細菌性食物中毒的實驗室支持泉州教學(xué)課件

1、細菌性食物中毒的實驗室支持泉州市疾控中心 鄭友限細菌性食物中毒的實驗室支持泉州市疾控中心 鄭友限食物中毒的概念定義：國家標(biāo)準(zhǔn)(GBl4938)中界定了食物中毒， 指攝入了含有生物性、化學(xué)性有毒有害物質(zhì)的食品或者把有毒有害物質(zhì)當(dāng)作食品攝入后出現(xiàn)的非傳染性(不屬于傳染病)的急性、亞急性疾病。 即食物中毒指通過飲料或食物及其盛具、容器、包裝材料進入人體的某種致病性微生物及其毒素、有害有毒的化學(xué)物質(zhì)(包括有毒動植物)等引起的，多數(shù)是以急性胃腸炎癥狀為主要特征的一群疾病。但不包括已知的傳染病，寄生蟲病、人畜共患性疾病、食物過敏和暴飲暴食所引起的急性胃腸炎等食源性疾病。食物中毒的概念定義：國家標(biāo)準(zhǔn)(GBl

2、4938)中界定了食物中食物中毒的特點 食物中毒常呈集體性爆發(fā)，其種類很多，病因也很復(fù)雜，一般具有下列共同特點： .潛伏期短，在短時間內(nèi)可能有很多人同時發(fā)病。 .有相似的臨床表現(xiàn)，病人都有大致相同的臨床表現(xiàn)。 .與飲食有關(guān)，凡進食某種有毒食品的人大都發(fā)病，沒有進食該種有毒食品的人不發(fā)病。發(fā)病和食物有明顯關(guān)系，一旦停止食用這種有毒食品，發(fā)病立即停止。 .發(fā)病率高、爆發(fā)性，人與人不傳染，一般沒有傳染病流行時的余波或拖尾現(xiàn)象。 (5).發(fā)病季節(jié)性強，一般多發(fā)于4-10月份，6-9月進入高峰期。食物中毒的特點 食物中毒常呈集體性爆發(fā)，其種類很多食物中毒分類一般按病原物質(zhì)，將食物中毒分為五類。.細菌性食

3、物中毒：是指由于食入被病原菌或其有毒代謝產(chǎn)物污染的食物后，所引起的以急性腸胃炎為主要中毒癥狀的疾病。.真菌性食物中毒：指食入被真菌及其毒素污染的食物而引起的食物中毒。 .動物性食物中毒：指攝入動物性有毒食品引起的食物中毒。 .植物性食物中毒：攝入植物性中毒食品引起的食物中毒。 .化學(xué)性食物中毒：攝入化學(xué)性有毒食品引起的食物中毒。 食物中毒分類一般按病原物質(zhì)，將食物中毒分為五類。細菌性食物中毒細菌性食物中毒：是指人們吃了大量活菌或活菌產(chǎn)的毒素養(yǎng)污染的食品所引起的種毒現(xiàn)象。細菌性食物中毒按發(fā)病機理又分為感染型食物中毒、毒素型食物中毒和混合型食物中毒。細菌性食物中毒細菌性食物中毒：是指人們吃了大量活

4、菌或活菌產(chǎn)的感染型食物中毒 指食物被污染并繁殖了大量食物中毒性微生物（包括病原菌和條件致病菌，如沙、志、金、變形、蠟樣、副溶、耶爾森、產(chǎn)氣莢膜梭菌、枯草桿菌等）這種含有大量活菌（一般在107/g以上）的食物被攝入機體后，引起一系列消化道癥狀的現(xiàn)象，稱為感染型食物中毒，此類種毒是由細菌本身引起。感染型食物中毒 指食物被污染并繁殖了大量食物中毒性毒素型食物中毒 食物被能產(chǎn)生毒素的微生物如葡萄球菌、肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等污染，并在適宜的條件下生長繁殖，產(chǎn)生了某種毒素，這種毒素同污染的微生物一起或單獨隨食物被攝入體內(nèi)，所引起的一系列的中毒現(xiàn)象，稱為毒素型食物中毒。毒素型食物中毒 食物被能產(chǎn)生毒素的微

5、生物如葡萄球菌、混合型食物中毒 有的細菌性食物中毒，有感染型食物中毒的特征，又具有毒素型食物中毒的特征，稱為混合型食物中毒。如產(chǎn)氣莢膜梭菌、蠟樣芽胞桿菌等引起的食物中毒，這種食物中毒在檢驗時，應(yīng)得視毒素養(yǎng)的檢測?；旌闲褪澄镏卸?有的細菌性食物中毒，有感染型食物中毒樣 品 采 集標(biāo)本是進行一切實驗室檢測的基礎(chǔ)；所有實驗室檢測的結(jié)果都依賴于所得到標(biāo)本的質(zhì)量；直接關(guān)系到實驗室檢測的準(zhǔn)確性與效率；樣 品 采 集標(biāo)本是進行一切實驗室檢測的基礎(chǔ)；食物中毒標(biāo)本的采集原則1 典型性原則食物中毒標(biāo)本的采集不同于衛(wèi)生評價采樣，應(yīng)根據(jù)可疑食物的性質(zhì)采集可能含毒最多的標(biāo)本。2 適時性原則為了防止可疑食物丟失和被檢物質(zhì)

6、組分發(fā)生變化，保證得到正確結(jié)論必須盡快采樣送檢。流調(diào)人員到達現(xiàn)場后應(yīng)及時采樣送檢。3 適量性原則 由于引起食物中毒的毒物種類繁多，有時需實驗室檢索的項目很多，這要求有一定的樣本量，在可能的情況下盡量多采。食物中毒標(biāo)本的采集原則1 典型性原則采樣前的準(zhǔn)備(1) 人員的準(zhǔn)備：一般要指派2名以上專業(yè)人員趕赴現(xiàn)場，必要時還需要檢驗人員和其他部門有關(guān)人員協(xié)作前往。 交通工具準(zhǔn)備： 在接到疑似食物中毒報告后，在城區(qū)1小時、郊區(qū)2小時內(nèi)到達現(xiàn)場。采樣前的準(zhǔn)備(1) 人員的準(zhǔn)備：一般要指派2名以上專業(yè)人員趕采樣前的準(zhǔn)備(2)調(diào)查采樣箱準(zhǔn)備：屬常用的物品，應(yīng)提前準(zhǔn)備，定期檢查，及時補充。常備以下物品： 1、采樣

7、工具：注射器、肛拭子、消毒棉簽、消毒紗布、調(diào)匙、勺子、夾子、鑷子、剪刀、酒精燈、標(biāo)號用品、 75%酒精、其他消毒滅菌器具、吸管、火柴等。 2、樣品容器：滅菌塑料袋、廣口瓶、滅菌試管、滅菌糞便盒、樣品冷藏設(shè)施等。 采樣前的準(zhǔn)備(2)調(diào)查采樣箱準(zhǔn)備：屬常用的物品，應(yīng)提前準(zhǔn)備采樣前的準(zhǔn)備(3)現(xiàn)場快速檢驗、測量設(shè)備：食物中毒快速檢樣箱，食品溫度測試計、消毒劑濃度檢測試紙等。調(diào)查用表：食物中毒事故個案調(diào)查登記表、調(diào)查筆錄、樣品采集記錄表、樣品送檢單、調(diào)查結(jié)果匯總表、空白紙等參考資料：食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)、有關(guān)衛(wèi)生部規(guī)章、參考書籍等。其它有關(guān)物品：如便攜式電腦、手機或?qū)χv機等通訊設(shè)施以及用于保存運送培養(yǎng)基的

8、冰箱、冰塊等 取證工具：照相機、攝像機等采樣前的準(zhǔn)備(3)現(xiàn)場快速檢驗、測量設(shè)備：食物中毒快速檢樣采樣用容器和試劑要求1. 采樣容器應(yīng)采用潔凈、無色、無毒的聚乙烯塑料或硬質(zhì)玻璃（又稱硼硅玻璃）。樣品瓶必須專瓶專用，切不可用實驗室裝過試劑的瓶作采樣瓶。2.用于微生物檢驗容器基本要求是選耐高溫、無毒、耐用材料制成，容器包裝好后可防滲漏，能承受空中或地面運送過程中可能發(fā)生的溫度和壓力變化。所有采樣用具、容器需嚴(yán)格滅菌，并且不能存放過長時間，防止污染影響檢驗結(jié)果。、采樣用的生理鹽水、運送培養(yǎng)基及有關(guān)試劑等都應(yīng)該滿足新鮮、無菌的要求，同時應(yīng)符合采樣所需要的試劑量，如運送糞便的培養(yǎng)基為5ml/管為宜。采樣

9、用容器和試劑要求1. 采樣容器應(yīng)采用潔凈、無色、無毒的聚細菌性食物中毒標(biāo)本的采集（1）剩余食物：采集殘余食物時應(yīng)盡量避免采集不相干的標(biāo)本。殘余食物用滅菌工具采取，置于滅菌容器內(nèi)。如無剩余食物，可用滅菌棉拭在可疑食物容器內(nèi)涂擦，置于裝有少量生理鹽水試管內(nèi)。體積較大的肉及魚等，應(yīng)將表面燒灼滅菌后割取內(nèi)部肌肉，置于滅菌容器內(nèi)?？赡墓揞^可直接送檢，如僅剩余空盒，可將空盒送檢。炊事用具：如鍋、刀、抹布、砧板等，可用棉試大用具上涂擦，置于裝有少量生理鹽水的試管中。如砧板已洗過，可用刀用力刮取表面層木屑，置于滅菌容器中。細菌性食物中毒標(biāo)本的采集（1）剩余食物：采集殘余食物時應(yīng)盡量細菌性食物中毒標(biāo)本的采集（

10、2）糞便、肛拭：糞便標(biāo)本應(yīng)盡量在病程早期和治療前采集，同時應(yīng)采集新鮮糞便，選取有膿血、粘液部分3-5克、水樣便取含絮狀物的2-5ml，盛于無菌容器中及時送檢。若無法獲得糞便時，可用保存液或增菌液濕潤過的棉拭子插入肛門4-5cm深處（小兒2-3cm），輕輕轉(zhuǎn)動一圈，擦取直腸表面的黏液后取出，盛入運送培養(yǎng)基或保存液中送檢。注意為保證多個檢驗項目的開展，同一病人應(yīng)至少采集2支肛拭 細菌性食物中毒標(biāo)本的采集（2）糞便、肛拭：糞便標(biāo)本應(yīng)盡量在病細菌性食物中毒標(biāo)本的采集（3）嘔吐物：直接放入無菌容器中及時送檢 咽拭樣品：采集時應(yīng)將棉簽檫拭咽喉及扁桃體紅腫處（特別是白膜處），然后將棉簽插入4-5ml生理鹽水

11、中，尾部棄去 血液：采集患者急性發(fā)病期（3天內(nèi)）和恢復(fù)期（2周左右）各3ml全血分離血清送檢細菌性食物中毒標(biāo)本的采集（3）嘔吐物：直接放入無菌容器中及時檢驗項目霍亂弧菌、副溶血弧菌及其它致病性弧菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌、沙門菌、變形桿菌、致瀉性大腸埃希菌、空腸彎曲菌、小腸結(jié)腸耶爾森菌、志賀菌、溶血性鏈球菌及單核細胞增生李斯特菌等引起的細菌性食物中毒樣品檢驗 檢驗項目霍亂弧菌、副溶血弧菌及其它致病性弧菌、金黃色葡萄球菌中毒特征名稱常見食物潛伏期病程主要癥狀重點采集標(biāo)本沙門氏菌肉蛋類4-48h3-7d惡心 嘔吐 腹痛 腹瀉發(fā)熱38-40便 食品 血副溶血弧菌水產(chǎn)品3-24h1-3d嘔吐 發(fā)

12、熱 腹痛以上腹部為主 水樣便腹瀉便 食品變形桿菌肉蛋及水產(chǎn)品5-18h1-3d惡心 嘔吐 腹痛 腹瀉發(fā)熱38左右食品 便致瀉性大腸涼拌菜4-44h1-3d嘔吐腹痛 腹瀉水樣便或粘液便 發(fā)熱39便 食品蠟樣芽孢桿菌米飯、肉、乳嘔吐型0.5-5h腹瀉型8-16h1d惡心 嘔吐為主腹痛 腹瀉為主食品 嘔吐物葡萄球菌肉、乳、蛋2-4h1-2d惡心 頻繁劇烈嘔吐 腹痛 腹瀉食品 嘔吐物糞鏈球菌肉、乳、蛋、冷凍食品5-10h1-2d惡心 嘔吐 腹痛 腹瀉食品 嘔吐物糞便肉毒梭菌罐頭、腌制品1-7d2-20d吞咽困難 復(fù)視 失音 呼吸困難食品 嘔吐物血液1910/3/2022中毒特征常見食物潛伏期病程主要癥

13、狀重點采集標(biāo)本沙門氏菌肉蛋類檢驗宗旨竭盡全力盡快找到病原體快速、準(zhǔn)確可與傳統(tǒng)方法不一定完全相同 檢驗宗旨竭盡全力盡快找到病原體檢驗程序 樣品采集 初步檢驗活菌數(shù)、直接鏡檢(涂片染色鏡檢) 各種致病菌熒光PCR篩查 分離培養(yǎng) (包括增菌培養(yǎng)和直接平板培養(yǎng)) 初篩試驗 純培養(yǎng) 全面鑒定（生化試驗、血清分型、噬菌體試驗等） 報告檢驗程序 樣品采集直接涂片染色鏡檢 觀察存在于檢品中特種形態(tài)的細菌如霍亂弧菌、彎曲菌、球菌等，為進一步的檢驗提供有用的信息 直接涂片染色鏡檢 檢樣的處理病源檢樣因含較多病原菌而一般無須做預(yù)增菌處理，但若病源檢樣為服過抗生素后采集的檢樣應(yīng)按檢驗項目要求而進行預(yù)增菌處理以保護和放

14、大目的病原菌直接插入2ml 預(yù)增管37預(yù)增菌46h 檢樣的處理病源檢樣因含較多病原菌而一般無須做預(yù)增菌處理，但若直接培養(yǎng)將無須做增菌處理的病源檢樣按檢驗項目要求直接接種于各相應(yīng)培養(yǎng)基 直接培養(yǎng)增菌及分離培養(yǎng)將預(yù)增菌處理后的服過抗生素后采集的病源檢樣按檢驗項目要求接種各相應(yīng)增菌液進行增菌 增菌培養(yǎng)后接種于各相應(yīng)選擇性培養(yǎng)基進行分離培養(yǎng)增菌及分離培養(yǎng)初篩試驗克氏雙糖/三糖鐵/腸道綜合發(fā)酵管1、管2PCRVIDAS初篩試驗可疑菌的鑒定全面生化試驗（API、ATB、VETIK、IDS、SWF、手工鑒定等） 噬菌體試驗 血清分型 毒素或毒素基因測試 可疑菌的鑒定全面生化試驗（API、ATB、VETIK、

15、IDS毒素或毒素基因測試霍亂弧菌腸毒素、葡萄球菌腸毒素、EIEC侵襲毒素、ETEC腸毒素按國標(biāo)方法進行動物試驗或酶聯(lián)免疫試驗（VIDAS等）毒素基因測試：霍亂弧菌腸毒素、葡萄球菌腸毒素、致瀉性大腸埃希菌的所有毒力基因均可用PCR檢測，特別是對致瀉性大腸埃希菌的定論應(yīng)以毒素或毒素基因為準(zhǔn) 毒素或毒素基因測試霍亂弧菌腸毒素、葡萄球菌腸毒素、EIEC侵患者血清的試驗疑似傷寒或副傷寒的患者應(yīng)取發(fā)病一周的血清做肥達氏反應(yīng)，用作輔助診斷 將患者急性期和恢復(fù)期的血清做凝集效價的對比，4倍增長可確診患者血清的試驗疑似傷寒或副傷寒的患者應(yīng)取發(fā)病一周的血清做肥達檢驗結(jié)果的判定應(yīng)以找到病原體或其毒素為最終結(jié)論，在此

16、之前所有的快速檢驗方法如PCR、VIDAS等得到的結(jié)果僅供參考 應(yīng)注意非病源檢樣與病源檢樣檢出的病原體的統(tǒng)一性 檢驗結(jié)果的判定應(yīng)以找到病原體或其毒素為最終結(jié)論，在此之前所有檢驗結(jié)果的判定原則（1）多數(shù)患者樣品中檢出的致病意義明確的細菌在種類、生化和/或血清型、毒素型均一致時，可報告為細菌性食物中毒的病原體檢驗結(jié)果的判定原則（1）多數(shù)患者樣品中檢出的致病意義明確的細檢驗結(jié)果的判定原則（2）非病源檢樣與病源檢樣檢出占絕對優(yōu)勢但通常致病意義不甚明確的細菌如大腸艾希菌、溶藻弧菌等，且其在種類、生化和/或血清型均一致，同時本次細菌性食物中毒事件中非患者對照標(biāo)本中未檢出該菌時，應(yīng)做該菌的毒素、毒素基因或動

17、物試驗，陽性結(jié)果可報告為細菌性食源性疾病事件的病原體檢驗結(jié)果的判定原則（2）非病源檢樣與病源檢樣檢出占絕對優(yōu)勢但檢驗結(jié)果的判定原則（3）樣品中檢出的生化、血清符合致瀉性大腸艾希菌、金黃色葡萄球菌，一定要以毒素、毒素基因測試陽性為最終結(jié)論報告蠟樣芽胞桿菌在非病源檢樣中須達到105 cfu/g (ml)以上者才有報告價值 檢驗結(jié)果的判定原則（3）樣品中檢出的生化、血清符合致瀉性大腸細菌檢驗重要篩檢試驗接觸酶試驗氧化酶試驗細菌檢驗重要篩檢試驗接觸酶試驗氧化酶試驗用于分辨G-桿菌中腸桿菌科及弧菌科兩類細菌 革蘭陰性桿菌 陽性反應(yīng)弧菌科 陰性反應(yīng)腸桿菌科氧化酶試驗用于分辨G-桿菌中腸桿菌科及弧菌科兩類細

18、菌接觸酶試驗用于分辨葡萄球菌及鏈球菌 革蘭陽性球菌 陽性反應(yīng)葡萄球菌 陰性反應(yīng)鏈球菌接觸酶試驗用于分辨葡萄球菌及鏈球菌沙門氏菌檢測沙門氏菌檢測沙門氏菌食物中毒主要特征來源: 生食和烹飪不完全的食物，主要是肉類蛋品。癥狀：惡心嘔吐、胃痛、腹瀉、出冷汗、發(fā)燒（38-40）。較重者可出現(xiàn)煩躁不安、昏迷、譫語、抽搐等中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，也可以出現(xiàn)尿少、尿閉，呼吸困難等癥狀。同時還出現(xiàn)面色蒼白、口唇青紫、四肢發(fā)涼、血壓下降等周圍循環(huán)衰竭癥狀，甚至休克，如不及時救治，最后可因循環(huán)衰竭而死亡。潛伏期一般為1236h，短者6h，長者4872h。沙門氏菌食物中毒主要特征來源: 生食和烹飪不完全的食物，主腸熱癥-是

19、傷寒病和副傷寒病的總稱，主要由傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引起。急性腸炎（食物中毒）-是最常見的沙門桿菌感染。多由鼠傷寒桿菌、豬霍亂桿菌、腸炎桿菌等引起。敗血癥-常由豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌、鼠傷寒桿菌、腸炎桿菌等引起。細菌性食物中毒的實驗室支持泉州教學(xué)課件概況1880年發(fā)現(xiàn)，至今已有2600種有動力（除雞-雛沙門菌）大多產(chǎn)H2S （除副甲傷寒沙門菌等）產(chǎn)酸大多產(chǎn)氣（除傷寒、雞-雛沙門菌）靛基質(zhì)-、蔗糖-、乳糖-甘露醇+符合腸桿菌科特征（葡萄糖+、硝酸鹽還原+、氧化酶-）概況1880年發(fā)現(xiàn)，至今已有2600種細菌性食物中毒的實驗室支持泉州教學(xué)課件細菌性食物中毒的實驗室支持泉州教學(xué)課件細菌

20、性食物中毒的實驗室支持泉州教學(xué)課件細菌性食物中毒的實驗室支持泉州教學(xué)課件細菌性食物中毒的實驗室支持泉州教學(xué)課件檢 樣25g(ml)樣品+225mlBPW1ml+TTB10ml1ml+SC10ml361 ，8h-18hBSXLD(或HE、顯色培養(yǎng)基)挑取可疑菌落 42 1 ，18h24h 36 1 ，18h24h36 1 ，40h48h36 1 ，18h24h沙門氏菌檢驗程序檢 樣25g(ml)樣品+225mlBPW1ml+TTB10生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)+A1A2A3反應(yīng)結(jié)果與左側(cè)描述不符 甘露醇+、山梨醇+ ONPG- 沙門氏菌，血清學(xué)試驗 非沙門氏菌 報 告TSI，賴氨酸

21、，NA，靛基質(zhì)，尿素（pH7.2），KCN生化鑒定A1A2A3反應(yīng) 甘露醇+、山梨醇+ ONPG- 沙沙門氏菌菌落形態(tài)BS瓊脂：培養(yǎng)4048h，菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，光滑、邊緣整齊、圓形，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形態(tài)成灰綠色菌落，周圍培養(yǎng)基不變。HE瓊脂：藍綠色或藍色，透明、光滑、濕潤、邊緣整齊、圓形，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。XLD瓊脂：菌落呈粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色，帶或不帶黑色中心。沙門氏菌菌落形態(tài)BS瓊脂：培養(yǎng)4048h，菌落為黑色有金屬沙門氏

22、菌菌落形態(tài)BS沙門氏菌菌落形態(tài)亞硫酸鉍瓊脂（BS）黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。沙門氏菌菌落形態(tài)PDF 文件使用 pdfFactory Pro 試用版本創(chuàng)建 亞硫酸鉍瓊脂（BS）黑色有金屬光澤、沙門氏菌菌落形態(tài)PDF 沙門氏菌菌落形態(tài)XLDXLD瓊脂：粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落，帶或不帶黑色中心。沙門氏菌菌落形態(tài)XLD瓊脂：粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些沙門氏菌菌落形態(tài)HEl 沙門氏菌在HE瓊脂上的菌落形態(tài)：藍綠色或藍色，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑

23、色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。沙門氏菌菌落形態(tài)l 沙門氏菌在HE瓊脂上的菌落形態(tài)：藍綠色或PDF 文件使用 pdfFactory Pro 試用版本創(chuàng)建 沙門氏菌顯色培養(yǎng)基-CHROPDF 文件使用 pdfFactory Pro 試用版本生化試驗自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂，先在斜面劃線，再于底層穿刺；接種針不要滅菌，直接接種賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板，于36 1 培養(yǎng)18 h24 h，必要時可延長至48 h。PDF 文件使用 pdfFactory Pro 試用版本創(chuàng)建 生化試驗自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典PDF 文件使用血清學(xué)鑒

24、定血清學(xué)鑒定中的血清學(xué)分型為選擇性試驗項目.目前根據(jù)對某一特定O抗原共同具有的標(biāo)準(zhǔn)，將沙門氏菌屬分為AZ和O51 O67共42個O群，58種O抗原，63種H抗原。到1987年底為止，已有2213個血清型。我國已發(fā)現(xiàn)26個菌群、161個血清型。血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定中的血清學(xué)分型為選擇性試驗項目.細菌性食物中毒的實驗室支持泉州教學(xué)課件沙門氏菌的血清分型沙門氏菌主要有O和H兩種抗原。少數(shù)菌具有表面抗原Vi。在這些菌群中，對人致病的沙門氏菌，通常為屬于AF各O群的常見菌型。故用AF多價O血清對沙門氏菌進行的菌型鑒定，只是對于O抗原的第一步鑒定。若待測菌型不屬于A到F群，仍要繼續(xù)使用其他沙門氏菌因子血清

25、中的多價O血清繼續(xù)鑒定。而在確定了所屬O群之后，還要進行H抗原的鑒定。必要時，還需進行Vi抗原的鑒定。 沙門氏菌的血清分型沙門氏菌主要有O和H兩種抗原。少數(shù)菌具有表沙門氏菌血清試驗致病性的沙門氏菌絕大多數(shù)血清歸在A-F群內(nèi)，所以檢出疑似菌株應(yīng)先凝集A-F群O多價血清，若凝集可按常見O因子檢出頻率，按照O4O10O9O7O8O19O2O11順序凝集，可節(jié)省時間。H抗原可先凝集H多價1H多價4，再逐個凝集某個H多價凝集所含的H單因子血清。傷寒和丙型副傷寒桿菌在A-F群多價血清不凝集情況下，還應(yīng)做Vi血清凝集。沙門氏菌血清試驗致病性的沙門氏菌絕大多數(shù)血清歸在A-FP第1位數(shù) 第2位數(shù) 第3位數(shù)第4位

26、數(shù)第5位數(shù)第6位數(shù)第7位數(shù)ON ADHGLDCODCCITH U2 RS ETDAINDVPGELGLUMANINOSORRGASACMELAMYARA結(jié)O 果X 判定12412 4124124124124124反應(yīng)結(jié)果 沙門氏菌應(yīng)得數(shù)值02412 4000004124104020組合編碼6704752API 20EPDF 文件使用 pdfFactory Pro 試用版本創(chuàng)建 沙門氏菌生化鑒定P第1位數(shù) 第2位數(shù) 第3位數(shù)第4位數(shù)第5位數(shù)第6位數(shù)第志賀氏菌檢測志賀氏菌檢測概況至今已有4群（A、B、C、D）、32種（A-痢疾志賀菌10個血清型； B 福氏志賀菌6個血清型+X、Y變種；C-鮑氏志賀

27、菌15個血清型、D-宋內(nèi) 1個血清型，S，R兩相）無動力乳糖- （除宋內(nèi)遲緩發(fā)酵+）不產(chǎn)H2S產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（除F6產(chǎn)極少量氣泡）靛基質(zhì)大多+（宋內(nèi)-）、蔗糖-甘露醇+（痢疾志賀菌為-）符合腸桿菌科特征（葡萄糖+、硝酸鹽還原+、氧化酶-）概況至今已有4群（A、B、C、D）、32種（A-痢疾志賀菌1增菌：用GN增菌液使處于瀕死狀態(tài)的細菌恢復(fù)活力選擇性平板分離培養(yǎng)：XLD+MAC/顯色培養(yǎng)基生化試驗：可采用API 20E或VITEK2血清學(xué)鑒定：特異性診斷血清鑒定到種。 志賀氏菌操作流程增菌：用GN增菌液使處于瀕死狀態(tài)的細菌恢復(fù)活力選擇性平板分離增 菌 培 養(yǎng)用志賀氏菌增菌液增菌, 41.5 ，16

28、h20 h厭氧培養(yǎng)。增 菌 培 養(yǎng)用志賀氏菌增菌液增菌, 智能厭氧微需氧培養(yǎng)系統(tǒng)智能厭氧微需氧培養(yǎng)系統(tǒng)（二）分 離 培 養(yǎng)取增菌后的GN增菌液或志賀氏增菌肉湯分別劃線接種于XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或R&F志賀氏菌顯色培養(yǎng)基平板上于36 1 培養(yǎng)20 h24 h，觀察各個平板上生長的菌落形態(tài)若出現(xiàn)的菌落不典型或菌落較小不易觀察，則繼續(xù)培養(yǎng)至48 h再進行觀察。（二）分 離 培 養(yǎng)取增菌后的GN增菌液或志賀氏增菌肉湯分別細菌性食物中毒的實驗室支持泉州教學(xué)課件細菌性食物中毒的實驗室支持泉州教學(xué)課件初步生化鑒定 從平板上挑取34個可疑菌落，接種TSI和葡萄糖半固體培養(yǎng)基各一管，36培養(yǎng)1824h

29、。初步生化鑒定 從平板上挑取34個可疑菌落，接種TS初步生化鑒定TSI生長結(jié)果（現(xiàn)象）：斜面產(chǎn)堿仍為粉紅色或紅色；底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，變黃色；不產(chǎn)硫化氫，不產(chǎn)黑色。半固體培養(yǎng)基：沿線生長，無動力。初步生化鑒定TSI生長結(jié)果（現(xiàn)象）：初步生化鑒定可棄去地培養(yǎng)物：在TSI表面呈蔓延生長的。1824h內(nèi)發(fā)酵乳糖、庶糖的。不分解葡萄糖，只在半固體培養(yǎng)基表面生長的。產(chǎn)氣的。有動力的。產(chǎn)硫化氫的。初步生化鑒定可棄去地培養(yǎng)物：細菌性食物中毒的實驗室支持泉州教學(xué)課件細菌性食物中毒的實驗室支持泉州教學(xué)課件細菌性食物中毒的實驗室支持泉州教學(xué)課件血清學(xué)分型（選做項目） 先用四種志賀氏菌多價血清檢查，如果呈現(xiàn)凝集，則再用

30、相應(yīng)各群多價血清分別試驗。先用B群福氏志賀氏菌多價血清進行實驗，如呈現(xiàn)凝集，再用其群和型因子血清分別檢查，福氏志賀氏菌各型和亞型的型抗原和群抗原鑒別見表4。如果B群多價血清不凝集，則用D群宋內(nèi)氏志賀氏菌血清進行實驗，如呈現(xiàn)凝集，則用其相和相血清檢查；如果B、D群多價血清都不凝集，則用A群痢疾志賀氏菌多價血清及112各型因子血清檢查，如果上述三種多價血清都不凝集，可用C群鮑氏志賀氏菌多價檢查，并進一步用118各型因子血清檢查。 血清學(xué)分型（選做項目）志賀氏菌的O抗原人們原來的認(rèn)識認(rèn)為血清學(xué)試驗是特異性的，但是志賀氏菌的 O抗原和大腸埃希氏菌屬關(guān)系密切，有半數(shù)的菌型與大腸埃希氏菌的某些O抗原完全相

31、同。相同抗原菌屬間存在血清交叉凝集反應(yīng)。因此，生化試驗對于屬的鑒定是非常重要的。志賀氏菌的O抗原人們原來的認(rèn)識認(rèn)為血清學(xué)試驗是特異性的，但是若生化反應(yīng)符合，而血清四種多價-，考慮：A、C群志賀菌O抗原外有K包膜抗原遮蔽，煮沸后再凝可能是EIEC，再做大生化以鑒別宋內(nèi) 的R相菌，用R相血清凝集可能是蜂窩哈夫尼亞菌，做大生化以鑒別可能是類志賀鄰單胞菌，觀察動力、氧化酶若生化反應(yīng)符合，而血清四種多價-，考慮：報告方式痢疾志賀菌1型 福氏志賀菌2a型福氏志賀菌X變種 鮑氏志賀菌13型宋內(nèi)志賀菌S相報告方式痢疾志賀菌1型 福建省福氏志賀菌優(yōu)勢血清型別 2005首次檢出福氏志賀菌4c血清亞型（F4c），在

32、隨后的分離株中F4c亞型成為福建省福氏志賀菌分離株的優(yōu)勢血清型17/40(42.5%) 繼往流行的福氏2a、1b 血清亞型分離的菌株數(shù)卻減少 說明福建省福氏志賀菌優(yōu)勢血清型別在發(fā)生更替 。福建省福氏志賀菌優(yōu)勢血清型別 2005首次檢出福氏志賀菌4金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌金葡菌食物中毒主要特征來源：主要存在于人們的皮膚、鼻、喉、耳等部位。進食了被污染的肉類、乳品、定粉制品。癥狀：惡心、嘔吐（頻繁而劇烈），腹痛、腹瀉，由于劇烈嘔吐和腹瀉，可引起大量失水而發(fā)生外周循環(huán)衰竭和虛脫。潛伏期：一般30min6h，最短為15min左右，很少有超過8h的。金葡菌食物中毒主要特征來源：主要存在于人們的皮膚、

33、鼻、喉、耳金黃色葡萄球菌檢驗流程食物25g+生理鹽水225mL，取5mL50mL7.5NaCl肉湯血平板、B-P平板3624h染色鏡檢血漿凝固酶實驗觀察菌落形態(tài)報告嘔吐物、糞便肛拭了、涂抹拭子3個連續(xù)稀釋度接種B-P平板3648h10mL7.5NaCl肉湯BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂斜面金黃色葡萄球菌檢驗流程食物25g+生理鹽水225mL，取5金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)B-P瓊脂：菌落圓形、凸起、濕潤，直徑23mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈，接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣硬度，偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落，但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落

34、比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。血平板：形成較菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色（有時為白色），菌落周圍可見完全透明溶血圈。金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)B-P瓊脂：菌落圓形、凸起、濕潤，直徑BP平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素和痕量礦物元素丙酮酸鈉是一種生長促進劑亞碲酸鹽對除金黃色葡萄球外的其他能分解卵黃的菌株有毒性，并使菌落產(chǎn)生黑色卵黃提供營養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán)甘氨酸和氯化鋰對金黃色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。BP平板：金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)完全溶血和不完全溶血溶血溶血完全溶血和不完全溶血溶血溶血血漿凝固酶實驗可疑菌落1個

35、（計數(shù)時取5個菌落分別接種）5mLBHI和營養(yǎng)瓊脂斜面，36培養(yǎng)24h0.20.3mLBHI培養(yǎng)物+0.5mL兔血漿36水浴箱或培養(yǎng)箱每半小時觀察一次,觀察6小時凝固為陽性,反之為陰性（同時以血漿凝固酶陽性和陰性葡萄球菌株的肉湯培養(yǎng)物作對照）。血漿凝固酶實驗可疑菌落1個（計數(shù)時取5個菌落分別接種）5m細菌性食物中毒的實驗室支持泉州教學(xué)課件4、金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測 一、動物學(xué)試驗主要用幼貓和猴。 二、血清學(xué)試驗?zāi)c毒素作為抗原，可以和特異性抗體發(fā)生結(jié)合性反應(yīng)，產(chǎn)生可見沉淀。 用血清學(xué)反應(yīng)檢驗金黃色葡萄球菌腸毒素，方法主要有： 免疫瓊脂擴散法 反向間接血凝試驗 免疫熒光法 酶聯(lián)免疫吸附法三、實

36、時熒光定量PCR4、金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測副溶血性弧菌副溶血性弧菌 副溶血性弧菌食物中毒是我國沿海地區(qū)、我省最常見的一種食物中毒 副溶血性弧菌食物中毒是我國沿海地區(qū)、我省最常見的一概況副溶血弧菌系弧菌科弧菌屬，革蘭染色陰性，兼性厭氧菌，為多 形態(tài)桿菌或稍彎曲弧菌。本菌嗜鹽畏酸。最適宜的培養(yǎng)基：溫度為3037，含鹽2.5%3%(若鹽濃度低于0.5%則不生長），pH值為8.08.5。本菌對酸較敏感，當(dāng)pH6以下即不能生長，在普通食醋中l(wèi)一3min即死亡。在固體培養(yǎng)基上菌落常隆起，圓形，表面光滑，濕潤。在3一35含鹽水中繁殖迅速，每89min為一周期。對高溫抵抗力小，50 20 min；65 5

37、 min 或80 1 min 即可被殺死。本菌對常用消毒劑抵抗力很弱，可被低濃度的酚和煤酚皂溶液殺滅。 概況副溶血弧菌系弧菌科弧菌屬，革蘭染色陰性，兼性厭氧菌，為多概況氧化酶試驗：副溶為氧化酶陽性三糖鐵試驗：底層變黃，斜面不變或紅色加深、無硫化氫、無氣泡、有動力。 嗜鹽性試驗：副溶在無氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不生長或微弱生長，在7%氯化鈉的胰胨水中生長旺盛。概況弧菌屬中的鑒別特點梅氏弧菌氧化酶陰性，其余陽性蔗糖陰性：副溶血弧菌、創(chuàng)傷弧菌、擬態(tài)弧菌、霍利斯弧菌、其余的在TCBS上為黃色菌落。無鹽生長：霍亂、擬態(tài)10%NaCl生長：溶藻弧菌?；【鷮僦械蔫b別特點梅氏弧菌氧化酶陰性，其余陽性副溶

38、血性弧菌檢驗流程糞便、嘔吐物、拭子食物25g+3NaCl堿性胨水225mL，37，816hTCBS平板，37，1824h3TSA純化，37，1824h初步鑒定；3TSI、革蘭染色、氧化酶實驗、嗜鹽性實驗生化試驗（接種含3氯化鈉生化試劑）報告3NaCl堿性胨水10mL，37，816h副溶血性弧菌檢驗流程糞便、嘔吐物、拭子食物25g+3Na副溶血性弧菌菌落形態(tài)TCBS瓊脂：呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落，接種環(huán)輕觸，有類似口香糖的質(zhì)感，直徑23mm。涂片鏡檢：革蘭氏陰性，呈棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài)，無芽胞，有鞭毛。副溶血性弧菌菌落形態(tài)TCBS瓊脂：呈圓形、半透明、表面光滑的副溶血性弧菌菌落特

39、征副溶血性弧菌菌落特征副溶血性弧菌菌落特征霍亂、副溶、隨培養(yǎng)時間的延長霍亂的黃色菌落逐漸變藍 副溶血性弧菌菌落特征鑒定生化性狀：葡萄糖+、分解葡萄糖產(chǎn)氣-、甘露醇+、H2S-、氧化酶+、動力+、蔗糖-、乳糖-、賴氨酸脫羧酶+、V-P-、ONPG-。嗜鹽試驗：10氯化鈉胰胨水不生長或微弱生長，7氯化鈉胰胨水生長旺盛。鑒定生化性狀：葡萄糖+、分解葡萄糖產(chǎn)氣-、甘露醇+、H2S-變形桿菌變形桿菌概況變形桿菌屬(Proteus) 包括: 普通變形桿菌(Pvulgaris) 奇異變形桿菌(P. mirabilis) 產(chǎn)粘變形桿菌（P.myxofaciens）。 變形桿菌為革蘭氏陰性桿菌，兩端鈍圓，有明顯

40、的多形性。無芽孢無莢膜，有周身鞭毛，運動活潑。為需氧或兼性厭氧，對營養(yǎng)要求不高，生長溫度為1043。 不耐熱，60530min皆可殺死。 變形桿菌可產(chǎn)生腸毒素，此腸毒素為蛋白質(zhì)和碳水化合物的復(fù)合物，具抗原性。概況變形桿菌屬(Proteus) 包括:變形桿菌檢驗流程食品加適量生理鹽水制成混懸液計數(shù)選擇性SS、EMB培養(yǎng)基，37，1824hTSI，37，24h生化試驗血清學(xué)實驗報告GN，37，24h糞便、嘔吐物、拭子、涂抹液變形桿菌檢驗流程食品加適量生理鹽水制成混懸液計數(shù)選擇性SS、變形桿菌菌落形態(tài)SS瓊脂：形成單個菌落，菌落圓形、扁薄透明或半透明，有的菌落邊緣呈擴散狀，對光觀察，菌落周圍淡藍色中

41、心稍厚，有黏性，打開平皿時有臭味。EMB瓊脂：無色透明菌落，普通變形桿菌和奇異變形桿菌在伊紅美藍平板上可呈現(xiàn)片狀蔓延生長。變形桿菌菌落形態(tài)SS瓊脂：形成單個菌落，菌落圓形、扁薄透明或變形桿菌菌落特征普平變形桿菌菌落特征鑒定生化實驗：乳糖反應(yīng)陰性（TSI斜面紅色）、葡萄糖產(chǎn)酸（TSI底層黃色）產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，硫化氫陽性或陰性、尿素陽性、苯丙氨酸陽性者進行系統(tǒng)生化鑒定，判定種屬或群。血清學(xué)實驗：變形桿菌食物中毒需對來自可疑食物與患者的菌株進行血清型別鑒定，以判定其同源性，方法：將待試菌株分別點種在普通營養(yǎng)瓊脂平板的兩端，待兩側(cè)的菌株蔓延生長到平板中間，菌苔完全融合，說明兩株細菌沒有拮抗現(xiàn)象。鑒

42、定生化實驗：乳糖反應(yīng)陰性（TSI斜面紅色）、葡萄糖產(chǎn)酸（T蠟樣芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌食物中毒主要特征來源：米食、乳制品、畜禽肉類制品、等。剩飯，特別是大米飯，其次小米飯、高粱米飯等剩飯。除米飯有時微有發(fā)粘、入口不爽或稍帶異味外，大多數(shù)食品的感官性狀正常。 癥狀：嘔吐型：主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹痛，腹瀉。此外，頭昏、四肢無力、口干、寒戰(zhàn)、結(jié)膜充血等癥亦有發(fā)生。該型主要是由剩米飯或炒飯引起的。該菌易在米飯中繁殖并產(chǎn)生耐熱性腸毒素。與葡萄球菌食物中毒在潛伏期、中毒表現(xiàn)方面非常相似，易混淆。腹瀉型：主要表現(xiàn)有腹瀉、腹痛。水樣便，一般無發(fā)熱，可有輕度惡心，但嘔吐罕見。病程稍長，16136h。主要是蠟樣芽孢桿菌在食品中產(chǎn)生不耐熱腸毒素所致,與產(chǎn)氣莢膜梭菌食物中毒相似，應(yīng)注意鑒別潛伏期：嘔吐型：潛伏期一般13h ，短者0.5h，長者5h ；腹瀉型 ：潛伏期長,一般1012h , 短者6h ,長者16h 。 蠟樣芽孢桿菌食物中毒主要特征來源：米食、乳制品、畜禽肉類制品概況革蘭氏陽性、能形成芽孢、需氧或兼性厭氧大