畢業(yè)論文-大血藤葉斑病的病原鑒定及其生物防治

1、凱里學(xué)院本科畢業(yè)論文PAGE PAGE 9x 學(xué)科代碼： 070401學(xué) 號： 本科畢業(yè)論文（設(shè)計）題目：大血藤葉斑病的病原鑒定及其生物防治學(xué) 院： 環(huán)境與生命科學(xué)學(xué)院專 業(yè)：生物科學(xué)班 級：09 生本 學(xué)生姓名：指導(dǎo)教師：年 月 日目錄 TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc344906770 目錄 PAGEREF _Toc344906770 h I HYPERLINK l _Toc344906772 摘要： PAGEREF _Toc344906772 h II HYPERLINK l _Toc344906773 關(guān)鍵詞： PAGEREF _Toc344906773

2、 h III HYPERLINK l _Toc344906775 Abstract: PAGEREF _Toc344906775 h III HYPERLINK l _Toc344906776 Keywords: PAGEREF _Toc344906776 h III HYPERLINK l _Toc344906777 0 前言 PAGEREF _Toc344906777 h 1 HYPERLINK l _Toc344906778 1 材料與方法 PAGEREF _Toc344906778 h 1 HYPERLINK l _Toc344906779 1.1 實(shí)驗(yàn)時間和地點(diǎn) PAGEREF _T

3、oc344906779 h 1 HYPERLINK l _Toc344906780 1.2 實(shí)驗(yàn)材料 PAGEREF _Toc344906780 h 1 HYPERLINK l _Toc344906781 1.3 實(shí)驗(yàn)方法 PAGEREF _Toc344906781 h 2 HYPERLINK l _Toc344906782 2 結(jié)果與分析 PAGEREF _Toc344906782 h 2 HYPERLINK l _Toc344906783 2.1 病癥的觀察與描述 PAGEREF _Toc344906783 h 3 HYPERLINK l _Toc344906784 2.2 分離培養(yǎng)的結(jié)果

4、 PAGEREF _Toc344906784 h 3 HYPERLINK l _Toc344906785 2.3 鏡檢及鑒定的結(jié)果 PAGEREF _Toc344906785 h 4 HYPERLINK l _Toc344906786 2.4 生防菌作用結(jié)果 PAGEREF _Toc344906786 h 5 HYPERLINK l _Toc344906787 3 結(jié)論與討論 PAGEREF _Toc344906787 h 7 HYPERLINK l _Toc344906788 參考文獻(xiàn) PAGEREF _Toc344906788 h 8大血藤葉斑病的病原鑒定及其生物防治（凱里學(xué)院環(huán)境與生命科

5、學(xué)學(xué)院 貴州凱里 556011）摘要：本文通過對大血藤（Sargentodoxa cuneata）葉斑病癥的觀察，采用組織分離法分離病原菌，并對病原菌進(jìn)行培養(yǎng)。通過對病原菌菌落的形態(tài)觀察和孢子大小的測定，鑒定引起黔東南州大血藤葉斑病病害的病原微生物為瓜果腐霉（Pythium aphanidermatum）和鏈格孢霉（Alternaria alternata),經(jīng)過測微尺測定（50個孢子）所得鏈格孢霉孢子大小為1029.17m510.87m，瓜果腐霉孢子大小為 13.717.2m12.017.2m。并針對性地選擇了三種枯草芽苞桿菌制劑對其進(jìn)行生物防治實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：枯草芽孢桿菌F1制劑對兩種病菌

6、的防治效果最好，其次F18相對較好，F(xiàn)2防治效果較低。關(guān)鍵詞：大血藤；葉斑??；瓜果腐霉；鏈格孢霉；生物防治Identification of Pathogen and Biological control of Sargentodoxa cuneataSong Erchun(Environment and life science, Kaili university, Kaili，Guizhou 556011)Abstract: Based on the observation of leaf spot disease of Sargentodoxa cuneata, By means of

7、tissue isolation of pathogenic bacteria, The pathogens were cultured and. The pathogen morphology observation and spore size determination, Identification of leaf spot disease caused by the Qian dongnan sun pathogenic microorganisms for Pythium aphanidermatum and Alternaria alternata,After micromete

8、r measurement (50 spores of Alternaria alternata sporulation) the size of 1029.17 m 510.87 m,Pythium aphanidermatum spore size of 13.717.2 m 12.017.2 m.And to choose three kinds of Bacillus subtilis bud by preparations for biological control experiment, comparing their bacteriostatic effect.The resu

9、lts showed: the Bacillus subtilis F1 preparations on two kinds of pathogens of the best control effect is relatively good, followed by F18, F2 less intibiting effect.Keywords: Sargentodoxa cuneata; leaf spot; Pythium aphanidermatum; Alternaria alternata; biological control0 前言大血藤又名血藤、紅皮藤、千年健等，為木通科植物

10、大血藤Sargentodoxa cuneata (Oliv.) Rehd. Et Wils.的莖。落葉木質(zhì)藤本，長達(dá)到10余米。藤徑粗達(dá)9厘米，全株無毛；當(dāng)年枝條暗紅色，老樹皮有時縱裂。其干燥莖呈圓柱形，略彎曲，通常截成長約30厘米的段狀，直徑13厘米。外表 HYPERLINK /view/1148040.htm t _blank 棕色或灰棕色，粗糙，具有淺的縱槽紋及明顯的橫裂紋，有時可見膨大的節(jié)部及略凹陷的枝痕或葉柄痕。大血藤生于山坡疏林、溪邊。主產(chǎn)湖北、 HYPERLINK /view/7627.htm t _blank 四川、江西、 HYPERLINK /view/2874.htm t

11、_blank 河南、江蘇； HYPERLINK /view/4380.htm t _blank 安徽、浙江亦產(chǎn)。大血藤性味苦，具有敗毒消癰，活血通絡(luò)，祛風(fēng)殺蟲的作用；治急、慢性闌尾炎， HYPERLINK /view/954.htm t _blank 風(fēng)濕痹痛，赤痢，血淋，月經(jīng)不調(diào)，疳積，蟲痛，跌撲損傷；還可作為植物染料使用，有很好的染色效果。 在國內(nèi)，很多地區(qū)進(jìn)行了大血藤的種植和推廣，其生產(chǎn)意義對于人類來說是比較可觀的。因此，國內(nèi)外有很多人對其進(jìn)行了深入的研究，以便于更好的利用其生理價值。目前，國內(nèi)外對大 血藤的分類、藥用化學(xué)成分的類別、結(jié)構(gòu)和藥理以及其分子生物學(xué)、生態(tài)學(xué)方面有一定的研究。但

12、是，對大血藤的病害卻沒有太多的相關(guān)研究報告。隨著大血藤的大面積種植推廣，提出比較科學(xué)、有效的病害防治措施是十分必要的。本文立足于貴州黔東南州大血藤的當(dāng)前病害發(fā)生狀況，研究病害發(fā)病原因和鑒定病原菌種類及其生物防治，希望能為貴州省黔東南州大血藤病害防治有一定的參考價值。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)時間和地點(diǎn)室外實(shí)驗(yàn)于2011年3月在貴州省黔東南州錦屏縣邊沙村進(jìn)行，室內(nèi)試驗(yàn)在凱里學(xué)院環(huán)境與生命科學(xué)學(xué)院分院微生物實(shí)驗(yàn)室顯微實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。1.2 實(shí)驗(yàn)材料1.2.1 標(biāo)本采集 在貴州省黔東南州錦屏縣邊沙村采集大血藤病害組織制成標(biāo)本。1.2.2 儀器設(shè)備 高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、無菌操作臺、顯微鏡、電磁爐、

13、照相機(jī)等。1.2.3 試劑及材料 75%乙醇、0.1%升汞、鏈霉素、蒸餾水、枯草芽孢桿菌F1、F2、F18制劑；馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基（PSA）： 馬鈴薯200g 、蔗糖17 g、瓊脂1720g、水1000g、121、高壓滅菌鍋滅菌30min。1.3 實(shí)驗(yàn)方法1.3.1 病癥的觀察與描述 到貴州省黔東南州錦屏縣邊沙村對大血藤病害進(jìn)行了解和觀察，從病害組織的表面病斑形態(tài)、病部顏色、病斑的大小等方面對其進(jìn)行觀察和描述，并拍照記錄。1.3.2 病原菌的培養(yǎng)、分離及純化 取病健交界處的葉片小塊組織2-4mm，先用75%的酒精對大血藤葉片病斑部進(jìn)行表面消毒處理2-3秒，然后放入0.1%的升汞溶液中進(jìn)行消毒2分

14、鐘，再放進(jìn)無菌水中漂洗3次，移入PSA平板內(nèi)培養(yǎng)，在PSA培養(yǎng)基上28培養(yǎng)34天。對病原真菌的分離采用組織分離法，待病菌組織的周圍長出不同的菌絲體，挑取外圍新長的菌絲，分別移置到新的添加鏈霉素的PSA培養(yǎng)基上，依次重復(fù)多次，直至得到純的病原菌進(jìn)行純培養(yǎng)，然后對純培養(yǎng)菌落進(jìn)行拍照。1.3.3 病原菌的鑒定 顯微鏡檢查分為真菌病害標(biāo)本和培養(yǎng)真菌的顯微鏡鏡檢兩個方面，主要是觀察孢子的形狀，顏色，是否有隔及油球的分布；菌絲的形狀，顏色，是否有隔，是否有分支并采用測微尺測量孢子的大小等。同時，對病原微生物進(jìn)行顯微照像和描述記錄。 1.3.4 生防菌對病原菌的抑制作用 將三種枯草芽苞桿菌接種到分離純化的病

15、原菌（這時病原菌生長所需的培養(yǎng)基不加入鏈霉素）周圍，放入28恒溫箱培養(yǎng)，培養(yǎng)3-4天，觀察各種生防菌對病原菌的抑制作用并做記錄，同時拍照。2 結(jié)果與分析2.1 病癥的觀察與描述邊沙2危害葉片，發(fā)病初期葉片上常有綠色小黃點(diǎn)，后擴(kuò)大成圓形或橢圓形斑點(diǎn)；后期病斑中部呈橙紅或紅褐色。表面出現(xiàn)稀小黑點(diǎn)，邊緣呈深褐色。邊沙5葉片上病斑圓形，后擴(kuò)大呈不規(guī)則狀大病斑，并產(chǎn)生輪紋，病斑由紅褐色變?yōu)楹诤稚?，中央灰褐色。（如圖1和圖2所示） 圖1大血藤葉片 圖2大血藤葉片2.2 分離培養(yǎng)的結(jié)果經(jīng)過組織培養(yǎng)、分離、純化，得到兩種菌落。其中邊沙2菌落菌絲較粗而短，菌落較大，正面呈灰褐色，菌落質(zhì)地致密，外觀干燥，不透明，

16、呈現(xiàn)絨毛狀，菌落與培養(yǎng)基的連接緊密，不易挑取，菌落邊緣鋸齒狀，菌落反面呈深褐色。邊沙5菌落呈黑褐色，中部稍向上凸起，表面疏松具皺紋且有水滴，菌落質(zhì)地棉絮狀，菌落邊緣呈全緣狀，菌絲較長，培養(yǎng)基背面觀，菌落具有同心輪紋，呈放射狀生長。（如圖3、4、5、6所示）圖3邊沙2菌落正面 圖4邊沙2菌落背面 圖5 菌落正面 圖6 菌落背面2.3 鏡檢及鑒定的結(jié)果大血藤葉斑病的病原菌為鏈格孢霉，鏈格孢霉又稱黑霉菌，屬于半知菌綱鏈孢霉目黑霉科鏈格孢屬。菌絲淡褐色有隔，分枝。分生孢子梗短，不分枝，頂生分生孢子。分生孢子串生，黑褐色，多細(xì)胞，有縱橫隔膜，卵圓形，呈磚隔狀。通過測微尺測定（50個孢子）所得鏈格孢霉孢子

17、大小為1029.17m510.87m。（如圖7、8所示） 圖7鏈格孢酶菌絲（1040） 圖8鏈格孢霉孢子（1040） 大血藤的病原菌為瓜果腐霉，瓜果腐霉屬于假菌界卵菌門腐霉目腐霉科腐霉屬。孢子囊為膨大菌絲或瓣狀菌絲、不規(guī)則菌絲組成，頂生或間生， 出管長短不一；泡囊球形，內(nèi)含625 個或更多的游動孢子；游動孢子腎形金黃色，經(jīng)測定瓜果腐霉孢子大小為 13.717.2m12.017.2m。（如圖9、10所示） 圖9瓜果腐霉孢子囊 （1040） 圖10瓜果腐霉游動孢子（1040）2.4 生防菌作用結(jié)果 用三種枯草芽孢桿菌制劑對鏈格孢霉和瓜果腐霉進(jìn)行生物防治的結(jié)果表明：枯草芽孢桿菌F1制劑對兩種病菌的防

18、治效果最好，其次F18相對較好，F(xiàn)2防治效果較低。（如圖11、12、13、14、15、16所示）圖11生物制劑對鏈格孢霉的抑制效果 圖12生物制劑對鏈格孢霉的抑制效果 圖13生物制劑對瓜果腐霉的抑制效果 圖14生物制劑對瓜果腐霉的抑制效果 圖15生物制劑對瓜果腐霉的抑制效果 圖16生物制劑對瓜果腐霉的抑制效果3 結(jié)論與討論在大血藤的種植過程中，病害的入侵成為影響大血藤生長的一個重要原因，容易造成減產(chǎn)的后果；另外，受病害入侵的大血藤提取物也可能會受到影響。隨著大血藤的大面積種植推廣，提出比較科學(xué)、有效的病害防治措施是十分必要的，本文立足于貴州黔東南州大血藤的當(dāng)前病害發(fā)生狀況，研究病害發(fā)病原因和鑒

19、定病原菌種類及其生物防治。通過科學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法，得出了引起大血藤正常生長的主要病害為葉斑病，且鑒定出引起病癥的病原菌主要為鏈格孢霉和瓜果腐霉。這對大血藤真菌和霉菌病害的預(yù)防和鑒定提供了一些理論依據(jù)。 鏈格孢霉屬鏈格孢屬，95%以上的鏈格孢屬種類兼性寄生于植物上，引起多種植物病害，造成全球性的田間和產(chǎn)后巨大的經(jīng)濟(jì)損失，鏈格孢還會引起水果腐霉病。瓜果腐霉則危害瓜類、豆類、茄科、煙草、玉米、棉花、甜菜等植物的幼苗及果實(shí)，引起幼苗猝倒，根莖和瓜果腐爛。本文通過三種枯草芽孢桿菌制劑對大血藤的病原菌進(jìn)行生物防治的結(jié)果表明：枯草芽孢桿菌F2制劑對兩種病原菌都有很好的抑制作用。這不僅對大血藤葉斑病的防治及其栽培

20、生產(chǎn)有了一定的理論依據(jù)和科學(xué)基礎(chǔ)，而且對其他植物真菌和霉菌病害的防治也有一定的參考價值。目前，國內(nèi)對大血藤病害研究的專業(yè)人員并不多，希望通過本文的研究結(jié)果能喚起很多對這方面研究頗深的人士對藥用植物病害研究的共鳴，大家投身于這項(xiàng)研究，造福于人們。參考文獻(xiàn)：1 倪士峰，傅承新，吳平.大血藤化學(xué)成分及藥學(xué)研究進(jìn)展J.中國野生植物資源，2004,23（4）:8-10.2 尹泉，李惠芬，周群，等.大血藤藥材及不同提取物FTIR的對比分析J.光譜學(xué)與光譜分析，2010,30（1）:54-57.3 張國輝，蔡凌云，張文華，劉冬蓮，陶敏.大血藤炭疽病的病原鑒定及病害分析J.中國農(nóng)學(xué)通報，2012,28（15）:207-210.4 陳燕清，顏流水，鄧春健，孫清華，等.中藥雞血藤與大血藤的化學(xué)模式識別研究J.南昌航空大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2011,25（3）:84-4.5 傅桂全.雞血藤與混淆品大血藤、過崗龍的鑒別J.海峽藥學(xué)，2008,20（6）：96-98.6 江蘇新醫(yī)學(xué)院編.中藥大辭典（上冊）.上海:上海人民出版社，1979.1227 古麗君，徐秉良，梁巧蘭，李榮峰.生物木霉菌T2菌株對禾草腐霉病抑菌作用及機(jī)制研究J.草業(yè)學(xué)報，2011,20（2）：46-51