vetr公司產品。1.2方法免疫細胞化學染色iunytheistrystainingI：間隔取石蠟切片，3例人胚胎標本取30張切片，入60烤箱0.5h，梯度酒精脫水，常規(guī)H-E染色?？乖迯?，AB免疫組化染色。用0.3%H22預處理5in，消除內源性過氧化物

5、酶，用0.01l/LPBS漂洗3次，每次5in。分別用兔抗B-FGF效價1250，Siga抗體孵育切片，371h，入冰箱4過夜。用0.01l/LPBS漂洗3次，每次5in。用生物素標記的羊抗兔血清1200Vetr公司產品孵育，372h。用0.01l/LPBS漂洗3次，每次5in。用卵白素-生物素復合物1100Vetr公司產品孵育，371h。0.05l/LTBS漂洗3次，每次5in。切片入DAB-H22顯色液，室溫反響5in。顯色液配制：用0.05l/LTBS20l溶解DAB10g，充分搖勻，使DAB終濃度為0.05，顯色前參加30的H228l，使其終濃度為0.01。0.01l/LPBS漂洗3次

6、，每次5in。梯度酒精逐級脫水，二甲苯透明，樹膠封片。1.3對照實驗取正常兔血清代替兔抗B-FGF血清。其它步驟與上述一樣。轉貼于論文聯(lián)盟.ll.2結果2.1肝胚胎肝細胞呈不規(guī)那么團索狀，B-FGF陽性細胞呈點狀和團塊狀散在分布于整個肝組織內，以后者居多。陽性細胞大多為肝細胞，局部為造血細胞，陽性反響聚集成團(見圖1)。2.2表皮在胚胎表皮可見B-FGF陽性反響物，其細胞反響強弱和數(shù)目在胚胎的不同部位變化較大(見圖2)。2.3上下肢芽在胚胎上下肢芽的間充質中可見B-FGF陽性反響物(見圖3)。3討論胚胎發(fā)育是一個非常復雜的過程，其過程受多種因子的調控，大量研究說明B-FGF作為一種營養(yǎng)因子，在

7、胚胎發(fā)育的多個階段都有重要作用，能誘導組織細胞的分化與成熟，對胚胎發(fā)育具有非常重要的作用。本實驗觀察到B-FGF在肝表達，B-FGF陽性細胞呈點狀和團塊狀散在分布于整個肝組織內。陽性細胞大多為肝細胞，局部為造血細胞，陽性反響聚集成團，提示B-FGF對肝細胞具有促進增殖的作用，同時可能具有旁分泌的作用。胚胎時期人的肝組織是合成B-FGF的主要部位，約占血液B-FGF總量的90，肝細胞中B-FGF的表達，提示肝產生的大局部B-FGF分泌入血，對其他組織行使類似激素樣內分泌作用。B-FGF在表皮中表達，其細胞免疫陽性反響強弱在胚胎的不同部位變化較大，提示B-FGF對表皮細胞的增殖具有促進作用，胚胎發(fā)

8、育的時序可能是在胚胎的不同部位免疫陽性反響強弱的原因。B-FGF的表達與胚胎上下肢芽發(fā)育過程有關。artinu等3使用免疫組化及原位雜交方法在3-15天的雞胚胎中觀測到B-FGF及其RNA在中胚層中表達最為明顯。本實驗觀察到B-FGF在上下肢芽中表達，其間充質中可見B-FGF陽性反響細胞和纖維，提示B-FGF對上下肢芽的發(fā)育具有促進作用?！緟⒖嘉墨I】1hristensenRN,EinstEIn,TassavaRA.FibrblastGrthFatrsinRegeneratingLibsfAbysta:lningandSei-quantitativeRT-PRExpressinStudiesJ.

9、ExpZl,2001,290(5):529-540.2BatesB,HardinJ,ZhanX,etal.BisynthesisfHuanFibrblastGrthFatr-5J.lellBil,1991,11(4):1840-1845.3unz-SanjuanI,SiandlBK,FallnJF,etal.ExpressinfhikenFibrblastGrthFatrHlgusFatr(FHF)-1andfDifferentiallySpliedIsfrsfFHF-2duringDevelpentandInvlveentfFHF-2inhikenLibDevelpentJ.Develpen

10、t,1999,126(2):409-421.4GspdarrizD,FerraraN,SheigererL,etal.StruturalharaterizatinandBilgialFuntinsfFibrblastGrthFatrJ.EndrineRev,1987,8:95-104.5NatinalanerInstitute,anerGeneAnatyPrjet(GAP),TurGeneIndex.nbi.nl.nih.gv/nigap.ntat:RbertStrausberg,Ph.D.Tel:(301)496-1550.6AyagiA,NishikaaK,andSaitH,etal.haraterizatinfBasiFibrblastGrthFatr-ediatedAeleratinfAxnalBranhinginulturedRatHippapalNeunsJ.BrainRes,1994,661:117-126.7RazV,KelanZ,AviviA,etal.PR-basedIdentifiatinfNeReeptrs:leularlningfaReept